西北农林科技大学 emistre 生物和，司 动物科技学院生物化学课程组 第六节酶的分离苑化 及其活性测定
生物 化学 动物科技学院生物化学课程组 西北农林科技大学 第六节 酶的分离纯化 及其活性测定
第之节醉的少高纯化及共活性测定 分离纯化 目的 目的 2 过程与方法 3 注意事顶 研究酶的理化性质，包括结构与功能、 2 舌性测定 生物学作用、对酶鉴定。纯酶作为生化 试剂及用作药物的酶（纯度高）等
生物 化学 第六节 酶的分离纯化及其活性测定 目的 研究酶的理化性质，包括结构与功能、 生物学作用、对酶鉴定。纯酶作为生化 试剂及用作药物的酶(纯度高)等。 分离纯化 活性测定 目的 过程与方法 注意事项 1 (1) (2) (3)
生物 化学 第之节醉的分膏纯化及共活性测突 分离纯化 过程与方法 目的 过程与方法 抽提 注意事顶 低温下，用水或低盐缓冲液抽提酶，含 活性测定 杂质多。 分离提纯 常用的方法：盐析、有机溶剂沉淀、层 析技术、电泳、超速离心等。 保存 将酶制品浓缩，结晶，以便保存
生物 化学 第六节 酶的分离纯化及其活性测定 过程与方法 选材： 动物、植物或微生物，要求含酶 量高，易分离，经济，取材方便 破碎细胞 分离纯化 活性测定 目的 过程与方法 注意事项 研磨 匀浆 捣碎机 超声波 溶菌酶 化学溶剂 (甲苯) 纤维 素酶 提取液 动物 细菌 植物 抽提 低温下，用水或低盐缓冲液抽提酶，含 杂质多。 分离提纯 常用的方法：盐析、有机溶剂沉淀、层 析技术、电泳、超速离心等。 保存 将酶制品浓缩，结晶，以便保存 1 (1) (2) (3)
第之节醉的分膏纯化及其活性测突 分离纯化 淮意事项 目的 尽量减少酶活性的损失；低温0~5℃，有机 2 过程与方法 溶剂：-15~-20℃；抽提液加入EDTA(络合 注意事项 金属)；抽提液加入巯基乙醇（防止-SH氧化 活性测定 使酶失活)；不能过度搅拌，以免产生大量泡 沫，使酶变性；测定酶的比活力，使比活力升 高。酶易失活，不可烘干。通常先透析出去小 分子，浓缩，结晶或冷冻干燥制成干粉保存于 冰箱。如果是酶液，与等体积甘油混合，并适 当加入竞争性抑制剂-20℃长期保存
生物 化学 第六节 酶的分离纯化及其活性测定 注意事项 尽量减少酶活性的损失；低温 0～5℃，有机 溶剂：-15～-20℃；抽提液加入EDTA（络合 金属）；抽提液加入巯基乙醇（防止-SH氧化， 使酶失活）；不能过度搅拌，以免产生大量泡 沫，使酶变性；测定酶的比活力，使比活力升 高。酶易失活，不可烘干。通常先透析出去小 分子，浓缩，结晶或冷冻干燥制成干粉保存于 冰箱。如果是酶液，与等体积甘油混合，并适 当加入竞争性抑制剂-20℃长期保存。 分离纯化 活性测定 目的 过程与方法 注意事项 1 (1) (2) (3)
生物 化学 第之节酵的分高纯化及其活性测定 分离纯化 酶活力 2 活性测定 指酶催化化学反应的能力。其 酶活力 衡量标准是酶促反应的速度。 所以酶活力测定就是酶促反应速 (2 反应初速度 度的测定 3 测定方法 酶促反应的速度：在适宜条件 4 活力单位 实例 下，单位时间内底物的消耗或产物 的生成量
生物 化学 第六节 酶的分离纯化及其活性测定 酶活力： 指酶催化化学反应的能力。其 衡量标准是酶促反应的速度。 所以酶活力测定就是酶促反应速 度的测定 酶促反应的速度：在适宜条件 下，单位时间内底物的消耗或产物 的生成量。 活性测定 分离纯化 酶活力 反应初速度 测定方法 活力单位 实例 1 (1) (2) (3) (4) (5)