/L。有时用量较高。Vm对愈伤组织的产生和生活力有重要作用,VB6能促进根的生长,Vp与植 物代谢和胚的发育有一定关系。Vc有防止组织变褐的作用。 G3肌醇(myo- -inosito又叫环己六醇,在糖类的相互转化中起重要作用。通常可由磷酸葡萄糖转化而 成,还可进一步生成果胶物质,用于构建细胞壁。肌醇与6分子磷酸残基相结合形成植酸,植酸与 钙、镁等阳离子结合成植酸钙镁,植酸可进一步形成磷脂,参与细胞膜的构建。使用浓度一般为 lOOmg L,适当使用肌醇,能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有 促进作用,对细胞壁的形成也有作用。 (4)氨基酸( am inoacide)是很好的有机氮源,可直接被细胞吸收利用。培养基中最常用的氨基酸是甘 氨酸,其他的如精氨酸、谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。有时应用水解 乳蛋白或水解酪蛋白,它们是牛乳用酶法等加工的水解产物,是含有约20种氨基酸的混合物,用量 在10-1000mg/L之间。由于它们营养丰富,极易引起污染。如在培养中无特别需要,以不用为宜。 (5)天然复合物其成分比较复杂,大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织的增 殖与分化有明显的促进作用,但对器官的分化作用不明显。它的成分大多不清楚,所以一般应尽量 避免使用o 1)椰乳是椰子的液体胚乳。它是使用最多、效果最大的一种天然复合物。一般使用浓度在10%20% 与其果实成熟度及产地关系也很大。它在愈伤组织和细胞培养中有促进作用。在马铃薯茎尖分生组 织和草莓微茎尖培养中起明显的促进作用,但茎尖组织的大小若超过1mm时,椰乳就不发生作用 2)香蕉用量为150-200mⅥ。用黄熟的小香蕉,加入培养基后变为紫色。对pH值的缓冲作用大。主 要在兰花的组织培养中应用,对发育有促进作用。 3)马铃薯φ potato)去掉皮和芽后,加水煮30mn,再经过过滤,取其滤液使用。用量为150-200g/L。 对pH值缓冲作用也大。添加后可得到健壮的植株。 4)水解酪蛋白为蛋白质的水解物,主要成分为氨基酸,使用浓度为100-200mg/L。受酸和酶的作 用易分解,使用时要注意。 5)其他酵母提取液YE0.01%0.05%),主要成分为氨基酸和维生素类;麦芽提取液(0.01% 0.5%)、苹果和番茄的果汁、黄瓜的果实、未熟玉米的胚乳等。·遇热较稳定,大多在培养困难时 使用,有时有效 4.植物激素( hormone) 是植物新陈代谢中产生的天然化合物,它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育,影 响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠以及萌发等许许多多的生理生化活动, 在培养基的各成分中,植物激素是培养基的关键物质,对植物组织培养起着决定性作用。 (1)生长素类 auxin)在组织培养中,生长素主要被用于诱导愈伤组织形成,诱导根的分化和促进细胞 分裂、伸长生长。在促进生长方面,根对·生长素最敏感。在极低的浓度下,(10-5-10-8mg/L)就可 促进生长,其次是茎和芽
／L。有时用量较高。Vm 对愈伤组织的产生和生活力有重要作用，VB6 能促进根的生长，Vpp 与植 物代谢和胚的发育有一定关系。Vc 有防止组织变褐的作用。 (3)肌醇 (myo-inosit0l)又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。通常可由磷酸葡萄糖转化而 成，还可进一步生成果胶物质，用于构建细胞壁。肌醇与 6 分子磷酸残基相结合形成植酸，植酸与 钙、镁等阳离子结合成植酸钙镁，植酸可进一步形成磷脂，参与细胞膜的构建。使用浓度一般为 lOOmg ／L，适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有 促进作用，对细胞壁的形成也有作用。 (4)氨基酸(aminoacide) 是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。培养基中最常用的氨基酸是甘 氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。