体内免疫法----颗粒性抗原(如细菌、细胞)的免疫原性强，可不加佐剂可溶性抗原则按每只小鼠10-100ug抗原与弗氏完全佐剂等量混合后注入腹腔内J ( Freund's complete弗氏完全佐剂adjuvant,FCA）：由矿物油（如降脂烷或液体石蜡等）、乳化剂和灭活的分枝杆菌组成的乳化佐剂。弗氏不完全佐剂不含分枝杆菌
◼ 体内免疫法 - 颗粒性抗原(如细菌、细胞) 的免疫原性强,可不加佐剂,可溶性抗原则按每 只小鼠10-100ug抗原与弗氏完全佐剂等量混 合后注入腹腔内. 弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant,FCA）: 由矿物油（如降脂烷或 液体石蜡等）、乳化剂和灭活的分枝杆菌组成 的乳化佐剂。 弗氏不完全佐剂不含分枝杆菌
免疫佐剂（adjuvant）（1）定义：先于抗原或同时与抗原混合注射机体可增强抗原的免疫原性的物质。(2）应用①弱免疫原性物质；②免疫原剂量不足。（3）佐剂种类1）油性乳剂一弗氏佐剂（Freundadjuvant）2)无机化合物3）微生物及其产物4)脂质体5)细胞因子
免疫佐剂（adjuvant ) （1）定义：先于抗原或同时与抗原混合注射机体 可增强抗原的免疫原性的物质。 （2）应用 ①弱免疫原性物质； ②免疫原剂量不足。 （3）佐剂种类 1)油性乳剂—弗氏佐剂（Freund adjuvant） 2)无机化合物 3)微生物及其产物 4)脂质体 5)细胞因子
二.细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养1.细胞融合的基本方法(PEG促融）脾细胞骨髓瘤细胞（“永久”细胞）(1×108)(2/3 ×107)聚乙工醇(PEG)37-40℃2mins融合细胞（杂交瘤细胞）用作细胞融合剂的聚乙二醇(PEG)一般选用MW4000常用浓度为50%，pH8.0~pH8.2。可加入二甲基亚矾(DMSO)。2002年12月神舟4号飞船搭载B淋巴细胞和骨髓瘤细胞升空进行细胞融合实验
二.细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养 1.细胞融合的基本方法(PEG促融) 脾细胞 骨髓瘤细胞(“永久”细胞) (1×108) (2~3×107) 聚乙二醇(PEG) 37-40℃ 2mins 融合细胞（杂交瘤细胞） 用作细胞融合剂的聚乙二醇(PEG)一般选用MW4000， 常用浓度为50％，pH8.0～pH8.2 。可加入二甲基亚 砜(DMSO)。2002年12月神舟4号飞船搭载B淋巴细胞 和骨髓瘤细胞升空进行细胞融合实验
原理：细胞进行融合时，培养液中只有部分细胞融合成杂种细胞，还有大量未融合的双亲细胞。这就需要选择分离纯化杂种细胞。为此要创造一种只让杂种细胞生长繁殖而亲本细这就要利用杂种细胞和亲本胞死亡的环境。细胞对生长条件的要求和代谢的差异来进行选择。其中最常用的是HAT选择系统
原理： 细胞进行融合时，培养液中只有部分细胞 融合成杂种细胞，还有大量未融合的双亲细 胞。这就需要选择分离纯化杂种细胞。为此 要创造一种只让杂种细胞生长繁殖而亲本细 胞死亡的环境。这就要利用杂种细胞和亲本 细胞对生长条件的要求和代谢的差异来进行 选择。其中最常用的是HAT选择系统
2、杂交瘤细胞的选择性培养常用的选培养基为HAT培养基次黄嘌呤(H)、氨基碟呤(A能阻断DNA合成)胸腺嘧啶(T)。脾细胞具有次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT),E因此脾-瘤融合的杂交瘤细胞可利用HGPRT酶,用次黄票岭(H)和胸腺嘧啶(T)合成DNA使杂交瘤细胞得以生长
2、杂交瘤细胞的选择性培养 ◼ 常用的选择培养基为HAT培养基。 次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A能阻断DNA合成)、 胸腺嘧啶(T)。 ◼ 脾细胞具有次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRT),因此脾-瘤融合的杂交瘤细胞可利用 HGPRT酶,用次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)合成 DNA,使杂交瘤细胞得以生长