微生物回复试验 ■菌株:组胺酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌 S Typhimurium),采用TA98、100、97、102,检定 符合要求,80℃或液氮冻存备用 剂量:由药物对细菌的毒性和溶解度决定 最高剂量:a.-般5mg/皿,b,最高溶解度, c根据杀菌情况确定最大浓度 最低剂量:一般1pg/皿或0g/皿。 剂量级:5个以上
微生物回复试验 ◼ 菌 株 : 组 胺 酸 缺 陷 型 鼠 伤 寒 沙 门 氏 菌 (S.Typhimurium), 采用TA98、100、97、102, 检定 符合要求, -80℃或液氮冻存备用 ◼ 剂量：由药物对细菌的毒性和溶解度决定 ▪ 最高剂量：a.一般5mg／皿，b.最高溶解度， c.根据杀菌情况确定最大浓度 ▪ 最低剂量：一般1μg／皿或0.1μg／皿。 ▪ 剂量级：5个以上
微生物回复谜验 代谢活化:加肝脏微粒体酶(9和不加9平行条 件下测试 ■对照:阴性、阳性对照和S9对照 ■方法:标准平板法或预培养法,48h观察结果,如 菌落太小,可继续培养并延长到7h观察结果。每 浓度至少三皿,实验至少重复一次 结果判定:①受试物所诱发的回变菌落数(x±s) 增加,超过对照2倍,量-效关系;②某测试点超 过对照2倍以上,呈现可重复的并有统计学意义的 增加。符合上述任何一条即可判为阳性
微生物回复试验 ◼ 代谢活化：加肝脏微粒体酶(S9)和不加S9平行条 件下测试 ◼ 对照：阴性、阳性对照和S9对照 ◼ 方法：标准平板法或预培养法，48h观察结果，如 菌落太小，可继续培养并延长到72h观察结果。每 一浓度至少三皿，实验至少重复一次 ◼ 结果判定：①受试物所诱发的回变菌落数(ｘ±ｓ) 增加，超过对照2倍，量--效关系；②某测试点超 过对照2倍以上，呈现可重复的并有统计学意义的 增加。符合上述任何一条即可判为阳性
微生物回复谜 如某些药物有明显杀菌作用,可改用哺乳动物细 胞基因突变试验 如某些阳性或可疑阳性时,可选择哺乳动物培养 细胞基因突变试验或果蝇伴性隐性致死试验
微生物回复试验 ◼ 如某些药物有明显杀菌作用，可改用哺乳动物细 胞基因突变试验 ◼ 如某些阳性或可疑阳性时，可选择哺乳动物培养 细胞基因突变试验或果蝇伴性隐性致死试验
哺乳动物培养细胞条色体畸变试验 ■细胞:建议首选中国仓鼠肺细胞(CHL),需定期 检查核型和有无支原体等污染。-80℃或液氮 冻存 剂量:高剂量以50%细胞生长抑制浓度为基准, 最高不要超过10mM分子量。溶解受限时可采 用饱和浓度。中低剂量用倍量稀释法。至少3 个剂量 代谢活化:应用诱导剂处理后的哺乳动物肝微 粒体酶(S9)进行体外代谢活化试验
哺乳动物培养细胞染色体畸变试验 ◼ 细胞: 建议首选中国仓鼠肺细胞(CHL), 需定期 检查核型和有无支原体等污染。-80℃或液氮 冻存 ◼ 剂量：高剂量以50％细胞生长抑制浓度为基准， 最高不要超过10mM分子量。溶解受限时可采 用饱和浓度。中低剂量用倍量稀释法。至少３ 个剂量 ◼ 代谢活化：应用诱导剂处理后的哺乳动物肝微 粒体酶（S9）进行体外代谢活化试验