实验三树木花粉收集、储藏与生活力测定为了保证杂交工作顺利进行，必须在雌花开放前取得足够量的花粉。在自然条件下，花粉一般很容易丧失生活力。花粉贮藏的目的在于人为创造一定的环境条件，使花粉自身代谢强度降低，从而延长花粉寿命，并通过花粉贮藏和运输，打破杂交亲本时间与空间隔离，解决花期不遇和异地亲本杂交等问题。为了保证杂交成功，经长期贮藏或从外地寄来的花粉，在杂交前应先检验花粉的生活力，避免因花粉失去活力而导致杂交失败，造成人力、物力浪费。一、实验目的通过实验掌握林木花粉收集、储藏与生活力测定方法。二、实验材料杨树、白榆、油松、银杏、杜仲、法桐等树木的花粉。三、实验药剂与用具显微镜、冰箱、恒温箱、干燥器、培养皿、安颜瓶或指形管、酒精灯、烧杯、量筒、凹型载玻片、盖玻片、脱脂棉、花粉筛、标签、刀片、镊子、解部针、毛笔、记录本、铅笔、无水乙醇、硫酸、氯化钙、硅胶、煎糖（或者葡萄糖）、琼脂、苯胺兰、联苯胺、碳酸氢钠、α-奈乙酚、过氧化氢、红氮四唑、甘油、硼酸、蒸馏水等。四、实验方法与步骤1花粉来集林木大多为风媒花树种，可在散粉时于树上直接收集花粉，一些树种也可以采用切枝水培方法收集花粉，或摘取雄（球）花阴干收集花粉等方法。其中，油松、银杏等可直接于树上摘取雄球花阴干收集花粉：杨、柳、榆等可提前切取花枝进入温室水培收集，但切枝水培的枝条采集不宜过早，如杨树花枝采集以每年12月底以后为好，因花芽发育需要一个低温期，过早则难以取得花粉。虫媒花树种的花粉数量少，花粉粒大且具有粘性，可于开花前数日采集即将开放的花蕾，取出花药（勿带花丝)，贮藏备用。2花粉储藏树木花粉寿命的长短，主要取决于遗传特性，控制温度和湿度等条件对延长花粉的寿命有重要影响。低温、干燥、避光有利于花粉寿命的延长
实验三 树木花粉收集、储藏与生活力测定 为了保证杂交工作顺利进行，必须在雌花开放前取得足够量的花粉。在自然条 件下，花粉一般很容易丧失生活力。花粉贮藏的目的在于人为创造一定的环境条件， 使花粉自身代谢强度降低，从而延长花粉寿命，并通过花粉贮藏和运输，打破杂交 亲本时间与空间隔离，解决花期不遇和异地亲本杂交等问题。为了保证杂交成功， 经长期贮藏或从外地寄来的花粉, 在杂交前应先检验花粉的生活力，避免因花粉失 去活力而导致杂交失败，造成人力、物力浪费。 一、实验目的 通过实验掌握林木花粉收集、储藏与生活力测定方法。 二、实验材料 杨树、白榆、油松、银杏、杜仲、法桐等树木的花粉。 三、实验药剂与用具 显微镜、冰箱、恒温箱、干燥器、培养皿、安瓿瓶或指形管、酒精灯、烧杯、 量筒、凹型载玻片、盖玻片、脱脂棉、花粉筛、标签、刀片、镊子、解剖针、毛笔、 记录本、铅笔、无水乙醇、硫酸、氯化钙、硅胶、蔗糖（或者葡萄糖）、琼脂、苯 胺兰、联苯胺、碳酸氢钠、α-奈乙酚、过氧化氢、红氮四唑、甘油、硼酸、蒸馏 水等。 四、实验方法与步骤 1 花粉采集 林木大多为风媒花树种，可在散粉时于树上直接收集花粉，一些树种也可以采 用切枝水培方法收集花粉，或摘取雄（球）花阴干收集花粉等方法。其中，油松、 银杏等可直接于树上摘取雄球花阴干收集花粉；杨、柳、榆等可提前切取花枝进入 温室水培收集，但切枝水培的枝条采集不宜过早，如杨树花枝采集以每年 12 月底 以后为好，因花芽发育需要一个低温期，过早则难以取得花粉。虫媒花树种的花粉 数量少，花粉粒大且具有粘性，可于开花前数日采集即将开放的花蕾，取出花药(勿 带花丝)，贮藏备用。 2 花粉储藏 树木花粉寿命的长短，主要取决于遗传特性，控制温度和湿度等条件对延长花 粉的寿命有重要影响。低温、干燥、避光有利于花粉寿命的延长
