1.涂片、染色于载玻片中央一小滴石炭酸复红液，用接种环取菌体少许，放于石炭酸复红液液滴中，混匀并涂成薄层，自然干燥后，同上法涂抹黑色素液，晾干。2．镜检，方法同上。方法三1.涂片取干净载玻片一张，于中央滴加1小滴黑色素液，用接种环以无菌操作法取菌体少许放入黑色素液滴中充分混勾2.加盖片取洁净盖玻片一张，以倾斜式轻轻复盖于混合液上，然后在盖玻片上放一小片吸水纸（或滤纸），轻轻按压，以便吸收盖玻片周边多余的混合液。3.镜检用低倍镜、高倍镜观察。背景黑色，细胞较暗，其周围呈现出明亮的透明圈，即荚膜。五、实验报告绘出细菌荚膜镜检图。六、思考题1.荚膜染色法的原理是什么？2.荚膜染色中应注意的事项是什么？
1.涂片、染色 于载玻片中央一小滴石炭酸复红液，用接种环取菌体少许，放 于石炭酸复红液液滴中，混匀并涂成薄层，自然干燥后，同上法涂抹黑色素液，晾干 。 2．镜检，方法同上。 方法三 1.涂片 取干净载玻片一张，于中央滴加 1 小滴黑色素液，用接种环以无菌操 作法取菌体少许放入黑色素液滴中充分混匀. 2．加盖片 取洁净盖玻片一张，以倾斜式轻轻复盖于混合液上，然后在盖玻片 上放一小片吸水纸（或滤纸），轻轻按压，以便吸收盖玻片周边多余的混合液。 3.镜检 用低倍镜、高倍镜观察。背景黑色，细胞较暗，其周围呈现出明亮的 透明圈，即荚膜。 五、实验报告 绘出细菌荚膜镜检图。 六、思考题 1.荚膜染色法的原理是什么？ 2.荚膜染色中应注意的事项是什么？
实验七细菌的芽孢染色法一、自的要求学习芽孢染色法，观察细胞芽孢的形态特征及着生位置。二、基本原理细菌的芽孢具有厚而致密的壁，通透性差，不易着色。普通染色法只能使细胞着色，而芽抱显示不着色的透明体，因而需用特殊的芽孢抱染色法。该法是采用着色力强或高浓度的染料，进行加温处理并延长染色时间，使菌体与芽孢均染上颜色，芽孢一旦着色就难以脱色。再通过脱色剂脱去菌体颜色而保留芽孢的颜色，然后再用复染剂复染菌体，使菌体与芽孢呈现不同的颜色，便于观察。三、实验材料1.菌种培养2430h的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌或状芽孢杆菌(Bac.mycoides)。2.器材5%孔雀绿液，石炭酸复红液，酒精丙酮液，试管，木夹，载玻片及接种、染色、镜检用物。四、实验步骤方法一1.涂片取干净载玻片一张，于中央滴蒸馏水少许，按无菌操作法取菌，涂片，风干，加热固定，冷却。2.初染将涂片放在染色架上，于涂面处滴加孔雀绿染色液数滴。手持染色架，于灯焰高处徐徐加热至有蒸气冒出，随时补加染液覆盖涂面，防止沸腾或蒸干。维持8~10min，水洗脱色，至无绿色出现为度。3.复染用石炭酸复红液复染30s~1min，水洗晾干。4.镜检在低倍镜、油镜下观察。芽孢呈绿色，菌体呈红色，方法二1.初染取试管1支，加蒸馏水7～8滴，按无菌操作法用接种环挑取菌种1满环，混于蒸馏水中制成浓菌悬液。再于管中滴加等量的石炭酸复红液，用木夹夹好，于灯焰上加热近沸，维持3～4min（加热近沸时应离开灯焰，管口向外，以防喷出）2.涂片用接种环取加热后的菌悬液23环，制成涂片、风干、加热固定、冷