有时应用水解 乳蛋白或水解酪蛋白，它们是牛乳用酶法等加工的水解产物，是含有约 20 种氨基酸的混合物，用量 在 10-1000mg／L 之间。由于它们营养丰富，极易引起污染。如在培养中无特别需要，以不用为宜。 (5)天然复合物 其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织的增 殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显。它的成分大多不清楚，所以一般应尽量 避免使用 o 1)椰乳 是椰子的液体胚乳。它是使用最多、效果最大的一种天然复合物。一般使用浓度在 10％-20％， 与其果实成熟度及产地关系也很大。它在愈伤组织和细胞培养中有促进作用。在马铃薯茎尖分生组 织和草莓微茎尖培养中起明显的促进作用，但茎尖组织的大小若超过 1mm 时，椰乳就不发生作用。 2)香蕉 用量为 150-200ml/l。用黄熟的小香蕉，加入培养基后变为紫色。对 pH 值的缓冲作用大。主 要在兰花的组织培养中应用，对发育有促进作用。 3)马铃薯(potato) 去掉皮和芽后，加水煮 30min，再经过过滤，取其滤液使用。用量为 150-200g／L。 对 pH 值缓冲作用也大。添加后可得到健壮的植株。 4)水解酪蛋白 为蛋白质的水解物，主要成分为氨基酸，使用浓度为 100-200mg／L。受酸和酶的作 用易分解，使用时要注意。 5)其他 酵母提取液(YE)(0．01％-0．05％)，主要成分为氨基酸和维生素类；麦芽提取液(0．01％ -0．5％)、苹果和番茄的果汁、黄瓜的果实、未熟玉米的胚乳等。·遇热较稳定，大多在培养困难时 使用，有时有效。 4．植物激素(hormone) 是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育，影 响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠以及萌发等许许多多的生理生化活动， 在培养基的各成分中，植物激素是培养基的关键物质，对植物组织培养起着决定性作用。 (1)生长素类(auxin) 在组织培养中，生长素主要被用于诱导愈伤组织形成，诱导根的分化和促进细胞 分裂、伸长生长。在促进生长方面，根对·生长素最敏感。在极低的浓度下，(10-5-10-8mg／L)就可 促进生长，其次是茎和芽
天然的生长素热稳定性差,高温高压或受光条件易被破坏。在植物体内也易受到体内酶的分解。组 织培养中常用人工合成的生长素类物质。 IAA( indoacet icacid吲哚乙酸)是天然存在的生长素,亦可人工合成,其活力较低,是生长素中活力最 弱的激素,对器官形成的副作用小,高温高压易被破坏,也易被细胞中的IAA分解酶降解,受光也 易分解 NAA(naphtha leneaceticacid萘乙酸)在组织培养中的起动能力要比IAA高出3-4倍,且由于可大批量 人工合成,耐高温高压,不易被分解破坏,所以应用较普遍。NAA和IBA广泛用于生根,并与细胞 分裂素互作促进芽的增殖和生长。 IBA( indolebutyric acid吲哚丁酸)是促进发根能力较强的生长调节物质。 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)起动能力比IAA高10倍,特别在促进愈伤组织的形成上活力最高,但 它强烈抑制芽的形成,影响器官的发育。适宜的用量范围较狭窄,过量常有毒效应。 生长素配制时可先用少量95%酒精助溶。2,4-D可用0.1mol/L的NaOH或KOH助溶。生长素 常配成1 mgdml的溶液贮于冰箱中备用 2GA( gibberellicacid赤霉素)有20多种,生理活性及作用的种类、部位、效应等各有不同、培养基 中添加的是GA3,主要用于促进幼苗茎的伸长生长,促进不定胚发育成小植株:赤霉素和生长素协 同作用,对形成层的分化有影响,当生长素/赤霉素比值高时有利于木质部分化,比值低时有利于 韧皮部分化:此外,赤霉素还用于打破休眠,促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发。一般在器官形成 后,添加赤霉素可促进器官或胚状体的生长。 赤霉素溶于酒精,配制时可用少量95%酒精助溶。赤霉素不耐热,高压灭菌后将有70%-100%失效」 应当采用过滤灭菌法加入。 (3)细胞分裂素类( cytokinin)这类激素是腺嘌呤的衍生物,包括6BA(6-苄基氨基嘌呤)、Kt( kinetin激 动素)、n( zeatin玉米素)等。其中Zt活性最强,但非常昂贵,常用的是6-BA 在培养基中添加细胞分裂素有三个作用:①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长,细胞分裂素与生长素 相互作用,当组织内细胞分裂素/生长素的比值高时,诱导愈伤组织或器官分化出不定芽。②促进 细胞分裂与扩大。③抑制根的分化。因此,细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化、茎、苗的增殖 而避免在生根培养 生长素与细胞分裂素的比例决定着发育的方向,是愈伤组织、是长根还是长芽。如为了促进芽器官 的分化,应除去或降低生长素的浓度,或者调整培养基中生长素与细胞分裂素的比例。 生长调节物质的使用甚微,一般用mg/L表示浓度。在组织培养中生长调节物质的使用浓度,因植 物的种类、部位、时期、内源激素等的不同而异,一般生长素浓度的使用为0.05-5mg/L,细胞分 裂素0.05-10mg/Le 5,培养材料的支持物 (1)琼脂(agar)在固体培养时琼脂是最好的固化剂。琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物
天然的生长素热稳定性差，高温高压或受光条件易被破坏。在植物体内也易受到体内酶的分解。组 织培养中常用人工合成的生长素类物质。 IAA(indoaceticacid 吲哚乙酸)是天然存在的生长素，亦可人工合成，其活力较低，是生长素中活力最 弱的激素，对器官形成的副作用小，高温高压易被破坏，也易被细胞中的 I AA 分解酶降解，受光也 易分解。 NAA(naphthaleneaceticacid 萘乙酸)在组织培养中的起动能力要比 IAA 高出 3-4 倍，且由于可大批量 人工合成，耐高温高压，不易被分解破坏，所以应用较普遍。NAA 和 IBA 广泛用于生根，并与细胞 分裂素互作促进芽的增殖和生长。 IBA(indolebutyric acid 吲哚丁酸)是促进发根能力较强的生长调节物质。 2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)起动能力比 IAA 高 10 倍，特别在促进愈伤组织的形成上活力最高，但 它强烈抑制芽的形成，影响器官的发育。适宜的用量范围较狭窄，过量常有毒效应。 生长素配制时可先用少量 95％酒精助溶。2，4-D 可用 0．1mol／L 的 NaOH 或 KOH 助溶。生长素 常配成 1mgdml 的溶液贮于冰箱中备用。 (2)GA(gibberellicacid 赤霉素) 有 20 多种，生理活性及作用的种类、部位、效应等各有不同、培养基 中添加的是 GA3，主要用于促进幼苗茎的伸长生长，促进不定胚发育成小植株；赤霉素和生长素协 同作用，对形成层的分化有影响，当生长素／赤霉素比值高时有利于木质部分化，比值低时有利于 韧皮部分化；此外，赤霉素还用于打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发。一般在器官形成 后，添加赤霉素可促进器官或胚状体的生长。 赤霉素溶于酒精，配制时可用少量 95％酒精助溶。赤霉素不耐热，高压灭菌后将有 70％-100％失效， 应当采用过滤灭菌法加入。 (3)细胞分裂素类(cytokinin) 这类激素是腺嘌呤的衍生物，包括 6-BA(6-苄基氨基嘌呤)、Kt(kinetin 激 动素)、n(zeatin 玉米素)等。其中 Zt 活性最强，但非常昂贵，常用的是 6-BA。 在培养基中添加细胞分裂素有三个作用：①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长，细胞分裂素与生长素 相互作用，当组织内细胞分裂素／生长素的比值高时，诱导愈伤组织或器官分化出不定芽。②促进 细胞分裂与扩大。③抑制根的分化。因此，细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化、茎、苗的增殖， 而避免在生根培养时使用。 生长素与细胞分裂素的比例决定着发育的方向，是愈伤组织、是长根还是长芽。如为了促进芽器官 的分化，应除去或降低生长素的浓度，或者调整培养基中生长素与细胞分裂素的比例。 生长调节物质的使用甚微，一般用 mg／L 表示浓度。在组织培养中生长调节物质的使用浓度，因植 物的种类、部位、时期、内源激素等的不同而异，一般生长素浓度的使用为 0．05-5mg／L，细胞分 裂素 0．05-10mg／L。 5，培养材料的支持物 (1)琼脂(agar) 在固体培养时琼脂是最好的固化剂。琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物
