溶液川加入后的沉淀实际上是K+置换了SDS中的 Na+形成了不溶性的PDS,而高浓度的盐有利于变 性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物 凝聚，使得沉淀更完全。 前者是因为中和核酸上的电荷，减少相斥力而互相 聚合，后者是因为盐与SDS-蛋白复合物作用后，能 形成较小的盐形式复合物
溶液III加入后的沉淀实际上是K+置换了SDS中的 Na+形成了不溶性的PDS，而高浓度的盐有利于变 性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物 凝聚，使得沉淀更完全。 前者是因为中和核酸上的电荷，减少相斥力而互相 聚合，后者是因为盐与SDS-蛋白复合物作用后，能 形成较小的盐形式复合物
5、离心、取上清夜于一新的离心管中，加入等体积酚/复 仿（1：1)混匀，抽提。 酞与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚 或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去， 使蛋白失去水合状态而变性。经过离心，变性蛋白质的密度 比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而 与溶解在水相中的DNA分开。而酚与氯仿有机溶剂比重更大， 保 留 在 最 下 层 图
5、离心、取上清夜于一新的离心管中，加入等体积酚/氯 仿（1：1）混匀，抽提。 酞与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚 或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去， 使蛋白失去水合状态而变性。经过离心，变性蛋白质的密度 比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而 与溶解在水相中的DNA分开。而酚与氯仿有机溶剂比重更大， 保留在最下层
站希 √作为表面变性的酚与氯仿，在去除蛋白质的作用中，各有 利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶，大 约10%~15%的水溶解在酚相中，因而损失了这部分水相中 的DNA. √而氯仿的变性作用不如酚效果好，但氯仿与水不相混溶， 不会带走DNA。所以在抽提过程中，混合使用酚与氯仿效果 最好。经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚，由于酚与氯 仿是互溶的，可用氯仿第二次变性蛋白质，此时一起将酚带 走 阳
✓作为表面变性的酚与氯仿，在去除蛋白质的作用中，各有 利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶，大 约10％～15％的水溶解在酚相中，因而损失了这部分水相中 的DNA. ✓而氯仿的变性作用不如酚效果好，但氯仿与水不相混溶， 不会带走DNA。所以在抽提过程中，混合使用酚与氯仿效果 最好。经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚，由于酚与氯 仿是互溶的，可用氯仿第二次变性蛋白质，此时一起将酚带 走
Tris饱和酚： 市售酚在160℃用冷凝管进行重蒸，加入0.1%的8-羟基喹 啉，并用等体积的0.5mol/L Tris-CI(pH8.0)和0.1mol/L Tis·Cl(pH8.O)缓冲液反复抽提使之饱和并使其pH值达到 7.6以上。 原因： A、市售苯酚中含有醌等氧化物，这些产物可引起磷酸二酯 键的断裂及导致RNA和DNA的交联。 B、8-羟基喹琳不仅能抗氧化，并在一定程度上能抑制 DNase的活性，它是金属离子的弱螯合剂
Tris饱和酚： 市售酚在160℃用冷凝管进行重蒸，加入0.1％的8-羟基喹 啉，并用等体积的0.5mol/L Tris·Cl (pH8.0)和0.1mol/L Tris·Cl(pH8.0)缓冲液反复抽提使之饱和并使其pH值达到 7.6以上。 原因： A、市售苯酚中含有醌等氧化物,这些产物可引起磷酸二酯 键的断裂及导致RNA和DNA的交联。 B、8-羟基喹琳不仅能抗氧化，并在一定程度上能抑制 DNase的活性，它是金属离子的弱螯合剂
C、Tris pH8.0水溶液饱和： 酚与水有一定的互溶，苯酚用水饱和的目的是使其抽提 DNA过程中，不致吸收样品中含有DNA的水分，减少 DNA的损失。 用Tis调节至pH为8是因为DNA在此条件下比较稳定。在 中性或碱性条件下(pH5~7),RNA比DNA更容易游离 到水相。 用Tris pH8.0水溶液饱和后的酚，最好分装在棕色小试剂 瓶里，上面盖一层Tis水溶液或TE缓冲液，隔绝空气， 防止氧化
C、Tris pH8.0水溶液饱和： 酚与水有一定的互溶，苯酚用水饱和的目的是使其抽提 DNA过程中，不致吸收样品中含有DNA的水分，减少 DNA的损失。 用Tris调节至pH为8是因为DNA在此条件下比较稳定。在 中性或碱性条件下（pH5～7），RNA比DNA更容易游离 到水相。 用Tris pH8.0水溶液饱和后的酚，最好分装在棕色小试剂 瓶里，上面盖一层Tris水溶液或TE缓冲液，隔绝空气， 防止氧化