器，需要用20%酒精再次清洗系统泵。并将收集器上的玻璃管收拾干净，并用水清洗，放于管架晾干。5.蛋白质纯化图谱的保存与提取（1）保存：在电脑桌面打开primeviewevaluation软件，打来文件夹：在里面按照时间顺序找到你蛋白质纯化图谱，然后点击file，选择saveas将你的图保存在你的文件夹。（2）提取：点击file，选择export→curves→选择01：UV和06：Conc一→并在Reducenumberofsamples中选择Reduceby1。点击保存，得到excel表格，并用Graphpadprism5做蛋白纯化图谱（有视频教学）。关键步骤品提前看好转盘与滴液体的部分是否靠紧，否则不会自动收集样品。根据出峰位置选择样品，一般会有30mL左右，加入终浓度1mMEDTA和2mMDTT以及0.5mMPMSF，取60μL制备SDS-PAGE样品。利用AKTAPrimePlus过分子筛1.打开AKTA，将A泵用gelfiltrationbuffer清洗（同上文镍柱清洗）。并用gelfiltrationbuffer手动或者程序设定清洗上样环。2.systemwash完毕后，先选择manualrun，%B=0，pressurelimitation=0.4MPa，流速=2mL/min（根据不同分子筛设定流速）。先将AKTA上1号接线口湿接上部分子筛，此时观察柱子管道是否有气泡，如果有气泡那么应该将1号接口线湿接到分子筛尾部接口，待分子筛头部管道空气排清后再正过来接柱子，最后将柱子尾部接口接到探测器上。观察电脑屏幕待UV线、电导线平齐时Endprogram。3.Superloop接上，6号出口线接superloop上面，下面出来接上2号口。4.设定程序（以30mL样品和320mL分子筛为例）：程序流速：2mL/min，限压：0.4MPa，A为gelfiltrationbuffer，全程%B=00 mL: inject30mL:load100mL：load，setfractionsize=8mL/tube（此处的breakpoint体积以各自的蛋白大小而定）400mL:load,setfraction size=0End5.蛋白纯化结束后，要清洗AKTA泵内部溶液，方便下位同学使用，将A泵用蒸馏水冲洗干净插入到蒸馅水中，并在Template中选择systemwash，洗泵。6.蛋白质纯化图谱的保存与提取：同上文镍柱部分。关键步骤：分子筛应当在使用前处理干净并且用对应的buffer平衡至少1.5个柱床体积。口柱子连接纯化仪时，应该尽量敢走柱子进样管中的气泡（可以通过反向连接柱子，赶走进样管的气泡）。接Superloop时先将上端连接injectvalve2号孔后，在manualrun中设pathway为inject，待superloop下端绿色连接管中气泡被赶出后，再接入injectvalve6号孔。Superloop中的样品如果只有AmL，在设定程序时需要有所保留设定为A-1mL，以免气泡进到柱子里。粒位划CMEE上样#T出口牌电导检测器LOFes批食池系抗系压力检测油典型配置AKTAPure纯化系统AKTATMpure是一台灵活直观的层析系统，可用于快速纯化从微克到克水平的蛋白、肽和核酸等目标产物。同时AKTATMpure也是一台可靠的系统，它的硬件以及Unicorn软件与各种层析柱和填料仪器可满足
器，需要用20%酒精再次清洗系统泵。并将收集器上的玻璃管收拾干净，并用水清洗，放于管架晾干。 5. 蛋白质纯化图谱的保存与提取（1）保存：在电脑桌面打开prime view evaluation软件，打来文件夹， 在里面按照时间顺序找到你蛋白质纯化图谱，然后点击file，选择save as将你的图保存在你的文件夹。 （2）提取：点击file,选择export → curves → 选择01：UV和06：Conc → 并在Reduce number of samples中选择Reduce by 1。点击保存，得到excel 表格，并用Graphpad prism5做蛋白纯化图谱（有视 频教学）。 ▲ 关键步骤： ♫ 提前看好转盘与滴液体的部分是否靠紧，否则不会自动收集样品。 ♫ 根据出峰位置选择样品，一般会有30 mL左右，加入终浓度1 mM EDTA和2 mM DTT以及0.5 mM PMSF，取60 μL制备SDS-PAGE样品。 利用AKTA Prime Plus 过分子筛 1.打开AKTA，将A泵用gel filtration buffer清洗（同上文镍柱清洗）。并用gel filtration buffer手动或者程序 设定清洗上样环。 2. system wash完毕后，先选择manual run，%B=0，pressure limitation=0.4 MPa，流速=2 mL/min(根据 不同分子筛设定流速）。先将AKTA上1号接线口湿接上部分子筛，此时观察柱子管道是否有气泡，如果有 气泡那么应该将1号接口线湿接到分子筛尾部接口，待分子筛头部管道空气排清后再正过来接柱子，最后 将柱子尾部接口接到探测器上。观察电脑屏幕待UV线、电导线平齐时End program。 3. Super loop接上，6号出口线接super loop上面，下面出来接上2号口。 4. 设定程序（以30 mL样品和320 mL分子筛为例）： 程序 流速：2 mL/min，限压：0.4 MPa，A为gel filtration buffer，全程%B=0 0 mL：inject 30 mL：load 100 mL：load，set fraction size=8 mL/tube（此处的break point体积以各自的蛋白 大小而定） 400 mL：load，set fraction size=0 End 5. 蛋白纯化结束后，要清洗AKTA泵内部溶液，方便下位同学使用，将A泵用蒸馏水冲洗干净插入到蒸馏 水中，并在Template中选择system wash，洗泵。 6. 蛋白质纯化图谱的保存与提取：同上文镍柱部分。 ▲关键步骤： ♫ 分子筛应当在使用前处理干净并且用对应的buffer平衡至少1.5个柱床体积。 ♫ 柱子连接纯化仪时，应该尽量敢走柱子进样管中的气泡（可以通过反向连接柱子，赶走进样管的气 泡）。 ♫ 接Super loop时先将上端连接inject valve 2号孔后，在manual run中设pathway 为inject，待super loop 下端绿色连接管中气泡被赶出后，再接入inject valve 6号孔。 ♫ Super loop中的样品如果只有A mL，在设定程序时需要有所保留设定为A-1 mL，以免气泡进到柱子 里。 AKTA Pure 纯化系统 ÄKTA™ pure 是一台灵活直观的层析系统，可用于快速纯化从微克到克水平的蛋白、肽和核酸等目标 产物。同时ÄKTA™pure也是一台可靠的系统，它的硬件以及Unicorn软件与各种层析柱和填料仪器可满足
任何纯化挑战。系统支持各种层析技术，并满足需要提供最高纯度的自动化要求。系统配置灵活，并可以根据您的需要随时升级，进一步提高其性能。方法编程（Methodprogramming）-主菜单功能介绍Evaluation classic用于保存程序和提取数据System control运行用户编辑程序Administration管理设置参数。（很少使用）MethodEditor用于用户编辑运行方法MethodEditor1.在file中打开new,会出现Methodsetting，Equilibration,SampleApplication,Elution。在Methodsetting中主要设置一些基本参数，如柱子类型，体积，流速，压力，MethodBassUnit等。2.Equilibration这一选项主要是用Buffer平衡柱子，在thetotalvolumeis可以选择平衡柱子的体积。把里面一些杂蛋白洗掉。3.SampleApplication可以选择Superloop体积大小（我们实验室有50和150mL的Superloop）和Samplevolume上样体积，并且可以改变InletB的百分比。4.Elution中的Gradientelution在Type中选择linear，并选择target%B和length（mL）。程序设定结束后，点击保存。可以保存在SystemControl。