第三章分子克隆载体 引言 (introduction) 第一节质粒载体(plasimid vectors) 第二节入噬菌体载体(phage vectors) 福 第三节单链丝状噬菌体载体 2
2 第三章 分子克隆载体 引 言 （introduction） 第一节 质粒载体（plasimid vectors） 第二节 λ噬菌体载体（phage vectors） 第三节 单链丝状噬菌体载体
: 作为基因克隆的载体必须具备以下特性： 1.能在寄主细胞中进行独立的复制和表达； 2.具有1-2个选择标记基因，如对抗生素的抗性基因等； 3.具备多克隆位点(MCS),而且可携带外源DNA片段的 长度范围较宽。 4.自身分子量较小，在寄主细胞中的拷贝数高，易于操作 和DNA的制备。 3
3 1. 能在寄主细胞中进行独立的复制和表达； 2. 具有1-2个选择标记基因，如对抗生素的抗性基因等； 3. 具备多克隆位点（MCS），而且可携带外源DNA片段的 长度范围较宽。 4. 自身分子量较小，在寄主细胞中的拷贝数高，易于操作 和DNA的制备。 作为基因克隆的载体必须具备以下特性：
标记基因 选择标记：用于鉴别目标DNA(载体)的存在，将 成功转化了质粒的宿主挑选出来。 筛选标记：用于筛选重组和非重组质粒。 ￥
4 选择标记：用于鉴别目标DNA（载体）的存在，将 成功转化了质粒的宿主挑选出来。 筛选标记：用于筛选重组和非重组质粒。 标记基因
1) 氨苄青霉素抗性基因AmpR ampr ampicil训in 抑菌原理：这类化合物分子结构中有一个B-内酰胺环，能与细 菌细胞膜上的青霉素结合蛋白结合而妨碍细菌细胞壁肽聚糖的 合成，使之不能交联而造成细胞壁的缺损，致使细菌细胞破裂 而死亡。 抗性原理：AmpR编码B-内酰胺酶，可分泌进入细菌的周质区， 水解青霉素的内酰胺环，从而解除了氨苄青霉素的毒性。 盈 5
5 抑菌原理：这类化合物分子结构中有一个-内酰胺环，能与细 菌细胞膜上的青霉素结合蛋白结合而妨碍细菌细胞壁肽聚糖的 合成，使之不能交联而造成细胞壁的缺损，致使细菌细胞破裂 而死亡。 抗性原理：AmpR编码-内酰胺酶，可分泌进入细菌的周质区， 水解青霉素的-内酰胺环，从而解除了氨苄青霉素的毒性。 (1) 氨苄青霉素抗性基因AmpR ampr ampicillin
Ampicillin resistance RP4 Kanamycin Tetracycline resistance resistance 不带有抗菌素抗 性基因的受体菌 E.coli cells, ● ④ some containing RP4 不能在含有抗菌 ○ ⊕cells with plasmid 素的培养基（选 O cells without plasmid 择培养基)中生 长。当带有抗菌 温 素抗性基因的载 体进入受体菌后， ⊙① 受体菌才能生长。 + 厨 ⊕⊕④①⊕ Normal growth Growth medium mediur no antiblotic 6502 湿 All cells Only cells containing can grow RP4 can grow t
6 不带有抗菌素抗 性基因的受体菌 不能在含有抗菌 素的培养基（选 择培养基）中生 长。当带有抗菌 素抗性基因的载 体进入受体菌后， 受体菌才能生长