本身并不提供任何营养 琼脂能溶解在热水中,成为溶胶,冷却至40℃即凝固为固体状凝胶。通常所说的"煮化"培养基,就 是使琼脂溶解于90℃以上的热水。琼脂的用量在6-10g/L之间,若浓度太高,培养基就会变得很硬, 营养物质难以扩散到培养的组织中去。若浓度过低,凝固性不好。新买来的琼脂最好先试一下它的 凝固力。一般琼脂以颜色浅、透明度好、洁浄的为上品。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方 式有关外,还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关,长时间的高温会使凝固能力下降,过 酸过碱加之高温会使琼脂发生水解,丧失凝固能力。时间过久,琼脂变褐,也会逐渐丧失凝固能力。 加入琼脂的固体培养基与液体培养基相比优点在于操作简便,通气问题易于解决,便于经常观察研 究等,但它也有不少缺点,如培养物与培养基的接触(即吸收腼积小,各种养分在琼脂中扩散较慢, 影响养分的充分利用,同时培养物排出的一些代谢废物,聚集在吸收表面,对组织产生毒害作用 市售的各种琼脂几乎都含有杂质,特别是Ca、Mg及其他微量元素。因此在研究植物组织或细胞的 营养问题时,则应避免使用琼脂。可在液体培养基表面安放一个无菌滤纸制成的滤纸桥,然后在滤 纸桥上进行愈伤组织培养。 (2)其他有玻璃纤维、滤纸桥、海绵等,总的要求是排出的有害物质对培养材料没有影响或影响较小 6.抗生物质 (antibiotic) 抗生物质有青霉素、链霉素、庆大霉素等,用量在5-20mg/L之间。添加抗生物质可防止菌类污染 减少培养中材料的损失,尤其是快速繁殖中,常因污染而丢弃成百上千瓶的培养物,采用适当的抗 生素便可节约人力、物力和时间。尤其对大量通气长期培养,效果更好。对于刚感染的组织材料, 可向培养基中注λ5%-10%的抗菌素。抗生素各有其抑菌谱,要加以选择试用,也可两种抗生素混 用。但是应当注意抗生素对植物组织的生长也有抑制作用,可能某些植物适宜用青霉素,而另一些 植物却不大适应。值得提醒的是,在工作中不能以为有了抗菌素,而放松灭菌措施。此外,在停止 抗生素使用后,往往污染率显著上升,这可能是原来受抑制的菌类又滋生起来造成的。 7、抗氧化物( antioxide 植物组织在切割时会溢泌一些酚类物质,接触空气中的氧气后,自动氧化或由酶类催化氧化为相应 的醌类,产生可见的茶色、褐色以致黑色,这就是酚污染。这些物质渗出细胞外就造成自身中毒 使培养的材料生长停顿,失去分化能力,最终变褐死亡。在木本,尤其是热带木本及少数草本植物 中较为严重。目前还没有彻底完善的办法,只能按不同的实际情况,加用一些药物,并适当降低培 养温度、及时转移到新鲜培养基上等办法,使之有不同程度的缓解,当然像严格选择外植体部位 加大接种数量等也应一并考虑。 抗酚类氧化常用的药剂有半胱氨酸及Vc,可用50-200mg/L的浓度洗涤刚切割的外植体伤口表面, 或过滤灭菌后加入固体培 养基的表层。其他抗氧化剂有二硫苏糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、及二乙基二硫氨基甲酸酯等。 8、活性炭( active carbon)
本身并不提供任何营养。 琼脂能溶解在热水中，成为溶胶，冷却至 40℃即凝固为固体状凝胶。通常所说的"煮化"培养基，就 是使琼脂溶解于 90℃以上的热水。琼脂的用量在 6-10g／L 之间，若浓度太高，培养基就会变得很硬， 营养物质难以扩散到培养的组织中去。若浓度过低，凝固性不好。新买来的琼脂最好先试一下它的 凝固力。一般琼脂以颜色浅、透明度好、洁净的为上品。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方 式有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH 值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过 酸过碱加之高温会使琼脂发生水解，丧失凝固能力。