Systemcontrol1.在SystemControl中选择Manual用于清洗纯化仪内部管道及泵，具体操作分别点击PumbAwash和PumbBwash，选择On，再点击Execute。2.在SystemControl中选择你保存的程序，点击Start.程序就可以运行了，但是在运行前要先清洗泵。程序运行完毕后，点击保存，程序会保存在Evaluationclassic。Evaluationclassic1．在EvaluationClassic中找你运行后的纯化图谱，保存和提取。2.在EvaluationClassic中提取纯化图谱，点击File--Curves--CondandUV，并选择Select，Export。AKTAexplorer纯化系统
主菜单 功能介绍 Evaluation classic 用于保存程序和提取数据 System control 运行用户编辑程序 Administration 管理设置参数。（很少使用） Method Editor 用于用户编辑运行方法 任何纯化挑战。系统支持各种层析技术，并满足需要提供最高纯度的自动化要求。系统配置灵活，并可以 根据您的需要随时升级，进一步提高其性能。 ► 方法编程（Method programming) Method Editor 1. 在file中打开new,会出现Method setting, Equilibration, Sample Application, Elution。在Method setting 中主要设置一些基本参数，如柱子类型，体积，流速，压力，Method Bass Unit等。 2. Equilibration这一选项主要是用Buffer平衡柱子，在the total volume is_可以选择平衡柱子的体积。把 里面一些杂蛋白洗掉。 3. Sample Application可以选择Super loop体积大小（我们实验室有50和150 mL的Superloop)和Sample volume上样体积,并且可以改变InIet B的百分比。 4. Elution中的Gradient elution在Type中选择linear,并选择target %B和length（mL）。程序设定结束后， 点击保存。可以保存在System Control。 System control 1. 在System Control中选择Manual用于清洗纯化仪内部管道及泵，具体操作分别点击Pumb A wash和 Pumb B wash，选择On，再点击Execute。 2. 在System Control中选择你保存的程序，点击Start.程序就可以运行了，但是在运行前要先清洗泵。程 序运行完毕后，点击保存，程序会保存在Evaluation classic。 Evaluation classic 1. 在Evaluation Classic中找你运行后的纯化图谱，保存和提取。 2. 在Evaluation Classic中提取纯化图谱，点击File-Curves-Cond and UV，并选择Select，Export。 AKTA explorer纯化系统
AKTAexplorer于2010年12月31日停产，并由AKTAavant取代。AKTAexplorer已广泛应用于行业中，用于快速，稳健的方法和工艺开发。其多功能性和可靠的操作使其成为参与开发纯化过程的实验室的最佳选择。方法编程（Methodprogramming）主菜单功能介绍Evaluation classic用于保存程序和提取数据运行用户编辑程序System control管理设置参数。（很少使用）Administration用于用户编辑运行方法Method EditorMethodEditor1.一般拷贝已有的程序，然后根据自已的需要进行更改。打开文件夹，选择需要拷贝的程序，右键copy，然后选择自己的文件夹，点击OK，拷贝成功。2.编辑完程序之后，点击下图箭头所指示标志，选择Gradient检测线性图是否是自已所需程序。ISystemcontrol1.在SystemControl中选择Manual用于清洗纯化仪内部管道及泵，具体操作分别点击PumbBwash和PumbAwash，选择On，再点击Execute。