溶原、溶菌分化 环境条件：营养差溶原，营养丰富时降解CⅡ的宿主 蛋白酶被激活，那么噬菌体倾向于裂解细胞。 cAMP: 调节启动子，高促进溶原、低溶菌 感染复数：感染时噬菌体与细菌的比例。 CⅡ蛋白的单体不稳定、没有活性，只有形成二聚体 才具活性。少噬菌体时产生的CⅡ很少，不足以形成 二聚体，倾向于裂解；当感CⅡ的浓度增加，有利溶 原化。 c蛋白：激活转录、抑制裂解基因的表达，促进溶原
7 环境条件：营养差溶原，营养丰富时降解CⅡ的宿主 蛋白酶被激活，那么噬菌体倾向于裂解细胞 。 cAMP： 调节启动子，高促进溶原、低溶菌 感染复数：感染时噬菌体与细菌的比例。 CⅡ蛋白的单体不稳定、没有活性，只有形成二聚体 才具活性。少噬菌体时产生的CⅡ很少，不足以形成 二聚体，λ倾向于裂解；当感CⅡ的浓度增加，有利溶 原化。 cII蛋白：激活转录、抑制裂解基因的表达，促进溶原 溶原、溶菌分化
溶原化和裂解平衡关键是CI和Cro之间的对抗： 发生转换的关键是CⅡ。 若CIⅡ是有活性的，通过Pre启动子有效地合成阻遏 物CI,结果CI占据操纵基因OL和OR,启动溶原。 若CⅡ无活性，阻遏物CI不能合成，Cro就结合于操 纵基因OR上，启动裂解。 腿 8
8 溶原化和裂解平衡关键是CI和Cro之间的对抗： 发生转换的关键是CⅡ。 若CⅡ是有活性的，通过Pre启动子有效地合成阻遏 物CI ，结果CI占据操纵基因OL和OR ，启动溶原。 若CⅡ无活性，阻遏物CI不能合成，Cro就结合于操 纵基因OR 上，启动裂解
、噬菌体的选择标记 （入的生物学特性) 1、B半乳糖苷酶失活型载体： 在入基因组中引入了Lc☑'序列。（其上含有一个 EcoR I克隆位点)。 LacZ' EcoR I 超 选择标记： 感染LacZ突变的大肠杆菌，经IPTG的诱导，利用 XgaI的显色反应作选择标记
9 二、噬菌体的选择标记（ 的生物学特性） 1、-半乳糖苷酶失活型载体： 在基因组中引入了LacZ’序列。（其上含有一个 EcoR I 克隆位点）。 感染LacZ突变的大肠杆菌，经IPTG的诱导，利用 Xgal的显色反应作选择标记。 LacZ’ EcoR I 选择标记:
2、c基因失活： c蛋白的表达促进噬菌体进入溶原 插入导致载体不能合成阻遏物，载体DNA不能 进入溶源期，受体菌裂解，形成清晰的噬菌斑。 没有外源DNA插入的入载体感染受体菌形成混浊 噬菌斑。 超 涵 cl EGoR I
10 cI蛋白的表达促进噬菌体进入溶原 插入导致载体不能合成阻遏物， 载体DNA不能 进入溶源期，受体菌裂解，形成清晰的噬菌斑。 没有外源DNA插入的载体感染受体菌形成混浊 噬菌斑。 2、cI基因失活: cI EcoR I
3、Spi-重组体的筛选 >野生型噬菌体不能在携带有P2原噬菌体的溶源菌中生长，) 的这种表型称为Spit(对P2的干扰敏感)。 >当基因组中缺少参与重组的red和gam基因时，突变体便可 以在P2溶原菌中生长，其表型称为Spi-。 >基因red和gam位于非必需区域内，外源DNA片段能置换基因 red和gam形成重组体，其重组体能在recA+的P2溶原菌中繁殖， 并且显示出Spi-的表型。 >因此只要选用ecA+的P2溶原菌作为宿主菌，就可以对重组体 进行筛选。 能浸染宿主菌产生噬菌斑的即是重组分子。但这种噬菌斑小且 少。 11
11 ➢野生型λ噬菌体不能在携带有P2原噬菌体的溶源菌中生长，λ 的这种表型称为Spi+(对P2的干扰敏感)。 ➢当λ基因组中缺少参与重组的red和gam基因时，λ突变体便可 以在P2溶原菌中生长，其表型称为Spi-。 ➢基因red和gam位于非必需区域内，外源DNA片段能置换基因 red和gam形成重组体，其重组体能在recA+的P2溶原菌中繁殖， 并且显示出Spi-的表型。 ➢因此只要选用recA+的P2溶原菌作为宿主菌，就可以对重组体 进行筛选。 能浸染宿主菌产生噬菌斑的即是重组分子。但这种噬菌斑小且 少。 3、Spi-重组体的筛选