第一节PCR工作原理和方式 第二节PCR产物的克隆方法 第三节扩增未知DNA的PCR 第四节与反转录相关的PCR 圈 第五节PCR产生DNA指纹 第六节实时定量PCR 圈 圈
第一节 PCR工作原理和方式 第二节 PCR产物的克隆方法 第三节 扩增未知DNA的PCR 第四节 与反转录相关的PCR 第五节 PCR产生DNA指纹 第六节 实时定量PCR
第八章PCR技术及其应用 PCR:polymerase chain reaction 聚合酶链式反应。 概念：通过体外模拟体内DNA复制的方式，在体外选择 性地将DNA某个特殊区域扩增出来的技术。 ■基于DNA在生物体内的复制模式而设计的 体内复制过程： DNA解旋酶、，解链酶解开双链 引物酶合成RNA引物 DNA聚合酶引导DNA5'-3'合成
第八章 PCR技术及其应用 ▪ PCR：polymerase chain reaction ▪ 聚合酶链式反应。 ▪ 概念：通过体外模拟体内DNA复制的方式，在体外选择 性地将DNA某个特殊区域扩增出来的技术。 ▪ 基于DNA在生物体内的复制模式而设计的 体内复制过程： DNA解旋酶、解链酶解开双链 引物酶合成RNA引物 DNA聚合酶引导DNA5’-3’合成
DNA,生命的蓝图 年g年年年g年g年年年 31 cG G The two strands of the parental double helix unwind, and each specifies a new daughter strand by base-pairing rules Old Old -AT A CG New Minor Major ●●V groove -TA TA 5 3 B.DNA(B conformation) CG
DNA， 生命的蓝图
PCR的发明 1971年，Khorana提出：经过DNA变性，与合适 引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重 复该过程便可克隆基因。 但由于测序和引物合成的困难，以及70年代基因 工程技术的发明使克隆基因成为可能，所以， Khorana的设想被人们遗忘了. 1983年的春夏之交，Mullis先生的一次意外之旅，在 美国加州的101国道上产生了PCR技术
1983年的春夏之交，Mullis先生的一次意外之旅，在 美国加州的101国道上产生了PCR技术。 1971年，Khorana提出：经过DNA变性，与合适 引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重 复该过程便可克隆基因。 但由于测序和引物合成的困难，以及70年代基因 工程技术的发明使克隆基因成为可能，所以， Khorana的设想被人们遗忘了. PCR的发明
很少有在公司工作的科研人员得 诺贝尔奖，Mullis是其中之一 Kary B.Mullis (1944-), Cetus公司工作期间，发明了 PCR。 他原本是要合成DNA引物来 进行测序工作，却常为没有 足够多的模板DNA而烦恼。 1983年春夏之交的一个晚上， 他开车去乡下别墅的路上萌 发了用两个引物（而不是一 个引物)去扩增模板DNA的 想法
Kary B. Mullis (1944 -)，在 Cetus公司工作期间，发明了 PCR。 他原本是要合成DNA引物来 进行测序工作，却常为没有 足够多的模板DNA而烦恼。 1983年春夏之交的一个晚上， 他开车去乡下别墅的路上萌 发了用两个引物（而不是一 个引物）去扩增模板DNA 的 想法. 很少有在公司工作的科研人员得 诺贝尔奖， Mullis是其中之一