实验七 细菌的芽孢染色法 细菌的芽孢染色法 细菌的芽孢染色法 细菌的芽孢染色法 一、目的要求 学习芽孢染色法，观察细胞芽孢的形态特征及着生位置。 二、基本原理 细菌的芽孢具有厚而致密的壁，通透性差，不易着色。普通染色法只能使细胞着 色，而芽孢显示不着色的透明体，因而需用特殊的芽孢染色法。该法是采用着色力强 或高浓度的染料，进行加温处理并延长染色时间，使菌体与芽孢均染上颜色，芽孢一 旦着色就难以脱色。再通过脱色剂脱去菌体颜色而保留芽孢的颜色，然后再用复染剂 复染菌体，使菌体与芽孢呈现不同的颜色，便于观察。 三、实验材料 1.菌种 培养 24～30h 的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌或 状芽孢杆菌 （Bac.mycoides Bac.mycoides Bac.mycoides Bac.mycoides）。 2.器材 5%孔雀绿液，石炭酸复红液，酒精丙酮液，试管，木夹，载玻片及接 种、染色、镜检用物。 四、实验步骤 方法一 1.涂片 取干净载玻片一张，于中央滴蒸馏水少许，按无菌操作法取菌，涂片， 风干，加热固定，冷却。 2.初染 将涂片放在染色架上，于涂面处滴加孔雀绿染色液数滴。手持染色架， 于灯焰高处徐徐加热至有蒸气冒出，随时补加染液覆盖涂面，防止沸腾或蒸干。维持 8～10min，水洗脱色，至无绿色出现为度。 3.复染 用石炭酸复红液复染 30s～1min，水洗晾干。 4.镜检 在低倍镜、油镜下观察。芽孢呈绿色，菌体呈红色。 方法二 1.初染 取试管 1 支，加蒸馏水 7～8 滴，按无菌操作法用接种环挑取菌种 1 满环，混于蒸馏水中制成浓菌悬液。再于管中滴加等量的石炭酸复红液，用木夹夹好 ， 于灯焰上加热近沸，维持 3～4min（加热近沸时应离开灯焰，管口向外，以防喷出）。 2.涂片 用接种环取加热后的菌悬液 2～3 环，制成涂片、风干、加热固定、冷
却。3.脱色于涂片上滴加酒精丙酮液1~2滴，进行脱色30s4.复染用5%孔雀绿液复染2~5min，水洗，晾干。5.镜检油镜下观察。芽孢呈红色，菌体呈绿色。五、实验报告图示镜检芽孢杆菌的芽孢形状及着生位置，并注明染色结果。六、思考题芽孢杆菌属与梭状芽孢杆菌属的芽孢形状与着生位置有何异同？
却。 3.脱色 于涂片上滴加酒精丙酮液 1～2 滴，进行脱色 30s。 4.复染 用 5%孔雀绿液复染 2～5min，水洗，晾干。 5.镜检 油镜下观察。芽孢呈红色，菌体呈绿色。 五、实验报告 图示镜检芽孢杆菌的芽孢形状及着生位置，并注明染色结果。 六、思考题 芽孢杆菌属与梭状芽孢杆菌属的芽孢形状与着生位置有何异同？
实验八放线菌形态及菌落特征的观察一、自的要求学习入线菌的制片方法，观察放线菌的细胞形态和菌落特征。二、基本原理放线菌是由菌丝组成的分枝丝状体，以链霉菌属（Streptomyces）的菌丝体最发达。菌丝可分为基内菌丝（较细）、气生菌丝（较粗）、孢子丝三种。放线菌发育到一定阶段，孢子丝即形成孢子。孢子丝有直形、波曲形、螺旋形（左旋、右旋、密螺、疏螺之分）、轮生、单搓分枝等；孢子有球形、椭圆形、柱状或瓜子形、刺型、疣突型、毛发型等常成串排列或单个存在。这些特征是鉴定菌种的重要依据之一。放线菌菌落特征：园形、较小、干燥、质地致密，表面粉粒状或茸毛状，有的呈同心环或辐射状。基内菌丝与培养基结合紧密，用针难以挑取。