具体储藏方法是将花粉采集后阴干，除净杂物，分装到安瓶、指形管或其它小容器中：注意不论盛在任何容器，都不宜过满，也不宜盖严，以免妨碍气体交换，影响花粉干燥。一般数量约为容器容积的1/5-1/4；用双层纱布或棉花封口：贴上标签，注明树种、花粉品种和采集日期、贮藏日期等：然后将容器放入盛有干燥剂的干燥器中，置于0-4℃冰箱内储藏。多数树种最适宜的储藏含水量在10%以下，可以将花粉放入盛有硅胶的安颜瓶内密封储藏。但也有树种需要保持较高的含水量，可以通过在干燥器内添加不同浓度的硫酸调节花粉储藏的相对湿度（表3-1）。表3-1干燥器环境温度0℃时不同干燥剂与相对湿度的关系硫酸浓度（%）干燥剂硅胶95.063.154.349.442.134.829.417.80102535506570905相对湿度（%）3花粉生命力监鉴定测定花粉生活力的方法包括直接测定和间接测定。直接测定法是将花粉直接授在同树种的雌蕊柱头上，并做好隔离，授粉一定时间后检查花粉萌发情况，或统计结实情况等。间接测定法有培养基法、染色法等。（1）活体授粉法在同树种的雌蕊柱头上用待测花粉直接授粉，并套袋隔离，观察其雌花的发育。如果胚珠能够正常发育并能收获种子，说明该花粉具有生命力，否则就没有生命力。一般为快速取得实验结果，可通过切下柱头用苯胺蓝染色制片，于显微镜下检查花粉萌发情况。①染色与软化液配制染色液配制：称取0.1g苯胺蓝溶于100ml的蒸馏水中，配制成0.1%的苯胺蓝水溶液。软化液配制：称取32g氢氧化钠溶于100ml的蒸馏水中，配制成8mo1/L的氢氧化钠溶液。②染色与观察将待检测花粉直接授在同种的雕蕊柱头上，并套袋隔离。因树种不同，隔5-72h采集已授过粉的雌蕊柱头，于8mo1/L的氢氧化钠溶液（或60℃温水）软化10-15min，水洗10min，用苯胺蓝染色液染色10min或过夜，于载玻片上将花柱撕开压片。在显微镜下观察，若花粉具有生命力，即可观察到花粉管（染成蓝色）深入到柱头组织：若花粉失去生命力，则无花粉管伸入柱头组织。1
1 具体储藏方法是将花粉采集后阴干，除净杂物，分装到安瓿瓶、指形管或其它 小容器中；注意不论盛在任何容器，都不宜过满，也不宜盖严，以免妨碍气体交换， 影响花粉干燥。一般数量约为容器容积的 1/5-1/4；用双层纱布或棉花封口；贴上 标签，注明树种、花粉品种和采集日期、贮藏日期等；然后将容器放入盛有干燥剂 的干燥器中，置于 0-4℃冰箱内储藏。多数树种最适宜的储藏含水量在 10%以下， 可以将花粉放入盛有硅胶的安瓿瓶内密封储藏。但也有树种需要保持较高的含水 量，可以通过在干燥器内添加不同浓度的硫酸调节花粉储藏的相对湿度（表 3-1）。 表 3-1 干燥器环境温度 0℃时不同干燥剂与相对湿度的关系 干燥剂 硫酸浓度（%） 硅胶 95.0 63.1 54.3 49.4 42.1 34.8 29.4 17.8 相对湿度（%） 0 10 25 35 50 65 70 90 5 3 花粉生命力鉴定 测定花粉生活力的方法包括直接测定和间接测定。直接测定法是将花粉直接 授在同树种的雌蕊柱头上，并做好隔离，授粉一定时间后检查花粉萌发情况，或统 计结实情况等。间接测定法有培养基法、染色法等。 （1）活体授粉法 在同树种的雌蕊柱头上用待测花粉直接授粉，并套袋隔离，观察其雌花的发育。 如果胚珠能够正常发育并能收获种子，说明该花粉具有生命力，否则就没有生命力。 一般为快速取得实验结果，可通过切下柱头用苯胺蓝染色制片，于显微镜下检查花 粉萌发情况。 ①染色与软化液配制 染色液配制：称取 0.1g 苯胺蓝溶于 100ml 的蒸馏水中，配制成 0.1%的苯胺蓝 水溶液。 软化液配制：称取 32g 氢氧化钠溶于 100ml 的蒸馏水中，配制成 8mol/L 的氢 氧化钠溶液。 ②染色与观察 将待检测花粉直接授在同种的雌蕊柱头上，并套袋隔离。因树种不同，隔 5-72h 采集已授过粉的雌蕊柱头，于8mol/L的氢氧化钠溶液（或60℃温水）软化10-15min， 水洗 10min，用苯胺蓝染色液染色 10min 或过夜，于载玻片上将花柱撕开压片。在 显微镜下观察，若花粉具有生命力，即可观察到花粉管（染成蓝色）深入到柱头组 织；若花粉失去生命力，则无花粉管伸入柱头组织