时间过久，琼脂变褐，也会逐渐丧失凝固能力。 加入琼脂的固体培养基与液体培养基相比优点在于操作简便，通气问题易于解决，便于经常观察研 究等，但它也有不少缺点，如培养物与培养基的接触(即吸收)面积小，各种养分在琼脂中扩散较慢， 影响养分的充分利用，同时培养物排出的一些代谢废物，聚集在吸收表面，对组织产生毒害作用。 市售的各种琼脂几乎都含有杂质，特别是 Ca、Mg 及其他微量元素。因此在研究植物组织或细胞的 营养问题时，则应避免使用琼脂。可在液体培养基表面安放一个无菌滤纸制成的滤纸桥，然后在滤 纸桥上进行愈伤组织培养。 (2)其他 有玻璃纤维、滤纸桥、海绵等，总的要求是排出的有害物质对培养材料没有影响或影响较小。 6．抗生物质(antibiotic) 抗生物质有青霉素、链霉素、庆大霉素等，用量在 5-20mg／L 之间。添加抗生物质可防止菌类污染， 减少培养中材料的损失，尤其是快速繁殖中，常因污染而丢弃成百上千瓶的培养物，采用适当的抗 生素便可节约人力、物力和时间。尤其对大量通气长期培养，效果更好。对于刚感染的组织材料， 可向培养基中注入 5％-10％的抗菌素。抗生素各有其抑菌谱，要加以选择试用，也可两种抗生素混 用。但是应当注意抗生素对植物组织的生长也有抑制作用，可能某些植物适宜用青霉素，而另一些 植物却不大适应。值得提醒的是，在工作中不能以为有了抗菌素，而放松灭菌措施。此外，在停止 抗生素使用后，往往污染率显著上升，这可能是原来受抑制的菌类又滋生起来造成的。 7、抗氧化物(antioxide) 植物组织在切割时会溢泌一些酚类物质，接触空气中的氧气后，自动氧化或由酶类催化氧化为相应 的醌类，产生可见的茶色、褐色以致黑色，这就是酚污染。这些物质渗出细胞外就造成自身中毒， 使培养的材料生长停顿，失去分化能力，最终变褐死亡。在木本，尤其是热带木本及少数草本植物 中较为严重。目前还没有彻底完善的办法，只能按不同的实际情况，加用一些药物，并适当降低培 养温度、及时转移到新鲜培养基上等办法，使之有不同程度的缓解，当然像严格选择外植体部位、 加大接种数量等也应一并考虑。 抗酚类氧化常用的药剂有半胱氨酸及 Vc，可用 50-200mg／L 的浓度洗涤刚切割的外植体伤口表面， 或过滤灭菌后加入固体培 养基的表层。其他抗氧化剂有二硫苏糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、及二乙基二硫氨基甲酸酯等。 8、活性炭(active carbon)
活性炭为木炭粉碎经加工形成的粉沫结构,它结构疏松,孔隙大,吸水力强,有很强的吸附作用 它的颗粒大小决定着吸附能力、粒度越小,吸附能力越大。温度低吸附力强,温度高吸附力减弱 甚至解吸附。通常使用浓度为0.5-108/L。它可以吸附非极性物质和色素等大分子物质,包括琼脂 中所含的杂质,培养物分泌的酚、醌类物质以及蔗糖在高压消毒时产生的5-羟甲基糖醛及激素等。 茎尖初代培养,加入适量活性炭,可以吸附外植体产生的致死性褐化物:其效力优于Ⅴc和半胱氨酸: 在新梢增殖阶段,活性炭可明显促进新梢的形成和伸长,但其作用有一个阀值,一般为0.1%0.2% 不能超过0.2% 活性炭在生根时有明显的促进作用,其机理一般认为与活性碳减弱光照有关,可能是由于根顶端产 生促进根生长的IAA,但IAA易受可见光的光氧化而破坏,因此活性炭的主要作用就在于通过减弱 光照保护了IAA,从而间接促进了根的生长,由于根的生长加快,吸收能力增强,反过来又促进了 茎、叶的生长。 此外,在培养基中加入0.3%活性炭,还可降低玻璃苗的产生频率,对防止产生玻璃苗有良好作用。 活性炭在胚胎培养中也有一定作用,如在葡萄胚珠培养时向培养基加入o.1%的活性炭,可减少组 织变褐和培养基变色,产生较少的愈伤组织 但是,活性炭具有副作用,研究表示,每毫克的活性炭能吸附100ng左右的生长调节物质,这说明 只需要极少量的活性炭就可以完全吸附培养基中的调节物质。大量的活性炭加入会削弱琼脂的凝固 能力,因此要多加一些琼脂。很细的活性炭也易沉淀,通常在琼脂凝固之前,要轻轻摇动培养瓶 总之,那种随意抓一撮活性碳放入培养基,会带来不良的后果。因此,在使用时要有其量的意识,使 活性炭发挥其积极作用 第二节培养基的制备 、母液( ( stocksolution)的配制和保存 在植物组织培养工作中,配制培养基是日常必备的工作。