菌丝体与孢子常具有不同色素，故菌落正面与背成可显示相应颜色。有的种类散发有特殊气味。三、实验材料1.菌种细黄链霉菌（5～6）（Str.microflavus），灰色链霉菌（Str.griseus），天蓝色链霉菌（Str.coelicolor）的插片培养物或划线法培养的菌落。2.器材石炭酸复红液或美兰染色液，载玻片，解剖针，镊子，无菌水管及接种、染色、镜检用物。四、实验步骤（一）放线菌细胞形态的观察方法一插片法1.插片制作用接种环取放线菌斜面培养管的菌体少许，放入无菌水管中制成孢子悬液，用无菌吸管取孢子悬液一滴，放入高氏1号平板培养基上，用无菌刮铲涂抹均匀后，将已消毒好的盖玻片，以45℃角插入培养基中（如图1一17）置28～30℃下培养4~5d。还可采取先插盖玻片，再以接种环取孢子悬液接种于盖玻片与培养基相接的沿线处。2.制片用镊子取插片一张，用吸水纸擦去生长较差一面的菌丝体，然后用镊子夹住盖玻片，使有菌面朝上，通过灯焰23次进行加热固定、冷却
实验八 放线菌形态及菌落特征的观察 放线菌形态及菌落特征的观察 放线菌形态及菌落特征的观察 放线菌形态及菌落特征的观察 一、目的要求 学习入线菌的制片方法，观察放线菌的细胞形态和菌落特征。 二、基本原理 放线菌是由菌丝组成的分枝丝状体，以链霉菌属（Streptomyces Streptomyces Streptomyces Streptomyces）的菌丝体最发 达。菌丝可分为基内菌丝（较细）、气生菌丝（较粗）、孢子丝三种。放线菌发育到一 定阶段，孢子丝即形成孢子。孢子丝有直形、波曲形、螺旋形（左旋、右旋、密螺、 疏螺之分）、轮生、单搓分枝等；孢子有球形、椭圆形、柱状或瓜子形、刺型、疣突 型、毛发型等常成串排列或单个存在。这些特征是鉴定菌种的重要依据之一。 放线菌菌落特征：园形、较小、干燥、质地致密，表面粉粒状或茸毛状，有的呈 同心环或辐射状。基内菌丝与培养基结合紧密，用针难以挑取。菌丝体与孢子常具有 不同色素，故菌落正面与背成可显示相应颜色。有的种类散发有特殊气味。 三、实验材料 1.菌种 细黄链霉菌（5～6）（ Str.microflavus Str.microflavus Str.microflavus Str.microflavus）,灰色链霉菌（Str.griseus Str.griseus Str.griseus Str.griseus）， 天 蓝色链霉菌（Str.coelicolor Str.coelicolor Str.coelicolor Str.coelicolor）的插片培养物或划线法培养的菌落。 2.器材 石炭酸复红液或美兰染色液，载玻片，解剖针，镊子，无菌水管及接种 、 染色、镜检用物。 四、实验步骤 （一）放线菌细胞形态的观察 方法一 插片法 1. 插片制作 用接种环取放线菌斜面培养管的菌体少许，放入无菌水管中制成 孢子悬液，用无菌吸管取孢子悬液一滴，放入高氏 1 号平板培养基上，用无菌刮铲涂 抹均匀后，将已消毒好的盖玻片，以 45℃角插入培养基中（如图 1—17）置 28～30 ℃下培养 4～5d。 还可采取先插盖玻片，再以接种环取孢子悬液接种于盖玻片与培养基相接的沿线 处。 2.制片 用镊子取插片一张，用吸水纸擦去生长较差一面的菌丝体，然后用镊子 夹住盖玻片，使有菌面朝上，通过灯焰 2～3 次进行加热固定、冷却
