第七章 动物基因工程
第七章 动物基因工程
第一节基因工程概述 基因工程( Genetic engineering)是一种DNA重组技术,它 是在分子水平上进行的遗传操作,即把供体细胞中的 基因或基因组提取出来,按照预先设计的蓝图,经过 体外加工重组,或者把人工合成的基因转移到受体细 胞并获得新的遗传特性的技术。由于被转移的基因必 须与载体DNA重组后才能实现转移,所以基因工程也 叫做重组DNA技术。 基因工程的基本操作程序包括:(1)目的基因的分离或合 成;(2)用工具酶对目的基因和载体( Vector)进行加 工处理,把目的基因与载体结合成重组DNA分子;(3) 把重组DNA分子引入受体细胞,并使目的基因和载体 上其他基因得以表达;(4)转化体细胞的扩增;(5) 重组体细胞的鉴定与筛选
第一节 基因工程概述 基因工程(Genetic engineering)是一种DNA重组技术，它 是在分子水平上进行的遗传操作，即把供体细胞中的 基因或基因组提取出来，按照预先设计的蓝图，经过 体外加工重组，或者把人工合成的基因转移到受体细 胞并获得新的遗传特性的技术。由于被转移的基因必 须与载体DNA重组后才能实现转移，所以基因工程也 叫做重组DNA技术。 基因工程的基本操作程序包括：(1) 目的基因的分离或合 成；(2)用工具酶对目的基因和载体（Vector）进行加 工处理，把目的基因与载体结合成重组DNA分子；(3) 把重组DNA分子引入受体细胞，并使目的基因和载体 上其他基因得以表达；（4）转化体细胞的扩增；（5） 重组体细胞的鉴定与筛选
基因克隆示意图 载体DNA 限制性内切酶切开) 目的基因 重组体 宿主细胞 已转化的宿主细胞 繁殖 阳性克隆株 表达
• 基因克隆示意图 目的基因 载体DNA (限制性内切酶切开) 重组体 宿主细胞 已转化的宿主细胞 繁殖 阳性克隆株 表达
常用的工具酶 限制性核酸内切酶 切割DNA DNA连接酶 生成3′-5磷酸二酯键 DNA聚合酶I探针标记、补平3末端 反转录酶 CDNA合成 多聚核苷酸激酶5磷酸化、探针标记 末端转移酶 3末端多聚尾 碱性磷酸酶 切除末端磷酸基
第二节 工具酶 限制性核酸内切酶 切割DNA DNA连接酶 生成3′- 5′磷酸二酯键 DNA聚合酶Ⅰ 探针标记、补平3′末端 反转录酶 cDNA合成 多聚核苷酸激酶 5′磷酸化、探针标记 末端转移酶 3′末端多聚尾 碱性磷酸酶 切除末端磷酸基 常用的工具酶
限制性核酸内切酶 细菌限制修饰体系 识别特异的位点一酶切位点 回文结构4~6bp ECoRI 出现两种末端 GAATTC CTTAAG 粘性末端粘端 平头末端平端 Smal I --CCCGGG 配伍末端 --GGGCCC-
限制性核酸内切酶 细菌限制修饰体系 限制性核酸内切酶 甲基化酶 识别特异的位点—酶切位点 回文结构 4～6 bp 出现两种末端 粘性末端 粘端 平头末端 平端 配伍末端 GAATTC CTTAAG Eco RⅠ CCCGGG GGGCCC Smal Ⅰ