实验十五、水产品中孔雀石 绿和结晶紫残留量的测定 标准依据： GB/T19857一2005水产品中孔雀石绿和结晶 紫残留量的测定
实验十五、水产品中孔雀石 绿和结晶紫残留量的测定 标准依据: GB/T 19857—2005 水产品中孔雀石绿和结晶 紫残留量的测定
实验目的 ■} 学习水产品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石 绿(Leucomalachite green)、结晶紫及其代 谢物隐色结晶紫(Leucocrystal violet)残留量的 高效液相色谱的测定方法
一、实验目的 ◼ 学习水产品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石 绿（Leucomalachite green）、结晶紫及其代 谢物隐色结晶紫(Leucocrystal violet)残留量的 高效液相色谱的测定方法。 ◼
二、实验原理 m 试样中的残留物用乙腈-乙酸盐缓冲混合液提 取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲烷层 并浓缩，经酸性氧化铝柱净化后，高效液相色 谱-PbO2柱后衍生测定，外标法定量
二、实验原理 ◼ 试样中的残留物用乙腈-乙酸盐缓冲混合液提 取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲烷层 并浓缩，经酸性氧化铝柱净化后，高效液相色 谱-PbO2柱后衍生测定，外标法定量
三、实验试剂与仪器 (一)试剂 (除另有规定外，试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。) 1、乙腈：液相色谱纯。 2、二氯甲烷。 3、甲醇：液相色谱纯。 ◆ 4、乙酸盐缓冲液。 5、20%盐酸羟胺溶液。 6、1.0moL对-甲苯磺酸 ◆ 7、二甘醇。 8、酸性氧化铝：80-120目。 9、二氧化铅。 10、硅藻土545：色谱层析级。 11、标准品：孔雀石绿(MG)、隐色孔雀石绿(LMG)、结晶紫(CV)、隐色结 晶紫(LCV),纯度大于98%。 12、标准溶液：准确称取适量的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫， 用乙腈分别配制成100ug/mL的标准贮备液，再用乙腈稀释配制1μg/mL的标准溶液。 -18℃避光保存。 13、混合标准工作溶液：用乙腈稀释标准溶液(3.2.13)，配制成每毫升含孔雀石绿、 隐色孔雀石绿、结晶紫、 隐色结晶紫均为20ng的混合标准溶液。-18C避光保存
三、实验试剂与仪器 ◼ （一）试剂 ◼ (除另有规定外，试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。) ◼ 1、乙腈：液相色谱纯。 ◼ 2、二氯甲烷。 ◼ 3、甲醇：液相色谱纯。 ◼ 4、乙酸盐缓冲液。 ◼ 5、20%盐酸羟胺溶液。 ◼ 6、1.0 mol/L对-甲苯磺酸。 ◼ 7、二甘醇。 ◼ 8、酸性氧化铝：80-120目。 ◼ 9、二氧化铅。 ◼ 10、硅藻土545：色谱层析级。 ◼ 11、标准品：孔雀石绿（MG）、隐色孔雀石绿（LMG）、结晶紫（CV）、隐色结 晶紫（LCV），纯度大于98%。 ◼ 12、标准溶液：准确称取适量的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫， 用乙腈分别配制成100µg/mL的标准贮备液，再用乙腈稀释配制1µg/mL的标准溶液。 -18℃避光保存。 ◼ 13、混合标准工作溶液：用乙腈稀释标准溶液（3.2.13），配制成每毫升含孔雀石绿、 隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫均为20ng的混合标准溶液。-18℃避光保存
(二)仪器和设备 1、高效液相色谱仪：配有紫外-可见光检测器。 2、匀浆机。 ■3、离心机：4000r/min。 ■4、固相萃取装置。 ■5、25%PbO2氧化柱：不锈钢预柱管(5cm×4mmi.d, 两端附2um过滤板，抽真空下，填装含有25%PbO2的 硅藻土，添加数滴甲醇压实，旋紧。临用前用甲醇冲 洗。并将PbO2氧化柱连接在紫外-可见光检测器与液相 色谱柱之间。 6、酸性氧化铝柱：1g/3mL,使用前用5mL乙腈活化
（二）仪器和设备 ◼ 1、高效液相色谱仪：配有紫外-可见光检测器。 ◼ 2、匀浆机。 ◼ 3、离心机：4 000 r/min。 ◼ 4、固相萃取装置。 ◼ 5、25% PbO2氧化柱：不锈钢预柱管(5cm4mm i.d)， 两端附2m过滤板，抽真空下，填装含有25% PbO2的 硅藻土，添加数滴甲醇压实，旋紧。临用前用甲醇冲 洗。并将PbO2氧化柱连接在紫外-可见光检测器与液相 色谱柱之间。 ◼ 6、酸性氧化铝柱：1g/3mL，使用前用5 mL乙腈活化