第二节：第二代测序原理 000八 DNA纳米球(DNA nanoball) d In-solution DNA nanoball generation (Complete Genomics (BGl)) Rolling circle amplifcation Circalar templates are amplifed to generated long Cleavage concatamers.called DNA nanoballk intermolecular Circular DNA nteractions keep the nanoballs cohesive and templates separate in solution are cleaved downstream of the adapter sequence Adapter ligation lterative ligation One set of adapters Three additional rounds of ligation. end of a DNA circularization and template.followed cleavage generate a Hybridization by template circular template with DNA nanobalis are four d由Jerent adapters immobllized on a patterned flow cell Nature Reviewsi Genetics DNA模板通过迭代的连接、环化、切割，形成一个带有4个接头 的环形模板。环形模板通过滚环扩增形成一条带有多个序列拷 贝的超长DNA,在溶液环境中会自然卷曲成纳米球结构，再将 DNA纳米球固定到patternd flow cell_上以用于后续测序 使用该种扩增方式的有华大基因的Complete Genomics
DNA纳米球（DNA nanoball） 第二节：第二代测序原理 7 • DNA模板通过迭代的连接、环化、切割，形成一个带有4个接头 的环形模板。环形模板通过滚环扩增形成一条带有多个序列拷 贝的超长DNA，在溶液环境中会自然卷曲成纳米球结构，再将 DNA纳米球固定到patternd flow cell上以用于后续测序 • 使用该种扩增方式的有华大基因的Complete Genomics
第二节：第二代测序原理 O0八基于连接的测序(Sequencing By Ligation,SBL) ·DNA模板通过迭代的连接、环化、 切割，形成一个带有4个接头的 环形模板。环形模板通过滚环 扩增形成一条带有多个序列拷 贝的超长DNA,在溶液环境中会 自然卷曲成纳米球结构，再将 DNA纳米球固定到patternd flow cel上以用于后续测序 使用该种扩增方式的有华大基 因的Complete Genomics 8
基于连接的测序（Sequencing By Ligation, SBL） 第二节：第二代测序原理 8 • DNA模板通过迭代的连接、环化、 切割，形成一个带有4个接头的 环形模板。环形模板通过滚环 扩增形成一条带有多个序列拷 贝的超长DNA，在溶液环境中会 自然卷曲成纳米球结构，再将 DNA纳米球固定到patternd flow cell上以用于后续测序 • 使用该种扩增方式的有华大基 因的Complete Genomics
第二节：第二代测序原理 个八基于连接的测序(Sequencing By Ligation,SBL) ·双碱基探针(SOLiD) 一共有4种颜色，对应 每种衡色可新编码的权氧核香而 4x4=16种碱基组合，每种 第2位碱某 榄板序列 颜色有四种碱基可能 ●●● 解码 服色空展 CG 9 TA TG TA AC A GA ·每个碱基被测定2次，通过 Gc CA cc C 可陆的双碱基 AG 解码从颜色序列还原出碱 次检贸 零分藏超一(AT(TGT行 cT 编丹纯个碱框的2个城招 被测定2次 ●● ATG、 解码后的序列 基序列 最初的序列 图143 SOLiDM Sequencer测序原理(Mardis,2008) 9
基于连接的测序（Sequencing By Ligation, SBL） 第二节：第二代测序原理 9 • 双碱基探针（SOLiD） • 一共有4种颜色，对应 4x4=16种碱基组合，每种 颜色有四种碱基可能 • 每个碱基被测定2次，通过 解码从颜色序列还原出碱 基序列
第二节：第二代测序原理 OOM以基于连接的测序(Sequencing By Ligation,SBL) 5SOD型反应底物 双碱基程针 2位 点学m实 塑码 扩 3 吸璃平极 前切位点 1白动并选提 1重复1-4起长合成链 环利 m币·网 链接第环123456子一（你个请环闲 通用测非引梅网)关 酸板序列 板重复可引物 2曼取图象 酸发 更龙 通测序物（一） 2可到的重新结合1图热解鼓去拿合成鼓 TA 1东机钟情加阳 7利用要写1物重复1-3 葡环2山于单碱核移纹 4原去发光某世 复解 0米 AT miR TA 重围新的月物，对-2，一J,年4 Pead position lelslullelslelul 湖事 用序 桥接星 连接环 0
基于连接的测序（Sequencing By Ligation, SBL） 第二节：第二代测序原理 1 0