2、确定N端(或C端)数目 3、拆分肽链 4、分离提纯各肽链 5、水解及部分水解肽链 6、分离提纯部分水解所得的各肽段 7、氨基酸顺序自动分析仪分析各肽 段的顺序 8、重叠法拼凑蛋白质的一级结构
2、确定N端(或C端)数目 3、拆分肽链 4、分离提纯各肽链 5、水解及部分水解肽链 6、分离提纯部分水解所得的各肽段 7、氨基酸顺序自动分析仪分析各肽 段的顺序 8、重叠法拼凑蛋白质的一级结构
(三)蛋白质一级结构测定的要素分析 1、测定蛋白质中氨基酸的组成(多肽链的水 解) ①酸水解: 6mo/L Hcl 蛋白质 〉LAA混合物 真空的安瓿瓶100°c1024hr 缺点:Trp被破坏,Gn和Asn转化成G|u 和Asp
(三) 蛋白质一级结构测定的要素分析 1、 测定蛋白质中氨基酸的组成(多肽链的水 解) ① 酸水解: 6mol/L HCl 蛋白质————————〉L-AA混合物 真空的安瓿瓶100℃10-24hr 缺点:Trp被破坏,Gln和Asn转化成Glu 和Asp
②碱水解: 4N Ba(oH)2 10hr 蛋白质 〉D,LAA混合物 缺点:含胍基、-S OH的AA被 破坏。 意义:测Trp(与酸法互补) ③酶水解: 多种酶 蛋白质 〉肽段或LAA
②碱水解: 4N Ba(OH)2 10hr 蛋白质——————〉D,L-AA混合物 缺点:含胍基、-S-、-OH的AA被 破坏。 意义:测Trp(与酸法互补)。 ③ 酶水解 : 多种酶 蛋白质——————〉肽段或L-AA
1cm柱,528 02mL拧酸 aAII 8]120162024023203037410450490509130 出/m 氨基酸自动分析仪记录的氨基酸混合物分析结果
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