② 蒸馏 在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱 性，加热蒸馏，即可释放出氨气 (NH4 )2 SO4 + 2NaOH → 2NH3 + Na2 SO4 + 2H2 O 蒸馏时碱性反应完全指示：变深蓝色或产生 黑色沉淀 ③ 吸收 用硼酸溶液，并加入混合指示剂，硼酸呈微弱酸 性（Ka1=5.8 X 10-10），与氨形成强碱弱酸盐， 酒红色→蓝绿色 2NH3 + 4H3 BO3 =(NH4 )2 B4 O7 +5H2 O
② 蒸馏 在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱 性，加热蒸馏，即可释放出氨气 (NH4 )2 SO4 + 2NaOH → 2NH3 + Na2 SO4 + 2H2 O 蒸馏时碱性反应完全指示：变深蓝色或产生 黑色沉淀 ③ 吸收 用硼酸溶液，并加入混合指示剂，硼酸呈微弱酸 性（Ka1=5.8 X 10-10），与氨形成强碱弱酸盐， 酒红色→蓝绿色 2NH3 + 4H3 BO3 =(NH4 )2 B4 O7 +5H2 O
④ 滴定 待吸收完全后，再用盐酸标准溶液滴定, 蓝绿色→灰红色 (NH4 )2 B4 O7 +2HCl+5H2 O=2NH4 Cl+4H3 BO3 讨论： 1、实验中用到哪些试剂？作用是什么？
④ 滴定 待吸收完全后，再用盐酸标准溶液滴定, 蓝绿色→灰红色 (NH4 )2 B4 O7 +2HCl+5H2 O=2NH4 Cl+4H3 BO3 讨论： 1、实验中用到哪些试剂？作用是什么？
➢ 适用范围：此法可应用于各类食品中蛋白质含 量测定 ➢ 仪器、试剂: 500mL凯氏烧瓶、凯氏定氮装置 消化用：① 浓硫酸 ② 硫酸钾 ③ 硫酸铜 蒸馏用：④ 40%氢氧化钠溶液 吸收用：⑤ 4%硼酸 滴定用： ⑥ HCl标准溶液 ⑦ 0.1%甲基红乙醇溶液与0.1%溴甲酚绿乙醇 溶液混合指示剂
➢ 适用范围：此法可应用于各类食品中蛋白质含 量测定 ➢ 仪器、试剂: 500mL凯氏烧瓶、凯氏定氮装置 消化用：① 浓硫酸 ② 硫酸钾 ③ 硫酸铜 蒸馏用：④ 40%氢氧化钠溶液 吸收用：⑤ 4%硼酸 滴定用： ⑥ HCl标准溶液 ⑦ 0.1%甲基红乙醇溶液与0.1%溴甲酚绿乙醇 溶液混合指示剂
➢ 微量凯氏定氮法操作步骤 样品消化 → 蒸馏→ 吸收→ 滴定 ①样品消化 : 准确称取一定量的样品至干燥洁净的 500mL凯氏烧瓶中，加入硫酸铜0.5g（1g）、硫酸钾10g （3g)和浓硫酸20mL、玻璃珠数粒→轻轻摇匀，以45º斜 支于石棉网上→用电炉以小火加热(或先烧瓶放在距电 炉较远处)，待内容物全部炭化、泡沫停止产生后→加 大火力(或将烧瓶放在电炉上)，保持瓶内液体微沸→至 液体变蓝绿色透明后→继续加热微沸30min→关闭电炉， 取下烧瓶、冷却→转移至100mL容量瓶中，加水定容
➢ 微量凯氏定氮法操作步骤 样品消化 → 蒸馏→ 吸收→ 滴定 ①样品消化 : 准确称取一定量的样品至干燥洁净的 500mL凯氏烧瓶中，加入硫酸铜0.5g（1g）、硫酸钾10g （3g)和浓硫酸20mL、玻璃珠数粒→轻轻摇匀，以45º斜 支于石棉网上→用电炉以小火加热(或先烧瓶放在距电 炉较远处)，待内容物全部炭化、泡沫停止产生后→加 大火力(或将烧瓶放在电炉上)，保持瓶内液体微沸→至 液体变蓝绿色透明后→继续加热微沸30min→关闭电炉， 取下烧瓶、冷却→转移至100mL容量瓶中，加水定容
❖ 注意问题： ① 加入样品不要沾附在凯氏烧瓶瓶颈； ② 消化开始时不要用强火，要控制好热源，并 注意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷凝酸液将 附在瓶壁上的固体残渣洗下并促进其消化完全； ③ 样品中若含脂肪或糖较多，在消化前应加入 少量辛醇或液体石蜡或硅油作消泡剂，以防消 化过程中产生大量泡沫； ④ 消化完全后要冷至室温才能稀释或定容。所 用试剂溶液应用无氨蒸馏水配制
❖ 注意问题： ① 加入样品不要沾附在凯氏烧瓶瓶颈； ② 消化开始时不要用强火，要控制好热源，并 注意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷凝酸液将 附在瓶壁上的固体残渣洗下并促进其消化完全； ③ 样品中若含脂肪或糖较多，在消化前应加入 少量辛醇或液体石蜡或硅油作消泡剂，以防消 化过程中产生大量泡沫； ④ 消化完全后要冷至室温才能稀释或定容。所 用试剂溶液应用无氨蒸馏水配制