实验三食品中蛋白质含量测定 (凯氏定氮法)》 标准依据： 5009.5-2003食品中蛋白质含量测定
实验三 食品中蛋白质含量测定 （凯氏定氮法） 标准依据： 5009．5-2003食品中蛋白质含量测定
一、目的与要求 ■1、学习凯氏定氮法测定蛋白质的原理。 2、掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的 消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等。 二、实验原理 蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化 剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与 硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加 碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标 准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘以蛋白质换 算系数，即得蛋白质含量。 因为食品中除蛋白质外，还含有其它含氮物质， 所以此蛋白质称为粗蛋白
◼ 一、目的与要求 ◼ 1、学习凯氏定氮法测定蛋白质的原理。 ◼ 2、掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的 消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等。 ◼ 二、实验原理 ◼ 蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化 剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与 硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加 碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标 准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘以蛋白质换 算系数，即得蛋白质含量。 ◼ 因为食品中除蛋白质外，还含有其它含氮物质， 所以此蛋白质称为粗蛋白
三、仪器与试剂 (一)试剂 ■1、硫酸铜(CuSO4:5H20) ■2、硫酸钾 "3、硫酸（密度为1.8419g/) 每 4、硼酸溶液(20g/L) ■5、氢氧化钠溶液(400g/L) m6、0.01mol/盐酸标准滴定溶液。 ■7、混合指示试剂：0.1%甲基红乙溶液液1份，与 0.1%溴甲酚绿乙醇溶液5份临用时混合。 ■8、黄豆粉
三、仪器与试剂 ◼ （一）试剂 ◼ 1、硫酸铜（CuSO4·5H20） ◼ 2、硫酸钾 ◼ 3、硫酸（密度为1.8419g/L） ◼ 4、硼酸溶液（20g/L） ◼ 5、氢氧化钠溶液（400g/L） ◼ 6、0.01mol/L盐酸标准滴定溶液。 ◼ 7、混合指示试剂：0.1%甲基红乙溶液液1份，与 0.1%溴甲酚绿乙醇溶液5份临用时混合。 ◼ 8、黄豆粉
(二)仪器 微量定氮蒸馏装置： ■1、电炉；2、水蒸气发生器(2L平底烧瓶)；3、螺 旋夹a;4、小漏斗及棒状玻璃塞（样品入口处）；5、 反应室；6、反应室外层；7、橡皮管及螺旋夹b;8、 冷凝管；9、蒸馏液接收瓶
（二）仪器 ◼ 微量定氮蒸馏装置： ◼ ◼ 1、电炉； 2、水蒸气发生器（2L平底烧瓶）；3、螺 旋夹a；4、小漏斗及棒状玻璃塞（样品入口处）；5、 反应室；6、反应室外层；7、橡皮管及螺旋夹b；8、 冷凝管；9、蒸馏液接收瓶
四、实验步骤 1、样品消化 称取黄豆粉约0.3g(±0.001g)3移入干燥的100mL 凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜和6g硫酸钾，稍摇匀后瓶 口放一小漏斗，加入20mL浓硫酸，将瓶以450角斜支于 有小孔的石棉网上，使用万用电炉，在通风橱中加热消 化，开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止 后，再开高温度保持微沸，消化至液体皇蓝绿色澄清透 明后，继续加热0.5h,取下放冷，.小心加20mL水，放冷 后，无损地转移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度， 混匀备用，即为消化液。 试剂空白实验：取与样品消化相同的硫酸铜、硫酸 钾、浓硫酸，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定 容至100mL,得试剂空百消化液
四、实验步骤 ◼ 1、样品消化 ◼ 称取黄豆粉约0.3g（±0.001g），移入干燥的100mL 凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜和6g硫酸钾，稍摇匀后瓶 口放一小漏斗，加入20mL浓硫酸，将瓶以450角斜支于 有小孔的石棉网上，使用万用电炉，在通风橱中加热消 化，开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止 后，再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透 明后，继续加热0.5h，取下放冷，小心加20mL水，放冷 后，无损地转移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度， 混匀备用，即为消化液。 ◼ ◼ 试剂空白实验：取与样品消化相同的硫酸铜、硫酸 钾、浓硫酸，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定 容至100mL，得试剂空白消化液