细胞器的分级分离 [目的要求] 1.掌握差速离心法和密度梯度离心法的原理 2.熟悉哺乳动物细胞的细胞核、线粒体分离和纯 化的实验方法
[目的要求] ◼ 1．掌握差速离心法和密度梯度离心法的原理。 ◼ 2．熟悉哺乳动物细胞的细胞核、线粒体分离和纯 化的实验方法。 细胞器的分级分离
实验原理] 球形颗粒的沉降速率取决于其密度、半径、介质 黏度和离心力。 差速离心法(differential centrifugation)是将细 胞匀浆在密度均一的介质中从低速到高速离心，较大 颗粒先在低速离心时沉淀，再用高速离心沉淀上清液 中的小颗粒物质，从而达到逐级分离细胞器的目的。 密度梯度离心法(density gradient centrifugation)是一定介质形成一连续或不连续的密 度梯度，顶部的细胞匀浆在重力或离心力场的作用下 分层、分离。一般先通过差速离心法将细胞器初步分 离，再进一步通过密度梯度离心法分离纯化细胞器
[实验原理] 球形颗粒的沉降速率取决于其密度、半径、介质 黏度和离心力。 差速离心法（differential centrifugation）是将细 胞匀浆在密度均一的介质中从低速到高速离心，较大 颗粒先在低速离心时沉淀，再用高速离心沉淀上清液 中的小颗粒物质，从而达到逐级分离细胞器的目的。 密度梯度离心法（density gradient centrifugation）是一定介质形成一连续或不连续的密 度梯度，顶部的细胞匀浆在重力或离心力场的作用下 分层、分离。一般先通过差速离心法将细胞器初步分 离，再进一步通过密度梯度离心法分离纯化细胞器
细胞器的分离常通过组织细胞匀浆、分级分 离和分析三个步骤完成。 分级分离方法有两种，即：差速离心法和密 度梯度离心法
细胞器的分离常通过组织细胞匀浆、分级分 离和分析三个步骤完成。 分级分离方法有两种，即：差速离心法和密 度梯度离心法
[实验用品] 1. 器具：玻璃匀浆器、低速离心机、高速冷冻离心 机、天平、普通光学显微镜、1.5mlEp管、载玻片 10ml滴管、冰盒、冰块、滤网、染缸、20ml烧杯 2.材料：大白鼠。 3.试剂：生理盐水、PBS、0.25mo/L的蔗糖溶液、 0.34mo/L蔗糖-0.5mmo/LMg(Ac)2溶液、0.88 mol/L蔗糖-0.5 mmol/L Mg(Ac)2溶液、95%乙醇、 甲基绿-派洛宁染液、丙酮、02%的詹纳斯绿B
[实验用品] 1．器具：玻璃匀浆器、低速离心机、高速冷冻离心 机、天平、普通光学显微镜、1.5 ml Ep管、载玻片、 10 ml滴管、冰盒、冰块、滤网、染缸、20 ml烧杯。 2．材料：大白鼠。 3． 试剂：生理盐水、PBS、0.25 mol/L的蔗糖溶液、 0.34 mol/L蔗糖-0.5 mmol/L Mg(Ac)2溶液、0.88 mol/L蔗糖-0.5 mmol/L Mg(Ac)2溶液、95％乙醇、 甲基绿-派洛宁染液、丙酮、0.2％的詹纳斯绿B
[实验步骤] 1.组织匀浆制备 (1)取材将空腹12~24h的大鼠处死。剖开腹部 迅速取出肝脏，用预冷的生理盐水洗净血污，用 滤纸吸干。 (2)制备匀浆称取约1~2g左右的肝组织，用预冷 的0.25mol/儿的蔗糖溶液冲洗数次，剪碎。以预 冷的0.25mol/儿的蔗糖溶液悬浮剪碎的组织，移 入匀浆器内，在冰浴条件下匀浆。匀浆完成后 用滤网过滤，即制得肝细胞匀浆，备用
[实验步骤] 1．组织匀浆制备 （1）取材 将空腹12～24 h的大鼠处死。剖开腹部， 迅速取出肝脏，用预冷的生理盐水洗净血污，用 滤纸吸干。 （2）制备匀浆 称取约1～2 g左右的肝组织，用预冷 的0.25 mol/L的蔗糖溶液冲洗数次，剪碎。以预 冷的0.25 mol/L的蔗糖溶液悬浮剪碎的组织，移 入匀浆器内，在冰浴条件下匀浆。匀浆完成后， 用滤网过滤，即制得肝细胞匀浆，备用