2.2.5实时荧光定量PCR技术主要内容Real Time PCR基础知识Real TimePCR实验方法RealTimePCR解析方法
主 要 内 容 1 Real Time PCR基础知识 2 Real Time PCR实验方法 3 Real Time PCR解析方法 2.2.5 实时荧光定量PCR技术 3
引物5'3'3'5'变性、退火延伸延伸变性、退火PCR的指数扩增（2n）
PCR的指数扩增（2 n） 引物 延伸 延伸 5’ 3’ 5’ 3’ 变性、退火 变性、退火 4
First CycleThird CycleSecond CycleMelt Anneal ReplicateMelt Anneal ReplicateMelt Anneal ReplicateTemperatureunTime
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PCR过程的实时监测理论值，指数增长期VNA 607实际值，平台期循环数#平台出现得迟早与模板的初始量有关，模板初始量越多，平台出现得越早。平台效应产生的因素：引物二聚体的产生、反应产物、各组分的消耗和变性、引物和已扩增的DNA片段间的竞争等
指数增长期 平台期 循环数 # 理论值 实际值 Log 产物DNA PCR过程的实时监测 平台出现得迟早与模板的初始量有关，模板初始量 越多，平台出现得越早。 平台效应产生的因素： 引物二聚体的产生、反应产物、各组分的消耗和变 性、引物和已扩增的DNA片段间的竞争等 6
Real Time PCR的原理使用RealTimePCR扩增装置实时监测PCR扩增产物并进行分析的方法。发射光享宫Ct值
Real Time PCR的原理 激 发 光 发 射 光 使用Real Time PCR扩增装置实时监测PCR扩增产物并进行分析的方法。 Ct值 7