质粒的基本特点 质粒是染色体之外的一种稳定的遗传因子, 大小在1-20kb之间,是双链闭合环状DNA分子 具有自主复制和转录能力,能使子代细胞保持它 们恒定的拷贝数可表达它所携带的遗传信息。它 可独立游离于细胞质中,也可整合到细菌染色体 上。质粒在细胞内的复制可分为严谨型(只在细 胞周期的一定阶段进行复制,一个细胞内只有1 至几个拷贝)和松弛型(细胞周期中随时可以复 制,拷贝数较多,一般在细胞内有20个以上)
质粒的基本特点 质粒是染色体之外的一种稳定的遗传因子， 大小在1－20kb之间，是双链闭合环状DNA分子， 具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它 们恒定的拷贝数可表达它所携带的遗传信息。它 可独立游离于细胞质中，也可整合到细菌染色体 上。质粒在细胞内的复制可分为严谨型（只在细 胞周期的一定阶段进行复制，一个细胞内只有1 至几个拷贝）和松弛型（细胞周期中随时可以复 制，拷贝数较多，一般在细胞内有20个以上）
E coli的pSC10是第一个用来作为克隆 载体的质粒,其包含一个 ECoR I酶切位点 及四环素抗性基因(tetr) pBR322是最早被广泛应用的克隆载体 之一,它包含 ampicillin和 Tetracycline抗性 基因和多种限制性内切酶的单一切点。许多 第二代、第三代的克隆载体都是从pBR322 衍生而来
E.coli 的pSC101是第一个用来作为克隆 载体的质粒，其包含一个EcoR I 酶切位点 及四环素抗性基因（tetr ) pBR322是最早被广泛应用的克隆载体 之一，它包含ampicillin和tetracycline抗性 基因和多种限制性内切酶的单一切点。许多 第二代、第三代的克隆载体都是从pBR322 衍生而来
实验一、质粒的抽提 实验目的:掌握减法抽提质粒的原理、步骤及 各试剂的作用 实验材料:含有pUC18载体的大肠杆菌 实验步骤: 1.细菌培养物的生长 2.细菌的收集及裂解 3.质粒的沉淀
实验一、质粒的抽提 实验目的：掌握减法抽提质粒的原理、步骤及 各试剂的作用 实验材料：含有pUC18载体的大肠杆菌 实验步骤： 1. 细菌培养物的生长 2. 细菌的收集及裂解 3. 质粒的沉淀
细菌培养物的生长 从平板上挑取单菌落接种于含相应抗生素 的培养基中,培养至对数生长后期即可 (松驰型质粒〕。严谨型质粒(拷贝数较 低)可采用绿霉素扩增的办法来扩增质粒;
细菌培养物的生长 从平板上挑取单菌落接种于含相应抗生素 的培养基中，培养至对数生长后期即可 （松驰型质粒〕。严谨型质粒（拷贝数较 低）可采用绿霉素扩增的办法来扩增质粒；
细菌的收集及裂解: 通过离心收集菌体;细菌的裂解可采用 离子型或非离子型去污剂、有机溶剂、碱处 理或加热处理等方法。(具体采用何种方法 取决于质粒的大小、大肠杆菌菌株及裂解后 纯化质粒的方法)
细菌的收集及裂解： 通过离心收集菌体；细菌的裂解可采用 离子型或非离子型去污剂、有机溶剂、碱处 理或加热处理等方法。（具体采用何种方法 取决于质粒的大小、大肠杆菌菌株及裂解后 纯化质粒的方法）