实验四细菌的简单染色法一、目的要求学习细菌的简单染色法，观察细菌的形态特征。二、基本原理细菌个体小而透明，活细胞与水及玻璃的折光率相差无几，在普通光学显微镜下难以看清。若经染料染色后，增强了细胞折光性，借助颜色的反衬作用，就能看清它们有形状、大小和排列方式。细菌细胞含核酸较多，故一般染色多用碱性染料，如碱性复红（Basicfuchsin）、美蓝（ethyleneblue）、结晶紫（Crystalviolet）、孔雀绿（Malachitegreen）、番红（SsfranineO）等，染料需预先配成染液供使用。简单染色法是用一种染料进行染色。此法仅能显示其形态，而不能辩别其构造。三、实验材料1.菌种培养18～24h的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌（Bac.megathrium）、或培养48h的四联微球菌（Micrococcustetragenus）、金色微球菌（Micrococcusaureus),2.器材石炭酸复红液或美蓝染色液，或结晶紫染色液，或番红染色液，蒸馏水（滴瓶装），载玻片，接种环，酒精灯，火柴，洗瓶，染色盆，染色架，废物缸，吸水纸，擦镜纸，显微镜，双层瓶。四、实验步骤制作细菌标本的步骤：涂片→干燥→加热固定→冷却→染色→水洗→干燥→镜检。1.涂片取干净载玻片一张放于染色架上。于载玻片两处分别滴加蒸馏水一小滴，以无菌操作法用接种环取斜面菌种菌体少许，放于载玻片一处的水滴中混匀，并涂成均匀的薄层；另一滴水同法放入第二种菌体涂勾（图1一7)。2.干燥使涂片在空气中自然风干或在酒精灯焰高处（距火焰8～10cm）微热烘干。3.加热固定将干燥后的涂片用手拿住一端（涂面向上），以钟摆摆动速度通过酒精灯焰2～3次，使加热固定。目的是杀死细菌以接连强细胞着色力，并使细胞粘
实验四 细菌的简单染色法 细菌的简单染色法 细菌的简单染色法 细菌的简单染色法 一、目的要求 学习细菌的简单染色法，观察细菌的形态特征。 二、基本原理 细菌个体小而透明，活细胞与水及玻璃的折光率相差无几，在普通光学显微镜 下难以看清。若经染料染色后，增强了细胞折光性，借助颜色的反衬作用，就能看清 它们有形状、大小和排列方式。 细菌细胞含核酸较多，故一般染色多用碱性染料，如碱性复红（Basic fuchsin fuchsin fuchsin fuchsin）、 美蓝（ethylene ethylene ethylene ethylene blue）、结晶紫（Crystal Crystal Crystal Crystal violet）、 孔雀绿（Malachite Malachite Malachite Malachite green）、 番红 （Ssfranine Ssfranine Ssfranine Ssfranine O）等，染料需预先配成染液供使用。 简单染色法是用一种染料进行染色。此法仅能显示其形态，而不能辩别其构造。 三、实验材料 1.菌种 培养 18～24h 的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌（Bac.megathrium Bac.megathrium Bac.megathrium Bac.megathrium）、 或培养 48h 的四联微球菌（Micrococcus Micrococcus Micrococcus Micrococcus tetragenus tetragenus tetragenus tetragenus）、金色微球菌（Micrococcus Micrococcus Micrococcus Micrococcus aureus）。 