实验九：食品中维生素C的含量测定
实验九： 食品中维生素C的含量测定
一、 目的要求 理解2,4-二硝基苯肼比色法测定抗坏血酸总 量的基本原理。学习其操作方法和了解影响 测定准确性的因素。 二、实验原理 总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐 糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化 为脱氢抗坏血酸，再与2,4-二硝基苯肼作用 生成红色脎，其呈色强度与总抗坏血酸含量 呈正比，可进行比色定量
◼ 一、目的要求 ◼ 理解2,4–二硝基苯肼比色法测定抗坏血酸总 量的基本原理。学习其操作方法和了解影响 测定准确性的因素。 ◼ 二、实验原理 ◼ 总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐 糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化 为脱氢抗坏血酸，再与2,4–二硝基苯肼作用 生成红色脎，其呈色强度与总抗坏血酸含量 呈正比，可进行比色定量
三、仪器与试剂 ◆ (一)试剂 ◆ 1、,4.5moL硫酸：量取250mL浓硫酸小心加入700mL水中，冷却后用水稀释至 1000mL. 2、85%硫酸：小心加900mL浓疏酸于100mL水中。 示脊行泳精费米攀沃覆辑态须體米册29于100mL4,5moL破酸中，过滤， ■4、2%草酸溶液。 ■5、1%草酸溶液。 ■6、1%硫脲溶液：溶解1g硫脲于100mL1%草酸溶液中。 ■7、2%硫脲溶液：溶解2g硫脲于100L1%草酸溶液中 。8、1mo/L盐酸：取100mL盐酸，加入水中，并稀释至1200mL。 9、抗坏血酸标准溶液：.称取100g纯抗坏血酸溶解于100mL2%草酸溶液中，此 溶液每毫升相当于1g抗坏血酸。 ◆ 10、活性炭：将100g活性炭加到750mL1moL盐酸中，回流1hr2h,过滤，用水 洗数次，至滤液中无铁离子(F3+)为止，然后置于110℃烘箱中烘干
三、仪器与试剂 ◼ （一）试剂 ◼ 1、4.5mol/L硫酸：量取250mL浓硫酸小心加入700mL水中，冷却后用水稀释至 1000mL。 ◼ 2、85%硫酸：小心加900mL浓硫酸于100mL水中。 ◼ 3、2% 2,4–二硝基苯肼：溶解2,4–二硝基苯肼2g于100mL 4.5mol/L硫酸中，过滤。 不用时存于冰箱内，每次使用前必须过滤。 ◼ 4、2%草酸溶液。 ◼ 5、1%草酸溶液。 ◼ 6、1%硫脲溶液：溶解1g硫脲于100mL1%草酸溶液中。 ◼ 7、2%硫脲溶液：溶解2g硫脲于100mL1%草酸溶液中。 ◼ 8、1mol/L盐酸：取100mL盐酸，加入水中，并稀释至1200mL。 ◼ 9、抗坏血酸标准溶液：称取100mg纯抗坏血酸溶解于100mL 2%草酸溶液中，此 溶液每毫升相当于1mg抗坏血酸。 ◼ 10、活性炭：将100g活性炭加到750mL 1mol/L盐酸中，回流1h~2h，过滤，用水 洗数次，至滤液中无铁离子（Fe3+）为止，然后置于110℃烘箱中烘干
■（二）仪器 ■1、恒温箱或电热恒温水浴锅。 ■2、可见光分光光度计。 ■3、捣碎机
◼ （二）仪器 ◼ 1、恒温箱或电热恒温水浴锅。 ◼ 2、可见光分光光度计。 ◼ 3、捣碎机
四、实验步骤 1、样品处理（全部实验过程应避光） (1)鲜样的制备：称取100g鲜样即加入100L2%草酸溶液， 倒入捣碎机中打成匀浆，称取10.0g~40.0g匀浆（含1mg2mg抗 坏血酸)倒入100mL容量瓶，用1%草酸溶液稀释至刻度，混匀。 过滤，滤液备用。 ◆ (2)干样制备：称取1g~4g干样（含1mg2mg抗坏血酸）放 入乳钵内，加入等量的1%草酸溶液磨成匀浆，连固形物一起倒 入100mL容量瓶内，用1%草酸溶液稀释至刻度，混匀。过滤备 用。 2、样品还原型抗坏血酸的氧化处理 量取25.0mL上述滤液，加入2g活性炭，振摇1min,过滤，弃去 最初数毫升滤液。吸取10.0mL此氧化提取液，加入10.0mL2% 硫脲溶液，混匀，此试样为稀释液
四、实验步骤 1、样品处理（全部实验过程应避光）。 ◼ （1）鲜样的制备：称取100g鲜样即加入100mL 2%草酸溶液， 倒入捣碎机中打成匀浆，称取10.0g~40.0g匀浆（含1mg~2mg抗 坏血酸）倒入100mL容量瓶，用1%草酸溶液稀释至刻度，混匀。 过滤，滤液备用。 ◼ （2）干样制备：称取1g ~ 4g干样（含1mg~2mg抗坏血酸）放 入乳钵内，加入等量的1%草酸溶液磨成匀浆，连固形物一起倒 入100mL容量瓶内，用1%草酸溶液稀释至刻度，混匀。过滤备 用。 2、样品还原型抗坏血酸的氧化处理 ◼ 量取25.0mL上述滤液，加入2g活性炭，振摇1min，过滤，弃去 最初数毫升滤液。吸取10.0mL此氧化提取液，加入10.0mL 2% 硫脲溶液，混匀，此试样为稀释液