2.在SystemControl中选择你保存的程序，并选择保存路径，点击Start，程序就可以运行了，但是在运行前要先清洗泵。程序运行完毕后，程序会保存在Evaluationclassic。Evaluationclassic1.在EvaluationClassic中找你运行后的纯化图谱，保存和提取。数据在拷贝后，会出现部分数据丢失的现象，若用于文章作图，建议选择其他纯化仪。2.在EvaluationClassic中提取纯化图谱，点击File—ExportCurve，选择UV1_280andConc，Reducebyfactor调到1，Select到Curvestoexport，Export.文件类型选择.xls
主菜单 功能介绍 Evaluation classic 用于保存程序和提取数据 System control 运行用户编辑程序 Administration 管理设置参数。（很少使用） Method Editor 用于用户编辑运行方法 ÄKTA explorer于2010年12月31日停产，并由ÄKTA avant取代。ÄKTA explorer已广泛应用于行业中，用 于快速，稳健的方法和工艺开发。其多功能性和可靠的操作使其成为参与开发纯化过程的实验室的最佳选 择。 ► 方法编程（Method programming) Method Editor 1. 一般拷贝已有的程序，然后根据自己的需要进行更改。打开文件夹，选择需要拷贝的程序，右键 copy，然后选择自己的文件夹，点击OK，拷贝成功。 2. 编辑完程序之后，点击下图箭头所指示标志，选择Gradient检测线性图是否是自己所需程序。 System control 1. 在System Control中选择Manual用于清洗纯化仪内部管道及泵，具体操作分别点击Pumb B wash和 Pumb A wash，选择On，再点击Execute。 2. 在System Control中选择你保存的程序，并选择保存路径，点击Start，程序就可以运行了，但是在运 行前要先清洗泵。程序运行完毕后，程序会保存在Evaluation classic。 Evaluation classic 1. 在Evaluation Classic中找你运行后的纯化图谱，保存和提取。数据在拷贝后，会出现部分数据丢失的 现象，若用于文章作图，建议选择其他纯化仪。 2. 在Evaluation Classic中提取纯化图谱，点击File—Export—Curve，选择UV1_280 and Conc, Reduce by factor调到1，Select到Curves to export, Export.文件类型选择.xls
维护注意事项（Maintenance）1.除了连续使用外，当实验完成系统使用结束后，应尽可能避免保存在装载缓冲液状态过夜，尤其高盐浓度洗脱缓！如不能避免，则紧记次日尽早用蒸馏水将系统彻底清洗，再予以保存或再更新使用其它缓冲液，再次投入使用进行实验操作。缓冲液不仅会对系统造成腐蚀，而且高盐浓度缓冲液保存过久造成盐结晶，堵塞管道，损害系统。2.若数天或更长的时间不使用系统，除用蒸馏水彻底清洗系统外，取下柱子，换成管道。然后用20%乙醇再冲洗所有使用的管件通道和所有的流动池一遍，并以此将系统保存。3.每月定期保养处理，或当发现假峰等问题出现时，可拆下柱子，并用适宜的管道替换其位置，将所有的缓冲液入口管件置于1MNaOH中，对所有的入口管件通路运行SystemWashMethod，以流速为1mL/min，将整个系统充分冲洗20分钟。然后立即用蒸馏水，将整个系统运行SystemWashMethod加以冲洗20分钟。4.一定要保持实验环境的清洁，当使用仪器时发现缓冲液的泄露或看见机器各部件外表有盐的结晶应即刻用清水浸湿的抹布擦拭去除，以免泄漏的液体等造成仪器光学及电子元件的损坏。5.当装配部分收集器出口管架时，应根据收集管的长度不同而使用不同的切换口。调整时可将出口管和管夹放在输送臂上的长度导向小孔上，将管夹抵在孔外臂上，将出口管轻推向下到达导向孔的底部，然后上紧管夹螺母。