4.3血凝和血凝抑制实验 (1)血凝实验 血凝实验的具体操作方法，参照本教材的第四章第四节内 容：病毒的分离培养鉴定和血清学检测。 [结果判断]以“+”号多少表示血凝程度： ++++100%的RBC发生血凝，形成花边拉网状，红细胞 呈薄层均匀铺于板孔底，呈细沙状或薄膜状； +++75%的RBC发生血凝，红细胞虽铺于孔底，呈细沙 状，但边缘不整有下沉趋势； ++50%的RBC发生血凝，红细胞在孔底呈一环状，四 周有小凝集块： +25%的RBC发生血凝，红细胞在孔底沉聚呈小圆点， 边缘不光滑，周围有小凝集块； -100%的RBC沉积，红细胞于孔底呈一小圆点，边缘 光滑整齐，无凝集现象 以使50%的RBC发生凝集的最高稀释倍数，为病毒的血凝 效价。计算药物的MIC
4.3血凝和血凝抑制实验 （1）血凝实验 血凝实验的具体操作方法，参照本教材的第四章第四节内 容：病毒的分离培养鉴定和血清学检测。 [结果判断] 以“+”号多少表示血凝程度： ++++ 100％的RBC发生血凝，形成花边拉网状，红细胞 呈薄层均匀铺于板孔底，呈细沙状或薄膜状； +++ 75％的RBC发生血凝，红细胞虽铺于孔底，呈细沙 状，但边缘不整有下沉趋势； ++ 50％的RBC发生血凝，红细胞在孔底呈一环状，四 周有小凝集块； + 25％的RBC发生血凝，红细胞在孔底沉聚呈小圆点， 边缘不光滑，周围有小凝集块； - 100％的RBC沉积，红细胞于孔底呈一小圆点，边缘 光滑整齐，无凝集现象。 以使50％的RBC发生凝集的最高稀释倍数，为病毒的血凝 效价。计算药物的MIC
(2)病毒血凝抑制实验 根据血凝试验滴定的病毒血凝效价，以 “2十”的凝集者含有1个病毒血凝单位 如流感病毒的血凝效价为1：160，即病毒液 稀释至1：160时，每0.25ml中含1个血凝单 位，若要将0.25ml病毒液配制成含4个血凝 单位时，应稀释成1：(160÷4)，即1：40 稀释。在做血凝抑制试验时用4个血凝单位。 将病毒液配成4个血凝单位。血凝抑制实 验的方法，参照本教材的第四章第四节内 容：病毒的分离培养鉴定和血清学检测
（2）病毒血凝抑制实验 根据血凝试验滴定的病毒血凝效价，以 “2＋”的凝集者含有1个病毒血凝单位。 如流感病毒的血凝效价为1:160，即病毒液 稀释至1:160时，每0.25ml中含1个血凝单 位，若要将0.25ml病毒液配制成含4个血凝 单位时，应稀释成1:（160÷4），即1:40 稀释。在做血凝抑制试验时用4个血凝单位。 将病毒液配成4个血凝单位。血凝抑制实 验的方法，参照本教材的第四章第四节内 容：病毒的分离培养鉴定和血清学检测
二)细胞培养法 主要根据细胞对病毒的敏感性选择适宜 细胞株。人类病毒用人或猴的组织较敏感， 因此，研究人的病毒性疾病常用人胚肾、 人胚肺或人羊膜细胞。组织培养的方法中 以单层细胞培养是最常用的方法，它又有 原代和次代细胞培养、二倍体细胞株和传 代细胞系三种类型。本实验仅介绍对传代 细胞的操作方法
主要根据细胞对病毒的敏感性选择适宜 细胞株。人类病毒用人或猴的组织较敏感， 因此，研究人的病毒性疾病常用人胚肾、 人胚肺或人羊膜细胞。组织培养的方法中 以单层细胞培养是最常用的方法，它又有 原代和次代细胞培养、二倍体细胞株和传 代细胞系三种类型。本实验仅介绍对传代 细胞的操作方法。 二）细胞培养法
1.病毒TCID50滴定 (1)原理 多数病毒感染体外培养的细胞后，常引起细胞 形态学改变，如细胞团缩、裂解和细胞肿大等 这种改变称为病毒致病变效应(cytopathic effect, CPE),可以直接通过显微镜观察，亦可通过染 色得以识别和判断。CPE的程度可间接反映病毒 的毒力，因此利用这种特征可以用来测定病毒的 毒力。即能在半数细胞培养板孔或试管内引起细 胞发生病变所需的病毒量，定义为病毒的50%组 织细胞感染指数(50%tissue culture infectious dose,TCID5o）。在从事药物的抗病毒试验中， 常用100TCD5o的病毒感染量进行
1.病毒TCID50滴定 （1）原理 多数病毒感染体外培养的细胞后，常引起细胞 形态学改变，如细胞团缩、裂解和细胞肿大等， 这种改变称为病毒致病变效应（cytopathic effect， CPE），可以直接通过显微镜观察，亦可通过染 色得以识别和判断。CPE的程度可间接反映病毒 的毒力，因此利用这种特征可以用来测定病毒的 毒力。即能在半数细胞培养板孔或试管内引起细 胞发生病变所需的病毒量，定义为病毒的50％组 织细胞感染指数（50％tissue culture infectious dose，TCID50）。在从事药物的抗病毒试验中， 常用100 TCID50的病毒感染量进行