2.器材 石炭酸复红液或美蓝染色液，或结晶紫染色液，或番红染色液，蒸馏 水（滴瓶装），载玻片，接种环，酒精灯，火柴，洗瓶，染色盆，染色架，废物缸， 吸水纸，擦镜纸，显微镜，双层瓶。 四、实验步骤 制作细菌标本的步骤：涂片→干燥→加热固定→冷却→染色→水洗→干燥→镜 检。 1.涂片 取干净载玻片一张放于染色架上。于载玻片两处分别滴加蒸馏水一小 滴，以无菌操作法用接种环取斜面菌种菌体少许，放于载玻片一处的水滴中混匀，并 涂成均匀的薄层；另一滴水同法放入第二种菌体涂匀（图 1—7）。 2．干燥 使涂片在空气中自然风干或在酒精灯焰高处（距火焰 8～10cm）微热 烘干。 3.加热固定 将干燥后的涂片用手拿住一端（涂面向上），以钟摆摆动速度通过 酒精灯焰 2～3 次，使加热固定。目的是杀死细菌以接连强细胞着色力，并使细胞粘
着于载玻片上。4.染色将载玻片放回染色架上，待冷却。任取染色剂一种，滴1～2滴于二处的涂面上进行染色。一般碱性复红染色30s～1min，（或用美蓝染色23min，或结晶紫染色1min，或番红染色2~3min）。5.水洗染色完毕，手持染色架略呈倾斜状，用洗瓶从载玻片一端缓慢冲洗染液，让废液流入染色盆中。再用吸水纸吸去载玻片上的残留水滴，自然干燥。6.镜检先用低倍镜寻找标本的最好部位，再换高倍镜、油镜观察，绘图。图115细菌染色标本涂片制作过程1.接种环灭菌2.拔棉塞3.管口灭菌4.取菌5.管口灭菌6.加棉塞7.涂片8.接种环灭菌五、实验报告绘出你镜检的细菌细胞形态图2～3个，注明细菌名称及放大倍数。六、思考题1.简单染色法的原理与步骤是什么？2.涂片的要点是什么？加热固定的目的何在？
着于载玻片上。 4.染色 将载玻片放回染色架上，待冷却。任取染色剂一种，滴 1～2 滴于二处 的涂面上进行染色。一般碱性复红染色 30s～1min，（或用美蓝染色 2～3min，或结 晶紫染色 1min，或番红染色 2～3min）。 5.水洗 染色完毕，手持染色架略呈倾斜状，用洗瓶从载玻片一端缓慢冲洗染 液，让废液流入染色盆中。再用吸水纸吸去载玻片上的残留水滴，自然干燥。 6.镜检 先用低倍镜寻找标本的最好部位，再换高倍镜、油镜观察，绘图。 图 1—15 细菌染色标本涂片制作过程 1.接种环灭菌 2.拔棉塞 3.管口灭菌 4.取菌 5.管口灭菌 6.加棉塞 7.涂片 8.接种环灭菌 五、实验报告 绘出你镜检的细菌细胞形态图 2～3 个，注明细菌名称及放大倍数。 六、思考题 1.简单染色法的原理与步骤是什么？ 2.涂片的要点是什么？加热固定的目的何在？
实验五细菌的革兰氏染色法一、自的要求了解革兰氏染色的原理，掌握革兰氏染色的方法以鉴别细菌。二、基本原理革兰氏染色法是细菌学中一种重要的鉴别染色法。其方法是，细菌涂片先经结晶紫初染，加媒染剂碘液处理，再以脱色剂酒精脱色，最后用复染剂番红复染。若细菌不被脱色而保留紫红色者，称为革兰氏阳性菌或正反应（用G+表示）；若被脱色而染上复染剂的粉红色者，称为革兰氏阴性菌或负反应（用G表示）。革兰氏染色常受菌龄、培养基的PH的染色技术等的影响，一般采用幼龄菌为宜。革兰氏染色机理虽然至今还不完全清楚，但显然与两类细菌的细胞壁成份和结构有密切关系。革兰氏阴性菌的细胞壁中含较多的类脂质，而肽聚糖含量较少。当用酒精脱色时，类脂质被溶解，从而增加了细胞壁的通透性，使初染后的结晶紫与碘的复合物易于渗出，结果细胞被脱色，经复染后则呈现复染剂的颜色。而革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖含量多且交联度大，类脂质含量少，经酒精脱色后，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，因而细胞仍保留初染时的颜色。