内切酶按水解部位有：水解3-OH和磷酸的酯键和5-OH和磷酸的酯键的酶，产物分别为5°-磷酸寡聚核苷酸和3'-磷酸寡聚核苷酸外切酶：水解DNA和RNA3'或5末端的磷酸二酯键内切酶3'HO蛇毒磷酸牛脾磷酸二酯酶酯酶53'HOOHHON7N5'-核苷酸3'-核苷酸
A T G A C T G C 3′ HO 5′ 内切酶 内切酶按水解部位有：水解3-OH和磷酸的酯键和5-OH和磷酸的 酯键的酶，产物分别为5-磷酸寡聚核苷酸和3-磷酸寡聚核苷酸 外切酶：水解DNA和RNA 3或5末端的磷酸二酯键 蛇毒磷酸 二酯酶 牛脾磷酸 二酯酶 A T G A C T G C 3′ HO 5′ HO 5-核苷酸 N OH N 3-核苷酸 7
RNADNA5'End5'End核酸的结构0O-A5'CHOH磷酸二核酸一级结构是通酯键过35-磷酸二酯键连接的核苷酸序列OHOG没有特别指定时任何核苷酸序列都是按OH8照5一3方向读写。C右图DNA片段可简OH写为ATGCAAHOHHHH3'End3'End
核酸一级结构是通 过3ˊ, 5ˊ-磷酸二酯键连接 的核苷酸序列。 没有特别指定时， 任何核苷酸序列都是按 照5ˊ→3ˊ方向读写。 右图DNA片段可简 写为 ATGCA 磷酸二 酯键 核酸的结构
特异性酶限制性内切酶：可识别DNA上的碱基序列专一性位点，其碱基长度是4~8个碱基，将两条链同时切开形成粘性末端（如EcoRD和非粘性末端（如Haell）HaelllEcoRI3'—N-C-C-G-G-N— 5'3'N-C-T-T-A-A-G-N5'-N-G-G-C-C-N35'-N-G-A-A-T-T-C-N- 3'G-N3'N-C-T-T-A-A-N-C-CG-G-N—5S-N-GC-C-N-35.A-A-T-T-C-NN-G-G3
特异性酶——限制性内切酶：可识别DNA上的碱基序列 专一性位点，其碱基长度是4~8个碱基，将两条链同时切开形 成粘性末端(如EcoRI)和非粘性末端（如 HaeIII ）。 9
限制性内切酶的应用PlasmidDNA片段和载体在体外连接VectorCleavage siteForeignDNA利用限制酶取得具有粘:T00000.500000000005109000005900010(a性末端或平整末端的DNA片CleavagebyEcoRiendonucleaseCleavage sites段，获得重组DNACleavageby EcoRIendonucleaseAATTAATTAATTTOTUOICOHAUTTAATTAATTAABamH (320)AnnealingSwa (390)Sca (420)1PuV (500)SapI(3959)ApREcORTSwa(820)NotIIPstI(950)BseRM13Ori+Dra (1030)SaptI(3828)PsaftSap I(3818)(b)5010bpEco(1330)DNAligaseorECoRI(1500)Bsa BI (3495)Mno(1799)rorlac1Sca(1852)PmeI (3448)Afe(1932)Las (1993)BstEII(2659)Afe(2310)Kas (2476)BSSHII(2644)Bss(2529)植物表达载体Plasmidchimera0
10 限制性内切酶的应用 利用限制酶取得具有粘 性末端或平整末端的DNA片 段，获得重组DNA DNA片段和载体在体外连接
DNA重组技术质粒含目的基因的外源DNA限制性酶切限制性酶切DNA连接酶目的基因福重组质粒非转化菌转化筛选山受体菌转化菌扩增
11 DNA重组技术