第一节常规PCR技术 重点内容 常规PCR技术的工作原理、 反应体系和基本步骤
11 第一节 常规PCR技术 重点内容 常规PCR技术的工作原理、 反应体系和基本步骤
一、PCR技术的诞生 ▣PCR的实现 ·1985年美国Cetus?公司的Mullis等发明了具 有划时代意义的聚合酶链式反应，实现了 DNA片段的体外扩增。 Dancing Naked in the Mind Fleld 迷幻藥，外星人 還有一個化學家 Mullis获得1993年诺贝尔化学奖，出版自传《心灵裸舞》
12 PCR的实现 • 1985年美国Cetus公司的Mullis等发明了具 有划时代意义的聚合酶链式反应，实现了 DNA片段的体外扩增。 一、PCR技术的诞生 Mullis获得1993年诺贝尔化学奖，出版自传《心灵裸舞》
如果你是Mullis,金夜台做？ 基本原料 酶和蛋白 模板（解链的DNA母链）√ DNA聚合酶√ 底物（四种dNTP)√ 引物酶(RNA聚合酶)X 引物（提供游离3'-0H)√ 解螺旋酶？ DNA拓扑异构酶？ 单链DNA结合蛋白？ DNA连接酶？
13 基本原料 模板（解链的DNA母链） 底物（四种dNTP） 引物（提供游离3’-OH） 酶和蛋白 DNA聚合酶 引物酶(RNA聚合酶） 解螺旋酶 DNA拓扑异构酶 单链DNA结合蛋白 DNA连接酶 √ √ √ √ × ？ ？ ？ ？
如暴你是Mullis,金夜台做？ 新思路 起始 DNA解开成单链， 变性：加热使DNA解 形成引发体 开成单链 Q 延伸 前导链连续复制， 退火：降温使引物和 后随链不连续复制 DNA单链互补结合 Q 终止 切除引物，填补缺口， 延伸：引物延伸合成 连接切口 与模板互补的新链 DNA以指数倍扩增
14 新思路 变性：加热使DNA解 开成单链 退火：降温使引物和 DNA单链互补结合 延伸：引物延伸合成 与模板互补的新链 DNA以指数倍扩增
如果你是Mullis,金夜台做？ 基本原料 酶和蛋白 模板（解链的DNA母链)√ DNA聚合酶√ 底物（四种dNTP)√ 引物酶(RNA聚合酶)X 引物（提供游离3'-0H)√ 解螺旋酶㐅 DNA拓扑异构酶X 单链DNA结合蛋白X DNA连接酶X
15 基本原料 模板（解链的DNA母链） 底物（四种dNTP） 引物（提供游离3’-OH） 酶和蛋白 DNA聚合酶 引物酶(RNA聚合酶） 解螺旋酶 DNA拓扑异构酶 单链DNA结合蛋白 DNA连接酶 √ √ √ √ × × × × ×