3.染色在盖玻片上滴加一滴石炭酸复红液染色1min，水洗，干燥。4.镜检取干净载玻片一张，将盖玻片染色面向下，放在载玻片中央，在低倍镜、高倍镜、油镜下观察，辩认放线菌的菌丝体、孢子丝及孢子的形态及排列方式。方法二搭片法1.制片用无菌接种小铲（竹制或金属制）在高氏一平板培养基上开挖两条宽约0.5cm左右平行槽，用接种环从放线菌斜面培养管上取面熟孢子接种于槽内边缘一侧，然后用无菌镊子夹取无菌盖玻片，轻轻搭放在接种后的槽面上轻压，每条槽可盖3~4片，于28℃下培养5~7d（如图118）。2.镜检用镊子小心地取下盖玻片，放置于干净载玻片上，有菌的一面朝上，在低倍镜或高倍镜下观察丝自然生长形态及孢子丝等结构。方法三印片法1.菌落培养采用平板划线法或涂抹法分离出孤立菌落。2.制片取一张干净的载玻片，在灯焰上微热后放在染色架上；用解部针切割一个完整的菌落（连同培养基一起），并以解剖针穿入培养基中小心的取出菌块，将菌落面紧贴在微热过的载玻片中央，轻轻按压，切忌不可滑动移位，然后再小心挑去菌块。2.加热固定将载玻片通过灯焰23次，冷却。3.染色滴加石炭酸复红液染色1min或美蓝液染色2～3min，水洗，干燥。4.镜检在低倍镜、高倍镜、油镜下观察。（二）放线菌菌落特征的观察观察放线菌的菌落，注意其大小、形状、色泽（正面与背面）、表面状况、干燥或湿润、气味有无等，描述其特征。五、实验报告1.图示你观察的放线菌细胞形态，区分气生菌丝、孢子丝及孢子排列方式，2.记述几种放线菌的菌落的特征。六、思考题放线菌制片法与细菌制片法有何不同？
3.染色 在盖玻片上滴加一滴石炭酸复红液染色 1min，水洗，干燥。 4.镜检 取干净载玻片一张，将盖玻片染色面向下，放在载玻片中央，在低倍镜 、 高倍镜、油镜下观察，辩认放线菌的菌丝体、孢子丝及孢子的形态及排列方式。 方法二 搭片法 1.制片 用无菌接种小铲（竹制或金属制）在高氏一平板培养基上开挖两条宽约 0.5cm 左右平行槽，用接种环从放线菌斜面培养管上取面熟孢子接种于槽内边缘一 侧，然后用无菌镊子夹取无菌盖玻片，轻轻搭放在接种后的槽面上轻压，每条槽可盖 3～4 片，于 28℃下培养 5～7d（如图 1—18）。 2.镜检 用镊子小心地取下盖玻片，放置于干净载玻片上，有菌的一面朝上，在 低倍镜或高倍镜下观察丝自然生长形态及孢子丝等结构。 方法三 印片法 1.菌落培养 采用平板划线法或涂抹法分离出孤立菌落。 2．制片 取一张干净的载玻片，在灯焰上微热后放在染色架上；用解剖针切割 一个完整的菌落（连同培养基一起），并以解剖针穿入培养基中小心的取出菌块，将 菌落面紧贴在微热过的载玻片中央，轻轻按压，切忌不可滑动移位，然后再小心挑去 菌块。 2.加热固定 将载玻片通过灯焰 2～3 次，冷却。 3.染色 滴加石炭酸复红液染色 1min 或美蓝液染色 2～3min，水洗，干燥。 4.镜检 在低倍镜、高倍镜、油镜下观察。 （二）放线菌菌落特征的观察 观察放线菌的菌落，注意其大小、形状、色泽（正面与背面）、表面状况、干燥 或湿润、气味有无等，描述其特征。 五、实验报告 1.图示你观察的放线菌细胞形态，区分气生菌丝、孢子丝及孢子排列方式。 2.记述几种放线菌的菌落的特征。 六、思考题 放线菌制片法与细菌制片法有何不同？