8.镜检显带效果:在低倍镜下选择分散良好的长度适中的分裂相,转换油 镜观察,若染色体未出现带纹,则为显带不足;若染色体边缘发毛为显带过头 此时应根据具体情况增减胰蛋白酶处理时间重新处理一张标本。 四、G显带核型分析 准备G显带中期分裂相照片一张,将各条染色体逐一剪下,根据其大小、带 型特点和着丝粒位置,依次分组、配对和排列组合,待检查无误后,贴在报告纸 上,写出核型的简式(繁式)。 五、注意事项 1、良好的培养效果为:标本片上中期分裂相要多,且染色体分散要好。 2、胰蛋白酶溶液需在使用前新配制。 3、染色体长度应能适应显带分析技术的要求。 4、烤片时间也很重要。 5、G显带成败之关键取决于胰蛋白酶液的浓度和处理时间之搭配,故每次 进行染色体G显带时,最好先试做一张制片,摸索胰蛋白酶处理时间,以保证获 得最好的染色体G显带标本。 第三节姐妹染色单体技术 姊妹染色单体交换( Sister chromatial exchange,SCE)是染色体同源座位上复 制产物间的相互交换,是同一染色体的两条单体之间发生的一类特殊的同源重 组,主要在DNA合成期形成,可能与DNA双链的断裂与复制有关,SCE的发生 的频率可反映细胞在S期的受损程度。如果一个个体的SCE率明显增高,可表明 染色体受到环境中的一定因素的影响,或是受到遗传缺陷的内在制约因素所致 、姐妹染色单体互换概念 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5- bromodeoxy- uridine,BrdU)是脱氧胸腺嘧啶核苷 的类似物,在DNA链的复制过程中,可替代胸腺嘧啶。在细胞培养过程中,加 入一定是的5-溴脱氧尿苷(BrdU),当细胞在DNA复制过程时,BdU能作为核 苷酸的前体取代胸腺嘧啶而被掺入到新合成的DNA中。因此,当细胞处于第 个分裂周期时,同一染色体的两条姐妹染色单体,一条由双股都含有BrU的DNA
6 8．镜检显带效果：在低倍镜下选择分散良好的长度适中的分裂相，转换油 镜观察，若染色体未出现带纹，则为显带不足；若染色体边缘发毛为显带过头， 此时应根据具体情况增减胰蛋白酶处理时间重新处理一张标本。 四、G 显带核型分析 准备 G 显带中期分裂相照片一张，将各条染色体逐一剪下，根据其大小、带 型特点和着丝粒位置，依次分组、配对和排列组合，待检查无误后，贴在报告纸 上，写出核型的简式（繁式）。 五、注意事项 1、良好的培养效果为：标本片上中期分裂相要多，且染色体分散要好。 2、胰蛋白酶溶液需在使用前新配制。 3、染色体长度应能适应显带分析技术的要求。 4、烤片时间也很重要。 5、G 显带成败之关键取决于胰蛋白酶液的浓度和处理时间之搭配，故每次 进行染色体 G 显带时，最好先试做一张制片，摸索胰蛋白酶处理时间，以保证获 得最好的染色体 G 显带标本。 第三节 姐妹染色单体技术 姊妹染色单体交换（Sister chromatial exchange,SCE）是染色体同源座位上复 制产物间的相互交换，是同一染色体的两条单体之间发生的一类特殊的同源重 组，主要在 DNA 合成期形成，可能与 DNA 双链的断裂与复制有关，SCE 的发生 的频率可反映细胞在 S 期的受损程度。如果一个个体的 SCE 率明显增高，可表明 染色体受到环境中的一定因素的影响，或是受到遗传缺陷的内在制约因素所致。 一、姐妹染色单体互换概念 5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromodeoxy- uridine，BrdU）是脱氧胸腺嘧啶核苷 的类似物，在 DNA 链的复制过程中，可替代胸腺嘧啶。在细胞培养过程中，加 入一定是的 5-溴脱氧尿苷（BrdU）,当细胞在 DNA 复制过程时，BrdU 能作为核 苷酸的前体取代胸腺嘧啶而被掺入到新合成的 DNA 中。因此，当细胞处于第二 个分裂周期时，同一染色体的两条姐妹染色单体，一条由双股都含有 BrdU 的DNA
