实验二十、食品中黄曲霉毒素B1的检测 标准依据： GB/T5009.22-2003食品中黄曲霉毒素B1的测 定
实验二十、食品中黄曲霉毒素B1的检测 标准依据: GB/T5009.22-2003食品中黄曲霉毒素B1的测 定
、 实验目的与要求： 1、学习酶联免疫(ELISA)方法测定粮食及食品中黄曲 霉毒素B1的实验原理，掌握实验的操作要点及测定方 法 2、了解酶联免疫(ELISA)的工作原理，正确熟练使用 酶标仪。 二、实验原理： ■本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，样品中的黄曲霉 毒素B经提取、脱脂、浓缩后与定量特异性抗体反应， 多余的游离抗体则与酶标板内的包被抗原结合，加入 酶标记物和底物后显色，与标准曲线比较测定含量
◼ 一、实验目的与要求： ◼ 1、学习酶联免疫(ELISA)方法测定粮食及食品中黄曲 霉毒素B1的实验原理，掌握实验的操作要点及测定方 法 ◼ 2、了解酶联免疫(ELISA)的工作原理，正确熟练使用 酶标仪。 ◼ 二、实验原理： ◼ 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，样品中的黄曲霉 毒素B1经提取、脱脂、浓缩后与定量特异性抗体反应， 多余的游离抗体则与酶标板内的包被抗原结合，加入 酶标记物和底物后显色，与标准曲线比较测定含量
三、仪器与试剂 (一)试剂盒组成 1、 AFB1抗原包被16孔×6条形带框酶标板； 2、抗体： 3、酶标二抗： ■4、空白对照液： m5、 底物(1mg×4): 6、底物液A: 7、底物液B: 8、终止液： ·9、PBS一T洗液； ◆ 10、一次性手套。 (二)仪器 1、酶标仪：2、离心机
三、仪器与试剂 ◼ （一）试剂盒组成 ◼ 1、 AFB1抗原包被16孔×6条形带框酶标板； ◼ 2、抗体； ◼ 3、酶标二抗； ◼ 4、空白对照液； ◼ 5、底物（1mg×4）； ◼ 6、底物液A； ◼ 7、底物液B； ◼ 8、终止液； ◼ 9、PBS一T洗液； ◼ 10、一次性手套。 ◼ （二）仪器 ◼ 1、酶标仪； 2、离心机
四、实验步骤 (一)样品中AFB1的提取 ■1.大米和小麦（脂肪含量<3.0%）： 样品粉碎后过20目筛，称取20.0g,加入250m1具塞 维形瓶中。准确加人60L三氯甲烷，盖塞后滴水封 严，150rpm振荡30min。静置后，用快速定性滤纸过 滤于50mL烧杯中，立即取12mL滤液（相当4.0g样品》 于75mL蒸发皿中。65°℃水浴通风挥干。用2.0mL甲 醇一PBS(20+80)分三次(0.8mL、0.7mL、0.5mL) 溶解并彻底冲洗蒸发皿中凝结物，移至小试管加盖振 荡后静置待测。此液每毫升相当2.0g样品
四、实验步骤 ◼ （一）样品中AFB1的提取 ◼ 1． 大米和小麦（脂肪含量＜3.0％）： ◼ 样品粉碎后过20目筛，称取20.0g，加入250m1具塞 锥形瓶中。准确加人60mL三氯甲烷，盖塞后滴水封 严，150rpm振荡30min。静置后，用快速定性滤纸过 滤于50mL烧杯中，立即取12mL滤液（相当4.0g样品） 于75mL蒸发皿中。65℃水浴通风挥干。用2.0mL甲 醇一PBS (20+80)分三次（0.8mL、0.7mL、0.5mL） 溶解并彻底冲洗蒸发皿中凝结物，移至小试管加盖振 荡后静置待测。此液每毫升相当2.0g样品
2.玉米（脂肪含量3.0~5.0%）： 样品粉碎后过20目筛，称取20.0g,加入250L具塞锥形瓶中。准 确加入50.0mL甲醇一水(80+20)溶液和15.0mL石油谜，盖塞后 滴水封严，150rpm振荡30min。用快速定性滤纸过滤于125mL分 液漏斗中，待分层后，放出下层甲醇水溶液于50L烧杯内，从中取 10.0mL(相当于4.0g样品)于75mL蒸发皿中，以下按上述“65C 水浴通风挥干”起，依法操作。 ■3.花生（脂肪含量15.0一45.0%）： 样品去壳去皮粉碎后称取20.0g,加入250mL具塞三角瓶中，准确 加人100.0mL甲醇水(55+45)溶液和30mL石油谜，盖塞后滴水封 严，150rpm振荡30min,静置15min后用快速定性滤纸过滤于 125mL分液漏斗中，待分层后，放出下层甲醇水溶液于100mL烧 杯内，从中取20.0mL(相当于4.0g样品)置于另一125mL分液漏 斗中，加入20.0mL三氯甲烷，振摇2min,静置分层（如有乳化现 象可滴加甲醇促使分层)·放出三氯甲烷于75L蒸发皿中，再加 5.0mL三氯甲烷于分液漏斗中重复振摇提取后，放出三氯甲烷层 并于蒸发皿中，以下按上述“65℃水浴通风挥干”起，依法操作
◼ 2. 玉米（脂肪含量3.0～5.0％）： ◼ 样品粉碎后过20目筛，称取20.0g，加入250mL具塞锥形瓶中。准 确加入50.0mL甲醇一水（80+20）溶液和15.0mL石油醚，盖塞后 滴水封严，150rpm振荡30min。用快速定性滤纸过滤于125mL分 液漏斗中,待分层后，放出下层甲醇水溶液于50mL烧杯内，从中取 10.0mL （相当于4.0g样品）于75mL蒸发皿中,以下按上述“65℃ 水浴通风挥干”起，依法操作。 ◼ 3．花生（脂肪含量15.0－45.0％）： ◼ 样品去壳去皮粉碎后称取20.0g，加入250mL具塞三角瓶中，准确 加人100.0mL甲醇水(55 ＋45）溶液和30mL石油醚,盖塞后滴水封 严，150rpm振荡30min，静置15min后用快速定性滤纸过滤于 125mL分液漏斗中，待分层后，放出下层甲醇水溶液于100mL烧 杯内，从中取20.0 mL（相当于4.0g样品）置于另一125mL分液漏 斗中，加入20.0mL三氯甲烷，振摇2min，静置分层（如有乳化现 象可滴加甲醇促使分层）．放出三氯甲烷于75mL蒸发皿中，再加 5.0mL三氯甲烷于分液漏斗中重复振摇提取后，放出三氯甲烷层一 并于蒸发皿中，以下按上述“65℃水浴通风挥干”起，依法操作