为简便起见,通常先配制一系列母液,即 贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液,这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移 取,而且还便于低温保藏。一般母液配成比所需浓度高10-100倍。母液配制时可分别配成大量元素 微量元素、铁盐、有机物和激素类等。配制时注意一些离子之间易发生沉淀,如Ca2+和SO42-, Ca2+Mg2+和Po43-一起溶解后,会产生沉淀,一定要充分溶解再放入母液中。配制母液时要用蒸馏 水或重蒸馏水。药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。药品的称量及定容都要准确。各种药品先 以少量水让其充分溶解,然后依次混合。一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液,其 中维生素氨基酸类可以分别配制,也可以混在一起。母液配好后放入冰箱内低温保存,用时再按比 例稀释 下面以MS培养基制备为例,概述其制备方法见表32 表3-2MS培养基母液的配制 化合物名称原配方量/mg扩大倍数称取量/mg母液体积/mL配制L培养基应移取量/mL
活性炭为木炭粉碎经加工形成的粉沫结构，它结构疏松，孔隙大，吸水力强，有很强的吸附作用， 它的颗粒大小决定着吸附能力、粒度越小，吸附能力越大。温度低吸附力强，温度高吸附力减弱， 甚至解吸附。通常使用浓度为 0．5-108／L。它可以吸附非极性物质和色素等大分子物质，包括琼脂 中所含的杂质，培养物分泌的酚、醌类物质以及蔗糖在高压消毒时产生的 5-羟甲基糖醛及激素等。 茎尖初代培养，加入适量活性炭，可以吸附外植体产生的致死性褐化物；其效力优于 Vc 和半胱氨酸； 在新梢增殖阶段，活性炭可明显促进新梢的形成和伸长，但其作用有一个阀值，一般为 0.1％-0．2％， 不能超过 0．2％。 活性炭在生根时有明显的促进作用，其机理一般认为与活性碳减弱光照有关，可能是由于根顶端产 生促进根生长的 IAA，但 IAA 易受可见光的光氧化而破坏，因此活性炭的主要作用就在于通过减弱 光照保护了 IAA，从而间接促进了根的生长，由于根的生长加快，吸收能力增强，反过来又促进了 茎、叶的生长。 此外，在培养基中加入 0．3％活性炭，还可降低玻璃苗的产生频率，对防止产生玻璃苗有良好作用。 活性炭在胚胎培养中也有一定作用，如在葡萄胚珠培养时向培养基加入 o．1％的活性炭，可减少组 织变褐和培养基变色，产生较少的愈伤组织。 但是，活性炭具有副作用，研究表示，每毫克的活性炭能吸附 100ng 左右的生长调节物质，这说明 只需要极少量的活性炭就可以完全吸附培养基中的调节物质。大量的活性炭加入会削弱琼脂的凝固 能力，因此要多加一些琼脂。很细的活性炭也易沉淀，通常在琼脂凝固之前，要轻轻摇动培养瓶。 总之，那种随意抓一撮活性碳放入培养基，会带来不良的后果。因此，在使用时要有其量的意识,使 活性炭发挥其积极作用。 第二节 培养基的制备 一、母液(stocks01ution)的配制和保存 在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。为简便起见，通常先配制一系列母液，即 贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移 取，而且还便于低温保藏。一般母液配成比所需浓度高 10-100 倍。母液配制时可分别配成大量元素、 微量元素、铁盐、有机物和激素类等。配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如 Ca2+和 S042-， Ca2+Mg2+和 PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。配制母液时要用蒸馏 水或重蒸馏水。药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。药品的称量及定容都要准确。各种药品先 以少量水让其充分溶解，然后依次混合。一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，其 中维生素 氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起。母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比 例稀释。 下面以 MS 培养基制备为例，概述其制备方法见表 3-2。 表 3-2 MS 培养基母液的配制 化合物 名称 原配方量／mg 扩大倍数 称取量 ／mg 母液体积／mL 配制1L培养基应移取量／mL