链构成,而另一条为单股含有BdU的DNA链。在结构上双股含BU的DNA 螺旋化程度较低,故对染色剂亲合力低,在用 Giemsa染色时其单体着色浅,只 有单股含BrdU的DNA链组成的单体则着色深而形成差别着色。应用姐妹染色单 体交换技术研究来自一个染色体的两条单体之间在同一个位点发生同源片段的 交换,称为姊妹染色单体互换。当姊妹染色体间存在同源片段交换时,可根据每 条单体夹杂着深浅不一的着色片段加以区分。由于姐妹染色单体的DNA序列相 同,SCE并不改变遗传物质组成,但SCE是由于染色体发生断裂和重接而产生的, 因此,SCE显示方法通常用来检测染色体断裂频率,用来研究药物和环境因素的 致畸效应。 、实验用品和材料 材料:人外周血(或培养细胞) 2.器械:光学显微镜、恒温培养箱、恒温水浴箱、离心机、20w紫外线灯、 培养瓶、10ml刻度离心管、吸管、试管架、注射器(lm、2ml)、酒精灯、载玻 片、天平、小烧杯、染色缸、黑纸、擦镜纸。 3.试剂:RPM1640培养液、PHA、肝素、2xSSC、500ug/ml的BrdU、pH68 磷酸缓冲液、 Giemsa染液 4.试剂的配制 (1)500μ g/ml BrdU称取Buu42mg,加入84m无菌生理盐水,摇匀后 即成500μg/mnl的BrdU溶液,4℃冰箱避光保存, (2)2×SSC溶液先配制A液(0.30molL氯化钠:17.54克氯化钠溶解 在蒸馏水中,定容至l00om)和B液(0030mo柠檬酸钠:882克柠檬酸钠溶 解在蒸馏水中,定容至1000mn);使用时将A和B两溶液等体积混合即成2×SSC 溶液 (3)常规配制RPMI1640培养液、 Giemsa染液、肝素液。 实验方法与步骤 (一)细胞培养(人外周血淋巴细胞培养) 1.接种无菌抽取外周全血0.2~0.3ml(肝素抗凝),接种在5ml含有PHA 的RPM1640培养液中,37℃培养箱培养。 2.加BrdU培养24h后加500ug/ ml brdu液0.1ml,终浓度为10ug/m
7 链构成，而另一条为单股含有 BrdU 的 DNA 链。在结构上双股含 BrdU 的 DNA 螺旋化程度较低，故对染色剂亲合力低，在用 Giemsa 染色时其单体着色浅，只 有单股含 BrdU 的 DNA 链组成的单体则着色深而形成差别着色。应用姐妹染色单 体交换技术研究来自一个染色体的两条单体之间在同一个位点发生同源片段的 交换，称为姊妹染色单体互换。当姊妹染色体间存在同源片段交换时，可根据每 条单体夹杂着深浅不一的着色片段加以区分。由于姐妹染色单体的 DNA 序列相 同，SCE 并不改变遗传物质组成，但 SCE 是由于染色体发生断裂和重接而产生的， 因此，SCE 显示方法通常用来检测染色体断裂频率，用来研究药物和环境因素的 致畸效应。 二、实验用品和材料 1. 材料：人外周血（或培养细胞） 2. 器械：光学显微镜、恒温培养箱、恒温水浴箱、离心机、20w 紫外线灯、 培养瓶、10ml 刻度离心管、吸管、试管架、注射器（1ml、2ml）、酒精灯、载玻 片、天平、小烧杯、染色缸、黑纸、擦镜纸。 3. 试剂：RPMI1640 培养液、PHA、肝素、2×SSC、500g/ml 的 BrdU、pH6.8 磷酸缓冲液、Giemsa 染液。 4. 试剂的配制 （1）500g/ml BrdU 称取 Brdu 4.2mg，加入 8.4 ml 无菌生理盐水，摇匀后 即成 500g/ml 的 BrdU 溶液，4℃冰箱避光保存。 （2）2×SSC 溶液 先配制 A 液（0.30mol/L 氯化钠 ：17.54 克氯化钠溶解 在蒸馏水中，定容至 1000ml）和 B 液（0.030mol/L 柠檬酸钠：8.82 克柠檬酸钠溶 解在蒸馏水中，定容至 1000ml）；使用时将 A 和 B 两溶液等体积混合即成 2×SSC 溶液 （3）常规配制 RPMI1640 培养液、Giemsa 染液、肝素液。 三、实验方法与步骤 （一）细胞培养（人外周血淋巴细胞培养） 1. 接种 无菌抽取外周全血 0.2~0.3ml（肝素抗凝），接种在 5ml 含有 PHA 的 RPMI1640 培养液中，37℃培养箱培养。 2. 加 BrdU 培养 24h 后加 500μg/ ml BrdU 液 0.1 ml，终浓度为 10μg/ ml