此可确保出口管露出正确的长度，以免造成跳管或收集体积错误情况发生。6.微量上样环上样完毕，样品进柱后，应及时注入清水清洗上样环以免蛋白质或高盐堵塞微量上样口及上样环。7.长期不使用或者其他原因，FPLC的泵及管路可能有空气，表现为流速不准或没有液体，压力偏低。这时应该把流速调低，接管子用注射器把空气抽出来，prime和FPLC接法不同，可以查看说明书。如果B泵进气，换成B泵，再抽空气。针对性建议（TROUBLESHOOTING）1.AKTA每个程序跑完一定要尽快把结果另存了，不然会很快被后面的一大堆数据淹没。每个人建自已文件夹。每个蛋白另建文件夹。2.事先做准备工作，比如准备柱子，预约机器，不然无法及时下班。3.万一电脑显示器上不更新图谱了，可能是与电脑的连接断了，需要关了纯化仪，重启。4．样品收集器偶尔会出现跳管子的情况，收集样品要注意从头或从尾对一下管子。5.及时清理废液（尤其过夜纯化蛋白时，要检查废液是否装满）。6.不要用蛮力摆动输送臂。松开固定输送臂按纽，并将臂升高。（如图示）
► 维护注意事项（Maintenance ) 1. 除了连续使用外，当实验完成系统使用结束后，应尽可能避免保存在装载缓冲液状态过夜，尤其高盐浓 度洗脱缓！如不能避免，则紧记次日尽早用蒸馏水将系统彻底清洗，再予以保存或再更新使用其它缓冲 液，再次投入使用进行实验操作。缓冲液不仅会对系统造成腐蚀，而且高盐浓度缓冲液保存过久造成盐结 晶，堵塞管道，损害系统。 2. 若数天或更长的时间不使用系统，除用蒸馏水彻底清洗系统外，取下柱子，换成管道。然后用20%乙醇 再冲洗所有使用的管件通道和所有的流动池一遍，并以此将系统保存。 3. 每月定期保养处理，或当发现假峰等问题出现时，可拆下柱子，并用适宜的管道替换其位置，将所有 的缓冲液入口管件置于1 M NaOH中，对所有的入口管件通路运行System Wash Method，以流速为1 mL/min，将整个系统充分冲洗20分钟。然后立即用蒸馏水，将整个系统运行System Wash Method加以冲 洗20分钟。 4. 一定要保持实验环境的清洁，当使用仪器时发现缓冲液的泄露或看见机器各部件外表有盐的结晶应即刻 用清水浸湿的抹布擦拭去除，以免泄漏的液体等造成仪器光学及电子元件的损坏。 5. 当装配部分收集器出口管架时，应根据收集管的长度不同而使用不同的切换口。调整时可将出口管和管 夹放在输送臂上的长度导向小孔上，将管夹抵在孔外臂上，将出口管轻推向下到达导向孔的底部，然后上 紧管夹螺母。此可确保出口管露出正确的长度，以免造成跳管或收集体积错误情况发生。 6. 微量上样环上样完毕，样品进柱后，应及时注入清水清洗上样环以免蛋白质或高盐堵塞微量上样口及上 样环。 7.长期不使用或者其他原因，FPLC 的泵及管路可能有空气，表现为流速不准或没有液体，压力偏低。这 时应该把流速调低，接管子用注射器把空气抽出来，prime和FPLC接法不同，可以查看说明书。如果B泵 进气，换成B泵，再抽空气。 针对性建议（TROUBLESHOOTING） 1. AKTA每个程序跑完一定要尽快把结果另存了，不然会很快被后面的一大堆数据淹没。每个人建自己文 件夹。每个蛋白另建文件夹。 2. 事先做准备工作，比如准备柱子，预约机器，不然无法及时下班。 3. 万一电脑显示器上不更新图谱了，可能是与电脑的连接断了，需要关了纯化仪，重启。 4. 样品收集器偶尔会出现跳管子的情况，收集样品要注意从头或从尾对一下管子。 5. 及时清理废液（尤其过夜纯化蛋白时，要检查废液是否装满）。 6. 不要用蛮力摆动输送臂。松开固定输送臂按纽，并将臂升高。（如图示）
