(1).对W兔进行体外活基因治 疗证实确能明显地降低血浆胆固醇浓 度 (2).能满意地分离人体的肝细 胞 (3).制备出能表达人LDL受体的 逆转录病毒,并对其特征已弄清楚 (4).体外活基因治疗已在狒狒身 上获得成功,并做了急性毒性试验 2.家族性高胆固醇血症临床基 因治疗 1992年 Wilson等第一次应用低密 度脂蛋白受体(LDLR)基因治疗人类家 族性高胆固醇血症获得成功,开拓了人 类心血管疾病基因治疗的先河。 脂代谢过程中的任何一种关键酶、 载脂蛋白及其相应的受体基因异常,均 可以产生高脂血症,同时可并发高血压 或动脉粥样硬化( atherosclerosis, AS)。因此,用转基因的方法将正常载 脂蛋白或LDL受体或关键酶基因导入靶 细胞内,使体内细胞获得正常的基因以 代替失活的基因,补充正常的载脂蛋白 或受体和关键酶,降低血脂,可有效地 抑制高脂血症和AS。 1992年美国学者 Wilson及其同事 在成功地完成对WH( watanabe heritable hyperlipidemic)兔和狒狒 ( baboon)的LDL受体 eX vivo基因治 疗的临床前研究后,提出并获准了人的 家族性高胆固醇血症(FHC)LDL受体基 因治疗方案。该方案主要步骤如下:1 高效表达人的LDL受体cDNA重组腺病 毒载体的构建;2纯合子FHC患者的肝 细胞分离、原代培养和转染:3转染的 肝细胞表达LDL受体蛋白水平检测(受 转染的FHC肝细胞重组源性LDL受体蛋 白至少可达内源性的20倍):4转染的
(1). 对 WHHL 兔进行体外活基因治 疗证实确能明显地降低血浆胆固醇浓 度; (2). 能满意地分离人体的肝细 胞; (3). 制备出能表达人 LDL 受体的 逆转录病毒, 并对其特征已弄清楚; (4). 体外活基因治疗已在狒狒身 上获得成功, 并做了急性毒性试验。 2. 家族性高胆固醇血症临床基 因治疗 1992 年 Wilson 等第一次应用低密 度脂蛋白受体（LDLR）基因治疗人类家 族性高胆固醇血症获得成功，开拓了人 类心血管疾病基因治疗的先河。 脂代谢过程中的任何一种关键酶、 载脂蛋白及其相应的受体基因异常，均 可以产生高脂血症，同时可并发高血压 或动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）。因此，用转基因的方法将正常载 脂蛋白或 LDL 受体或关键酶基因导入靶 细胞内，使体内细胞获得正常的基因以 代替失活的基因，补充正常的载脂蛋白 或受体和关键酶，降低血脂，可有效地 抑制高脂血症和 AS。 1992 年美国学者 Wilson 及其同事 在成功地完成对 WHHL(watanable heritable hyperlipidemic)兔和狒狒 （baboon）的 LDL 受体 ex vivo 基因治 疗的临床前研究后，提出并获准了人的 家族性高胆固醇血症（FHC）LDL 受体基 因治疗方案。该方案主要步骤如下：1 高效表达人的 LDL 受体 cDNA 重组腺病 毒载体的构建；2 纯合子 FHC 患者的肝 细胞分离、原代培养和转染；3 转染的 肝细胞表达 LDL 受体蛋白水平检测（受 转染的 FHC 肝细胞重组源性 LDL 受体蛋 白至少可达内源性的 20 倍）；4 转染的
肝细胞直接回输到自体肝脏;5转染肝 细胞在体功能检测,治疗效果通过详尽 分析脂蛋白代谢的相应变化来评价以 及4个月后肝组织的活检对重组来源的 DNA和RNA的存在及活性进行鉴定;6 临床并发症的观察。1994年 Wilson等 首次报道了一位29岁纯合子FHC女性 患者接受LDL受体基因治疗获得成功 该患者接受治疗后的LDL/HDL比率由治 疗前的1013下降到58。肝细胞移植后 4个月肝组织活检仍可检测到移植的转 基因表达细胞。经过了18个月的治疗 期,症状一直得到稳定的改善。到目前 为止,全世界已有6位纯合子FHC患者 成功接受了LDL受体基因治疗。患者年 龄从7岁到41岁,所有病人治疗4个 月后活检肝细胞仍有转基因的表达,其 中有3位患者的LDL胆固醇水平出现明 显而持久的下降,体内LDL代谢增加 53%。 在人体上进行离体基因治疗的具 体方法是,在手术室将病人的肝叶切 除一小部分(约为总肝脏的10-15%) 并在下腔静脉放置导管。用胶原酶灌注 已切除的肝组织,使肝细胞分离。然后 将肝细胞放在平皿中培养2天,并与重 组逆转录病毒暴露12-16小时。洗脱病 毒,用胰蛋白酶分离肝细胞,最后将 肝细胞经导管输入病人体内,导管在 几天后拔出。应用这种方法,预计使肝 细胞重建LDL受体2-10%,疗效持续时 间至少6个月,无明显并发症。应该指 出的是,目前该方法还只能作为一种 辅助疗法,必需配有其他治疗(包括药 物治疗),并不排除随后应进行的肝移 基因疗法治疗遗传性疾病是很有 希望的,而纯合子家族性高胆固醇血 症是早期开展和应用基因疗法最好的 适用症之一。这是因为FH具有以下有 利因素 (1).已分离出正常的基因
肝细胞直接回输到自体肝脏；5 转染肝 细胞在体功能检测，治疗效果通过详尽 分析脂蛋白代谢的相应变化来评价以 及 4 个月后肝组织的活检对重组来源的 DNA 和 RNA 的存在及活性进行鉴定；6 临床并发症的观察。1994 年 Wilson 等 首次报道了一位 29 岁纯合子 FHC 女性 患者接受 LDL 受体基因治疗获得成功。 该患者接受治疗后的 LDL/HDL 比率由治 疗前的 1013 下降到 58。肝细胞移植后 4 个月肝组织活检仍可检测到移植的转 基因表达细胞。经过了 18 个月的治疗 期，症状一直得到稳定的改善。到目前 为止，全世界已有 6 位纯合子 FHC 患者 成功接受了 LDL 受体基因治疗。患者年 龄从 7 岁到 41 岁，所有病人治疗 4 个 月后活检肝细胞仍有转基因的表达，其 中有 3 位患者的 LDL 胆固醇水平出现明 显而持久的下降，体内 LDL 代谢增加 53%。 在人体上进行离体基因治疗的具 体方法是, 在手术室将病人的肝叶切 除一小部分(约为总肝脏的 10-15%), 并在下腔静脉放置导管。用胶原酶灌注 已切除的肝组织, 使肝细胞分离。然后 将肝细胞放在平皿中培养 2 天, 并与重 组逆转录病毒暴露 12-16 小时。洗脱病 毒, 用胰蛋白酶分离肝细胞, 最后将 肝细胞经导管输入病人体内, 导管在 几天后拔出。应用这种方法，预计使肝 细胞重建 LDL 受体 2-10%, 疗效持续时 间至少 6 个月, 无明显并发症。应该指 出的是, 目前该方法还只能作为一种 辅助疗法, 必需配有其他治疗(包括药 物治疗), 并不排除随后应进行的肝移 植。 基因疗法治疗遗传性疾病是很有 希望的, 而纯合子家族性高胆固醇血 症是早期开展和应用基因疗法最好的 适用症之一。这是因为 FH 具有以下有 利因素: (1). 已分离出正常的基因