三、实验材料1.菌种培养24h的大肠杆菌（E.coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus).2.器材结晶紫染色液，路哥（Lugol）氏碘液，95%酒精，番红或石炭酸复红染色液，载玻片，接种环，酒精灯及其它染色、镜检用物。四、实验步骤革兰氏染色的程序为：水洗水洗水洗涂片→干燥→加热固定→冷却→结晶紫初染→碘液媒染→酒精脱色→番红复染水洗→干燥→镜检。1.涂片、固定取干净载玻片一张放在染色架上，分别在载玻片的两处各滴一小滴蒸馏水，按无菌操作法用接种环分别取大肠杆菌与葡萄球菌少许，各涂于一处的水滴内（作好标记），涂匀、干燥、加热固定
实验五 细菌的革兰氏染色法 细菌的革兰氏染色法 细菌的革兰氏染色法 细菌的革兰氏染色法 一、目的要求 了解革兰氏染色的原理，掌握革兰氏染色的方法以鉴别细菌。 二、基本原理 革兰氏染色法是细菌学中一种重要的鉴别染色法。其方法是，细菌涂片先经结 晶紫初染，加媒染剂碘液处理，再以脱色剂酒精脱色，最后用复染剂番红复染。若细 菌不被脱色而保留紫红色者，称为革兰氏阳性菌或正反应（用 G+表示）；若被脱色而 染上复染剂的粉红色者，称为革兰氏阴性菌或负反应（用 G-表示）。革兰氏染色常受 菌龄、培养基的 PH 的染色技术等的影响，一般采用幼龄菌为宜。 革兰氏染色机理虽然至今还不完全清楚，但显然与两类细菌的细胞壁成份和结 构有密切关系。革兰氏阴性菌的细胞壁中含较多的类脂质，而肽聚糖含量较少。当用 酒精脱色时，类脂质被溶解，从而增加了细胞壁的通透性，使初染后的结晶紫与碘的 复合物易于渗出，结果细胞被脱色，经复染后则呈现复染剂的颜色。而革兰氏阳性菌 细胞壁中肽聚糖含量多且交联度大，类脂质含量少，经酒精脱色后，肽聚糖层的孔径 变小，通透性降低，因而细胞仍保留初染时的颜色。 三、实验材料 1.菌种 培养 24h 的大肠杆菌（E.coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus aureus）。 2.器材 结晶紫染色液，路哥（Lugol）氏碘液，95%酒精，番红或石炭酸复红 染色液，载玻片，接种环，酒精灯及其它染色、镜检用物。 四、实验步骤 革兰氏染色的程序为： 水洗 水洗 水洗 涂片→干燥→加热固定→冷却→结晶紫初染→碘液媒染→酒精脱色→番红复染 水洗→干燥→镜检。 1.涂片、固定 取干净载玻片一张放在染色架上，分别在载玻片的两处各滴一 小滴蒸馏水，按无菌操作法用接种环分别取大肠杆菌与葡萄球菌少许，各涂于一处的 水滴内（作好标记），涂匀、干燥、加热固定
2.染色待涂片冷却后染色。先滴加结晶紫染色1min，用水冲去染液，控净水，再滴加碘液媒染1min，倾去碘液，水洗，以95%酒精脱色20～30s（严格掌握时间），水洗，最后滴加番红复染2～3min（或用石炭酸复红复染30s），水洗，干燥3.镜检先用低倍镜寻找标本清晰部位，再换油镜观察细胞形态及染色结果。五、实验报告绘出油镜下的细胞形态图，注明细胞颜色，说明染色反应。六、思考题1.革兰氏染色法哪一步最关键？为什么？2.革兰氏染色法为何要求用幼龄细胞进行染色？
2.染色 待涂片冷却后染色。先滴加结晶紫染色 1min，用水冲去染液，控净水 ， 再滴加碘液媒染 1min，倾去碘液，水洗，以 95%酒精脱色 20～30s（严格掌握时间）， 水洗，最后滴加番红复染 2～3min（或用石炭酸复红复染 30s），水洗，干燥。 3.镜检 先用低倍镜寻找标本清晰部位，再换油镜观察细胞形态及染色结果。 五、实验报告 绘出油镜下的细胞形态图，注明细胞颜色，说明染色反应。 六、思考题 1.革兰氏染色法哪一步最关键？为什么？ 2.革兰氏染色法为何要求用幼龄细胞进行染色？