使用规则1.预约：使用纯化仪之前应在对应的纯化仪预约本上预约后在使用：如果临时不适用应在预约本上划去并告知有需要的同学。2.上样孔的维护：无论是用Superloop还是微量上样环，使用完毕后，应立即用纯水清洗整个通路，以去除残留在上样环与上样孔中的样品及buffer，以免长期堆积导致结晶堵塞。3.连接管的维护：为了防止连接管堵塞（特别是上样环），每次纯化完毕卸下柱子后，应当将所有用过的连接管用纯水冲洗后，再放起来备用。4．收集管清理：每次用完仪器后，应及时回收收集管，清理收集盘，以免影响下一位同学使用。5.仪器清理：纯化过程中，如果遇到管道漏液，应及时旋紧接头，用抹布擦去液体，并用湿毛再擦一遍，避免仪器零部件腐蚀。6.接头的使用：为避免滑丝与折断，连接管上的接头不应旋得过紧。7.连接管的存放：如果连接管太长，应将连接管盘成圆形存放，以免连接管被卡而造成折损8.仪器使用完毕应马上用清水冲洗整个系统泵，防止盐在管路中结晶。9.UV灯的维护：仪器使用完毕且系统泵清洗过后，如果后面没有同学使用应将电脑与纯化仪关机1.2.2蛋白纯化柱子的介绍及清洁方法简介（INTRODUCTION）TJ-Lab有各型蛋白液相色谱柱，主要是GE公司的。下面做一个简要介绍其使用和维护方法。1：金属螯合亲和色谱，又称固定金属离子亲和色谱，其原理是利用蛋白质表面的一些氨基酸，如组氨酸能与多种过渡金属离子Cu2+，Zn2+，Ni2+，Co2+，Fe3+发生特殊的相互作用，利用这个原理可以把富含组氨酸的蛋白质吸附，从面达到分离的自的。2.分子筛（size-exclusionchromatography）是指具有均匀的微孔，其孔径与一般分子大小相当的一类物质。常见分子筛为结晶态的硅酸盐或硅铝酸盐，是由硅氧四面体或铝氧四面体通过氧桥键相连而形成分子尺寸大小（通常为0.3~2nm）的孔道和空腔体系，因吸附分子大小和形状不同而具有筛分大小不同的流体分子的能力。3.离子交换层析（ionexchangechromatography）根据蛋白质表面的电荷的不同分离蛋白，带电荷的蛋白和层析填料上相反电荷之间的可逆相互作用进行分离。然后改变条件，结合的组分分别被洗脱下来。4.疏水作用层析（HydrophobicInteractionChromatography，HIC）是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。蛋白质和多肽等生物大分子的表面常常暴露着一些疏水性基团，我们把这些疏水性基团称为疏水补丁，疏水补丁可以与疏水性层析介质发生疏水性相互作用而结合。5.ProteinA是一种发现于金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）的细胞壁表面蛋白，分子量为42kDa；ProteinG是C型或G型链球菌（Streptococcalbacteria）表达的免疫球蛋白结合蛋白。ProteinA和ProteinG功能相似，能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）结合，结合的部位通常为免疫球蛋白的Fc区，但有资料显示ProteinA也会和人VH3家族的Fab区结合，而ProteinG有时与Fab区也有一定结合。同时，两者对于不同的免疫球蛋白亚类的结合能力有所不同。适当重组改造的ProteinA、G与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可用于免疫沉淀或抗体的纯化。6.GST柱是一种旨在利用谷胱甘肽亲和凝胶的高度选择性结合，通过一步法直接从细胞裂解液中对重组谷胱甘肽-S-转移酶标记蛋白进行纯化的试剂。GST融合蛋白是在温和，非变性的条件下洗脱得到的，可以保证蛋白的抗原性和活性。几种实验室常用的蛋白纯化柱TypeVolumeHisTrapTM FF1 mLHisTrapTM HP5 mLHisPrepTM FF20 mLSuperdexTM 200 10/300 GL24 mLSuperdex TM 75 10/300 GL24 mLSuperdex TM200 26/600 GL320mLTricorn SourceQ15(离子柱)2mL/15mLPhenyl（疏水柱）5 mLProtein A/G5 mL/1 mL
