HAT选择培养机制主要途径糖氨基酸氨甲噪呤(A)+次黄嘌呤(H)GMP核苷酸→DNAHGPRT核苷酸前体TK(胸苷激酶)胸腺嘧啶核苷(T)dTMP
HAT选择培养机制 主要途径 糖 氨基酸 氨甲喋呤（A） 次黄嘌呤(H) GMP 核苷酸 DNA HGPRT 核苷酸前体 TK(胸苷激酶) 胸腺嘧啶核苷(T) dTMP
HAT培养基：H 为次黄嘌呤，是HGPRT的底物，为DNA合成提供原料（核苷酸旁路合成原料）A可阻断正常的DNA合成（嘌呤及TMP合成受抑制）T在胸苷激酶（TK）的作用下生成胸腺嘧啶核苷酸，为DNA合成提供原料
HAT培养基： H 为次黄嘌呤，是HGPRT的底物，为 DNA合成提供原料（核苷酸旁路合成原 料） A 可阻断正常的DNA合成（嘌呤及TMP 合成受抑制） T 在胸苷激酶（TK）的作用下生成胸腺 嘧啶核苷酸，为DNA合成提供原料
含有饲养细胞的24/96孔板内悬浮培养，23天换液一次（HAT的培养液7天内）,第714天改用HT培养液（对照阻的骨髓瘤细胞已死亡）14天以后用普通的RPMI1640完全培养液常用的饲养细胞有小鼠腹腔巨噬细胞、脾细胞和胸腺细胞等89天可对所有克隆生长孔的培养上清进行抗体检测，筛选出产生抗体的阳性克隆
◼ 含有饲养细胞的24/96孔板内悬浮培养，2~3 天换液一次(HAT的培养液7天内),第7~14天 改用HT培养液（对照阻的骨髓瘤细胞已死亡） 14天以后用普通的RPMI1640完全培养液。 ◼ 常用的饲养细胞有小鼠腹腔巨噬细胞、脾细 胞和胸腺细胞等。 ◼ 8~9天可对所有克隆生长孔的培养上清进行抗 体检测,筛选出产生抗体的阳性克隆
培养板
培 养 板
B细胞杂交瘤的技术流程抗原B细胞骨髓瘤脾脏抗原免疫杂交瘤3杂交瘤1杂交瘤2细胞骨髓瘤死亡死亡特异性抗体的筛选
B细胞杂交瘤的技术流程