实验六细菌的荚膜染色法一、自的要求学习荚膜染色技术，观察细菌的荚膜形态。二、基本原理荚膜（Capsule）是某些细菌分泌于细胞壁外的一层粘性物质，具一定形状，其主要成分为多糖，它与染料亲合力很弱，不易着色；但荚膜通透性较好，某些染料可透过荚膜使菌体着色。因此，染色后要菌体周围有一浅色或无色的透明圈，即荚膜。荚膜染色常采用负染色法，也称衬托染色法。此法使菌体和背景显色，来衬托出无色的荚膜。荚膜易溶于水，故染色中尽量少用水。荚膜受热失水易引起皱缩变形，故不必加热固定。也可用酒精划甲醇进行固定。三、实验材料1.菌种在阿须贝(Ashby)无氮培养基上培养3～4d的褐球固氮菌（Az.chroococ-cum）、培养2d胶质芽孢杆菌（B.mucilaginosus）。2.器材石炭酸复红液、黑色素液（或碳素墨水），95%酒清，载玻片，接种环及其它染色、镜检用物。四、实验步骤方法一1.涂片取干净载玻片一张，于中央滴加蒸馏水少许，用接种环以无菌操作法取菌体少许放入蒸馏水中混匀并涂成薄层，晾干。2.固定滴加95%酒精一滴固定1min，倾去，晾干。3.染色加石炭酸复红液染色1min，水洗，晾干。4.涂背景于涂片一端滴少许（半滴）黑色素液，另取一张边缘光滑的载玻片，将其一端放于黑色素液滴中，以30℃角顺势向涂片另一端滑动（图1一16），使涂片成一均匀薄层，自然干燥。5.镜检在高倍镜或油镜下观察。细胞呈红色，背景淡灰色，中间显示无色的透明圈，即荚膜。方法二
实验六 细菌的荚膜染色法 细菌的荚膜染色法 细菌的荚膜染色法 细菌的荚膜染色法 一、目的要求 学习荚膜染色技术，观察细菌的荚膜形态。 二、基本原理 荚膜（Capsule Capsule Capsule Capsule）是某些细菌分泌于细胞壁外的一层粘性物质，具一定形状，其 主要成分为多糖，它与染料亲合力很弱，不易着色；但荚膜通透性较好，某些染料可 透过荚膜使菌体着色。因此，染色后要菌体周围有一浅色或无色的透明圈，即荚膜。 荚膜染色常采用负染色法，也称衬托染色法。此法使菌体和背景显色，来衬托 出无色的荚膜。 荚膜易溶于水，故染色中尽量少用水。荚膜受热失水易引起皱缩变形，故不必 加热固定。也可用酒精划甲醇进行固定。 三、实验材料 1. 菌 种 在 阿 须 贝 (Ashby) (Ashby) (Ashby) (Ashby) 无 氮 培 养 基 上 培 养 3 ～ 4d 的 褐 球 固 氮 菌 （Az.chroococ-cum Az.chroococ-cum Az.chroococ-cum Az.chroococ-cum）、 培养 2d 胶质芽孢杆菌（B.mucilaginosus B.mucilaginosus B.mucilaginosus B.mucilaginosus）。 2.器材 石炭酸复红液、黑色素液（或碳素墨水），95%酒清，载玻片，接种环 及其它染色、镜检用物。 四、实验步骤 方法一 1.涂片 取干净载玻片一张，于中央滴加蒸馏水少许，用接种环以无菌操作法 取菌体少许放入蒸馏水中混匀并涂成薄层，晾干。 2.固定 滴加 95%酒精一滴固定 1min，倾去，晾干。 3.染色 加石炭酸复红液染色 1min，水洗，晾干。 4.涂背景 于涂片一端滴少许（半滴）黑色素液，另取一张边缘光滑的载玻片， 将其一端放于黑色素液滴中，以 30℃角顺势向涂片另一端滑动（图 1—16），使涂片 成一均匀薄层，自然干燥。 5.镜检 在高倍镜或油镜下观察。细胞呈红色，背景淡灰色，中间显示无色的 透明圈，即荚膜。 方法二