► 使用规则 1. 预约：使用纯化仪之前应在对应的纯化仪预约本上预约后在使用；如果临时不适用应在预约本上划去 并告知有需要的同学。 2. 上样孔的维护：无论是用Super loop还是微量上样环，使用完毕后，应立即用纯水清洗整个通路，以去 除残留在上样环与上样孔中的样品及buffer，以免长期堆积导致结晶堵塞。 3. 连接管的维护：为了防止连接管堵塞（特别是上样环），每次纯化完毕卸下柱子后，应当将所有用过 的连接管用纯水冲洗后，再放起来备用。 4. 收集管清理：每次用完仪器后，应及时回收收集管，清理收集盘，以免影响下一位同学使用。 5. 仪器清理：纯化过程中，如果遇到管道漏液，应及时旋紧接头，用抹布擦去液体，并用湿毛巾再擦一 遍，避免仪器零部件腐蚀。 6. 接头的使用：为避免滑丝与折断，连接管上的接头不应旋得过紧。 7. 连接管的存放：如果连接管太长，应将连接管盘成圆形存放，以免连接管被卡而造成折损 8. 仪器使用完毕应马上用清水冲洗整个系统泵，防止盐在管路中结晶。 9. UV灯的维护：仪器使用完毕且系统泵清洗过后，如果后面没有同学使用应将电脑与纯化仪关机 1.2.2 蛋白纯化柱子的介绍及清洁方法 简介（INTRODUCTION） TJ-Lab 有各型蛋白液相色谱柱，主要是GE公司的。下面做一个简要介绍其使用和维护方法。 1. 金属螯合亲和色谱，又称固定金属离子亲和色谱，其原理是利用蛋白质表面的一些氨基酸，如组氨酸 能与多种过渡金属离子Cu2+，Zn2+，Ni2+，Co2+，Fe3+发生特殊的相互作用，利用这个原理可以把富 含组氨酸的蛋白质吸附，从而达到分离的目的。 2. 分子筛（size-exclusion chromatography）是指具有均匀的微孔，其孔径与一般分子大小相当的一类物 质。常见分子筛为结晶态的硅酸盐或硅铝酸盐，是由硅氧四面体或铝氧四面体通过氧桥键相连而形成分子 尺寸大小（通常为0.3~2 nm）的孔道和空腔体系，因吸附分子大小和形状不同而具有筛分大小不同的流 体分子的能力。 3. 离子交换层析（ion exchange chromatography）根据蛋白质表面的电荷的不同分离蛋白，带电荷的蛋 白和层析填料上相反电荷之间的可逆相互作用进行分离。然后改变条件，结合的组分分别被洗脱下来。 4. 疏水作用层析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根据分子表面疏水性差别来分离 蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。蛋白质和多肽等生物大分子的表面常常暴露着一些疏 水性基团，我们把这些疏水性基团称为疏水补丁，疏水补丁可以与疏水性层析介质发生疏水性相互作用而 结合。 5. Protein A是一种发现于金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的细胞壁表面蛋白，分子量为42 kDa；Protein G是C型或G型链球菌（Streptococcal bacteria）表达的免疫球蛋白结合蛋白。Protein A和 Protein G功能相似，能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）结合，结合的部位通常为 免疫球蛋白的Fc区，但有资料显示Protein A也会和人VH3家族的Fab区结合，而Protein G有时与Fab区也 有一定结合。同时，两者对于不同的免疫球蛋白亚类的结合能力有所不同。适当重组改造的Protein A、G 与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可用于免疫沉淀或抗体的纯化。 6. GST柱是一种旨在利用谷胱甘肽亲和凝胶的高度选择性结合，通过一步法直接从细胞裂解液中对重组 谷胱甘肽-S-转移酶标记蛋白进行纯化的试剂。GST融合蛋白是在温和，非变性的条件下洗脱得到的，可 以保证蛋白的抗原性和活性。 几种实验室常用的蛋白纯化柱 Type Volume HisTrapTM FF 1 mL HisTrapTM HP 5 mL HisPrepTM FF 20 mL SuperdexTM 200 10/300 GL 24 mL SuperdexTM 75 10/300 GL 24 mL Superdex TM200 26/600 GL 320 mL Tricorn Source Q15（离子柱） 2 mL/15 mL Phenyl（疏水柱） Protein A/G 5 mL 5 mL/1 mL