第二节单克隆抗体 单克隆抗体是将抗体产生细胞与骨髓瘤 细胞融合,通过有限稀释法及克隆化使 杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而 生产的。由于这种抗体是针对一个抗原 决定簇的抗体,又是单一的B淋巴细胞克 隆产生的,因此称为单克隆抗体。它是 结构和特异性完全相同的高纯度抗体 制备的一般流程见下图
第二节 单克隆抗体 • 单克隆抗体是将抗体产生细胞与骨髓瘤 细胞融合，通过有限稀释法及克隆化使 杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而 生产的。由于这种抗体是针对一个抗原 决定簇的抗体，又是单一的B淋巴细胞克 隆产生的，因此称为单克隆抗体。它是 结构和特异性完全相同的高纯度抗体。 制备的一般流程见下图
抗原 淋巴细胞骨髓瘤细胞单克隆抗体和 多克隆抗体的 制备 融 脾 克隆1克隆2克隆3克隆4 B淋巴细胞 0000
单克隆抗体和 多克隆抗体的 制备 抗原 脾 B淋巴细胞 融合 融合 淋巴细胞 骨髓瘤细胞 克隆1 克隆2 克隆3 克隆4
第二节单克隆抗体 抗原与动物免疫 细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养 三、筛选阳性克隆与克隆化 四、杂交瘤细胞与抗体性状的鉴定 五、单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的纯化
第二节 单克隆抗体 • 一、抗原与动物免疫 • 二、细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养 • 三、筛选阳性克隆与克隆化 • 四、杂交瘤细胞与抗体性状的鉴定 • 五、单克隆抗体的大量制备 • 六、单克隆抗体的纯化
抗原与动物免疫 1)制备用于动物免疫的适当抗原。 化学合成抗原,如精制的地高辛 多数情况下抗原物质只能得到部分纯化,甚至 是极不纯的混合物,如部分纯化的干扰素。 通过克隆化选出最适当的单克隆抗体 在制备恶性肿瘤细胞表面抗原的单克隆抗体时, 凊况较复杂,需用整个肿瘤细胞做为免疫原, 经过筛选、克隆化,制备出仅存在于肿瘤细胞 而不存在于正常细胞上的表面标志分子上的单 克隆抗体
一、抗原与动物免疫 • （1）制备用于动物免疫的适当抗原。 • 化学合成抗原，如精制的地高辛。 • 多数情况下抗原物质只能得到部分纯化，甚至 是极不纯的混合物，如部分纯化的干扰素。 • 通过克隆化选出最适当的单克隆抗体。 • 在制备恶性肿瘤细胞表面抗原的单克隆抗体时， 情况较复杂，需用整个肿瘤细胞做为免疫原， 经过筛选、克隆化，制备出仅存在于肿瘤细胞 而不存在于正常细胞上的表面标志分子上的单 克隆抗体
抗原与动物免疫 2)稳定的杂交瘤的获得 因免疫动物品系和骨髓瘤细胞在种系发生上距离 越远,产生的杂交瘤越不稳定,故一般采用与骨 髓瘤供体同一品系的动物进行免疫。目前常用的 骨髓瘤细胞系多来自BALB/小鼠和Lou大鼠,因 此免疫动物也多采用相应的品系,最常用的也是 BALB/c小鼠 选择动物时应考虑到动物品系的免疫应答基因 (Ir)对抗原免疫应答的影响。不同品系的小鼠 与大鼠在对某类抗原的免疫应答上是不同的。书 中表4-1是骨髓瘤细胞系一览表,可以参考
一、抗原与动物免疫 • （2）稳定的杂交瘤的获得 • 因免疫动物品系和骨髓瘤细胞在种系发生上距离 越远，产生的杂交瘤越不稳定，故一般采用与骨 髓瘤供体同一品系的动物进行免疫。目前常用的 骨髓瘤细胞系多来自BALB/c小鼠和Lou大鼠，因 此免疫动物也多采用相应的品系，最常用的也是 BALB/c小鼠。 • 选择动物时应考虑到动物品系的免疫应答基因 （Ir）对抗原免疫应答的影响。不同品系的小鼠 与大鼠在对某类抗原的免疫应答上是不同的。书 中表4-1是骨髓瘤细胞系一览表，可以参考