转基因技术中所用的外源基因是由 顺式作用元件和结构基因组成的完 整基因（即完整的转录单位）。由 于哺乳类动物之间基因的同源性较 高，为了检测方便，有时需引人报 告基因(reporter gene))或报告序列 (reporter sequence)。顺式作用元件 主要选用有较高表达活性的强启动 子（有时包括增强子），或者直接选 用目的基因的天然启动子序列
◼ 转基因技术中所用的外源基因是由 顺式作用元件和结构基因组成的完 整基因（即完整的转录单位）。由 于哺乳类动物之间基因的同源性较 高，为了检测方便，有时需引人报 告基因(reporter gene)或报告序列 (reporter sequence)。顺式作用元件 主要选用有较高表达活性的强启动 子（有时包括增强子), 或者直接选 用目的基因的天然启动子序列
三、转基因动物的基本方法 L.显微注射法(microifljection〉 显微注射是目前最常用的转基因方法之 一，其基本原理是用显微注射针将外源 基因直接注入实验动物受精卵的原核， 使外源基因整合到实验动物基因组中， 从而得到转基因动物。优点是：导入基 因的速度快且操作简单，对DNA大小无 限制（最大已达250kb)
三、转基因动物的基本方法 1.显微注射法 （microifljection） 显微注射是目前最常用的转基因方法之 一，其基本原理是用显微注射针将外源 基因直接注入实验动物受精卵的原核， 使外源基因整合到实验动物基因组中， 从而得到转基因动物。优点是：导入基 因的速度快且操作简单，对DNA大小无 限制（最大已达250kb）
转基因动物的一般实验程序 克隆DNA 供体母鼠 酶解、分离、纯化、定量 注射激素(PMS,HCG),与公鼠交 目的基因DNA片段 鼠受精卵 配 显微注射 注射DNA的受精卵 输卵管或子宫移卵 假孕母鼠 →冻存的胚鼠组织 传代转基因鼠， 娩出幼鼠 ,取出鼠胚胎 胎鼠组织 冻存幼鼠血液 幼鼠尾巴 制备DNA 制备转基因鼠的 DNA、蛋白质 外源基因的整合检测 表达水平检测 确定转基因鼠
转基因动物的一般实验程序 克隆DNA 供体母鼠 酶解、分离、纯化、定量 注射激素（PMS，HCG），与公鼠交 目的基因DNA片段 配 鼠受精卵 显微注射 注射DNA的受精卵 输卵管或子宫移卵 假孕母鼠 冻存的胚鼠组织 取出鼠胚胎 胎鼠组织 制备DNA 传代转基因鼠 娩出幼鼠 冻存幼鼠血液 制备转基因鼠的 DNA、蛋白质 表达水平检测 外源基因的整合检测 确定转基因鼠 幼鼠尾巴
2.胚胎干细胞法(embryonic stem cells, E$细胞)胚胎干细胞是从着床前的动物 胚胎中分离获得的一种多功能胚胎干细 胞。由于它注射入动物囊胚后可参与宿 主的胚胎构成，形成嵌合体，直至达到 种系嵌合，因此，可将其作为一种载体， 把外源基因导入个体，获得转基因动物。 ES细胞可通过磷酸钙-DNA共沉淀法、 逆转录病毒感染或电穿孔等方法转染， 然后进行筛选和克隆
◼ 2.胚胎干细胞法 （embryonic stem cells， ES细胞）胚胎干细胞是从着床前的动物 胚胎中分离获得的一种多功能胚胎干细 胞。由于它注射入动物囊胚后可参与宿 主的胚胎构成，形成嵌合体，直至达到 种系嵌合，因此，可将其作为一种载体， 把外源基因导入个体，获得转基因动物。 ES细胞可通过磷酸钙-DNA共沉淀法、 逆转录病毒感染或电穿孔等方法转染， 然后进行筛选和克隆
3.逆转录病毒感染法 将外源基因与逆转录病毒载体在体 外构建成重组逆转录病毒载体，然 后将其转染包装细胞，这时，既可 以收获重组病毒颗粒，用于早期胚 胎的转染，又可以将胚胎直接加入 包装细胞培养物中共培养进行转染。 转染后的胚胎可移植给假孕动物完 成发育过程
将外源基因与逆转录病毒载体在体 外构建成重组逆转录病毒载体，然 后将其转染包装细胞，这时，既可 以收获重组病毒颗粒，用于早期胚 胎的转染，又可以将胚胎直接加入 包装细胞培养物中共培养进行转染。 转染后的胚胎可移植给假孕动物完 成发育过程。 3.逆转录病毒感染法