入噬菌体载体的类型 两种类型： ①置换型 可被外源DNA置换λ噬菌体非必需区的 载体。 replacement 两侧有一对限制性酶切位点的载体。 ②插入型 含一个限制性位点可供插入外源DNA的载 园 insertion 体，这类入噬菌体载体称插入型载体。 非必需区已经去除。 腿 12
12 λ噬菌体载体的类型 ▪ 两种类型： ①置换型 replacement ②插入型 insertion 可被外源DNA置换λ噬菌体非必需区的 载体。 两侧有一对限制性酶切位点的载体。 含一个限制性位点可供插入外源DNA的载 体，这类λ噬菌体载体称插入型载体。 非必需区已经去除
Charon 40 stuffer:235 bp repeats,80copy (Iac操纵基因+腺 病毒DNA) 内含XmalII/XmaIII/Nael(MCS),防止重新自连 左右各16个位点用于切开stuffer insert:9.2~24.2kb 团 (XmaIII/XmaIII/NaeI)80 盈 MCS 13 MCS
13 stuffer：235 bp repeats，约80copy (lac操纵基因+腺 病毒DNA) 内含XmaIII/XmaIII/NaeI(MCS) ，防止重新自连 左右各16个位点用于切开stuffer insert: 9.2～24.2kb MCS MCS (XmaIII/XmaIII/NaeI)80 Charon 40
四、克隆原理及步骤 结合入包装过程 1.通过裂解过程增殖载体、回收、纯化 2.酶切、载体与外源DNA 3.连接 4.体外包装 5.感染/铺平板 涵 6.筛选 14
14 结合包装过程 1．通过裂解过程增殖载体、回收、纯化 2．酶切、载体与外源DNA 3．连接 4．体外包装 5．感染/铺平板 6．筛选 四、克隆原理及步骤
)DNA载体的优点 比一般的质粒载体的容量大的多。 用在真核生物基因组文库的建立。 Bacteriophage入DNA Human DNA 49 kb (3x109bp) Replaceable region Cut with BamHI Remove replaceable BamHI Sau3A Partial digestion with Sau3A into region 20-kb fragments 超 N (Discard) 20-kb fragment 7 vector arms with sticky ends with sticky ends
15 比一般的质粒载体的容量大的多。 DNA载体的优点 用在真核生物基因组文库的建立。 Sau3A BamHI
I V E 20-kb fragment 入vector arms with sticky ends with sticky ends Mix human DNA fragments and 7 arms Seal with DNA ligase Recombinant DNA of size that can be packaged Package with in vitro phage-assembly system 涵 Recombinant 2 virion containing human genomic DNA 16
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