母液名称 NH4N0316501016500 KNO319001019000大量 CaCl·2H,O4401044001000100元素 MgS04·7H20370103700母液 KH2P04170101700 MnS04,H2022.31002230 ZnS04·7H208.6100860 CoCI·6H2O0.0251002.5微量 CuS04·5H200.0210025100010元素 H3B036.2100620母液 Na2M04·2H200.2510025 K10.8310083 FeS04·7H2028.71002870100010铁盐 Na,EDTA37.31003730母液 烟酸(Vpp)0.5502: 盐酸吡哆醇(VB6)0.55025有机 盐酸硫胺素(VB2)0.150550010物 肌醇100505000母液 甘氨酸250100 (1)大量元素母液可配成浓度10倍母液。用分析天平按表3-2称取药品,分别加100ml左右蒸馏水溶 解后,再用磁力搅拌器搅拌,促进溶解。注意Ca2+和阳Po43-易发生沉淀。然后倒人1000n定容瓶 中,再加水定容至刻度,成为10倍母液。 (2)微量元素母液可配成浓度配成比100倍的母液。用分析天平按表准确称取药品后,分别溶解,混 合后加水定容至1000ml (3)铁盐母液可配成100倍的母液,按表称取药品,可加热溶解,混合后加水定容至1000ml (4)有机物母液可配成500倍的母液。按表分别称取药品,溶解,混合后加水定容至500ml (5)激素母液的配制 每种激素必须单独配成母液,浓度一般配成1mg/ml。用时根据需要取用。因为激素用量较少 次可配成50ml或100ml。另外,多数激素难溶于水,要先溶于可溶物质,然后才能加水定容 它们的的配法如下 将IAA、IBA、GA等先溶于少量的95%的酒精中。再加水定容-定浓度 NAA可先溶于热水或少量95%的酒精中,再加水定容到一定浓度
母液名称 NH4N03 1650 10 16500 KN03 1900 10 19000 大量 CaCl·2H，O 440 10 4400 1000 100 元素 MgS04·7H20 370 10 3700 母液 KH2P04 170 10 1700 MnS04，H20 22．3 100 2230 ZnS04·7H20 8．6 100 860 CoCI·6H2O 0．025 100 2．5 微量 CuS04·5H20 0．02 100 25 1000 10 元素 H3B03 6．2 100 620 母液 Na2M04·2H20 0．25 100 25 K1 0．83 100 83 FeS04·7H20 28．7 100 2870 1000 10 铁盐 Na,-EDTA 37．3 100 3730 母液 烟酸(Vpp) 0．5 50 25 盐酸吡哆醇(VB6) 0．5 50 25 有机 盐酸硫胺素(VB2) 0．1 50 5 500 10 物 肌醇 100 50 5000 母液 甘氨酸 2 50 100 (1)大量元素母液可配成浓度 10 倍母液。用分析天平按表 3-2 称取药品，分别加 100ml 左右蒸馏水溶 解后，再用磁力搅拌器搅拌，促进溶解。注意 Ca2+和阳 Po43-易发生沉淀。然后倒人 1000ml 定容瓶 中，再加水定容至刻度，成为 10 倍母液。 (2)微量元素母液 可配成浓度配成比 100 倍的母液。用分析天平按表准确称取药品后，分别溶解，混 合后加水定容至 1000ml。 (3)铁盐母液 可配成 100 倍的母液，按表称取药品，可加热溶解，混合后加水定容至 1000ml。 (4)有机物母液 可配成 500 倍的母液。按表分别称取药品，溶解，混合后加水定容至 500ml。 (5)激素母液的配制 每种激素必须单独配成母液，浓度一般配成 1mg／ml。用时根据需要取用。因为激素用量较少，一 次可配成 50ml 或 100ml。另外，多数激素难溶于水，要先溶于可溶物质，然后才能加水定容。 它们的的配法如下： 将 IAA、IBA、GA 等先溶于少量的 95％的酒精中。再加水定容-定浓度。 NAA 可先溶于热水或少量 95％的酒精中，再加水定容到一定浓度