未解决,因而无法满足生产的需要,其次是在培养过程中如何减少变异株的发生。更重要的是应降 低组培苗工厂化生产的成本,只有降低成本,才能更好的投产应用 总之,随着组织培养这一技术的发展及各种培养方法的广泛 应用,使这一技术在遗传育种、品种繁育等方面表现出了巨大的潜力,特别是生物工程和工厂化育 苗实施以后,它将以新兴产业的面目在技术革命中发挥重大作用 本章小结 (1)植物组织培养是指分离单个或多个细胞或植物体的一部 分,在人工配制的培养基上进行培养,使之长成一株完整植物体的过程 (2)按照外植体的不同,组织培养可分为植株培养、胚胎培养、 器官培养、细胞培养和原生质体培养5种类型 (3)组织培养具有:培养条件可以人为控制:生长周期短,繁殖率高;管理方便,利于工厂化生产的 突出特点,因而发展迅速 (4)組组织培养技术在农业生产上的应用主要体现于以下几个方面:快速繁殖优良苗木:获得脱毒苗 育种上应用:工厂化育 苗 复习思考题 (1)什么是广义的植物组织培养?什么是狭义的植物组织培 养 (2)什么是外植体"? (3)按照外植体的不同,植物组织培养可以分成几类?比较常用的是哪些? (4)植物组织培养有哪些特点? (5)你认为植物组织培养技术在当前的农业生产上有什么价 值?为什么? 第二章实验设备及培养条件 目的要求: (1)掌握组织培养实验室的设计; (2)掌握组织培养常用的实验仪器设备及其使用方法 (3)掌握调控组织培养的主要环境条件。 在进行植物组织培养工作之前,首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解,以便 因地制宜地利用现有房屋,或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂 化生产为目的,实验室规模太小,则会限制生产,影响效率。在设计组织培养实验室时,应按组织 培养程序来设计,避免某些环节倒排,引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进
未解决，因而无法满足生产的需要，其次是在培养过程中如何减少变异株的发生。更重要的是应降 低组培苗工厂化生产的成本，只有降低成本，才能更好的投产应用。 总之，随着组织培养这一技术的发展及各种培养方法的广泛 应用，使这一技术在遗传育种、品种繁育等方面表现出了巨大的潜力，特别是生物工程和工厂化育 苗实施以后，它将以新兴产业的面目在技术革命中发挥重大作用。 本章小结 (1)植物组织培养是指分离单个或多个细胞或植物体的一部 分，在人工配制的培养基上进行培养，使之长成一株完整植物体的过程。 (2)按照外植体的不同，组织培养可分为植株培养、胚胎培养、 器官培养、细胞培养和原生质体培养 5 种类型。 (3)组织培养具有：培养条件可以人为控制；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于工厂化生产的 突出特点，因而发展迅速。 (4)组织培养技术在农业生产上的应用主要体现于以下几个方面：快速繁殖优良苗木；获得脱毒苗； 育种上应用；工厂化育 苗。 复习思考题 (1)什么是广义的植物组织培养?什么是狭义的植物组织培 养? (2)什么是"外植体"? (3)按照外植体的不同，植物组织培养可以分成几类?比较常用的是哪些? (4)植物组织培养有哪些特点? (5)你认为植物组织培养技术在当前的农业生产上有什么价 值?为什么? 第二章 实验设备及培养条件 目的要求： (1)掌握组织培养实验室的设计； (2)掌握组织培养常用的实验仪器设备及其使用方法； (3)掌握调控组织培养的主要环境条件。 在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解，以便 因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂 化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产，影响效率。在设计组织培养实验室时，应按组织 培养程序来设计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进
行的。要做到无菌的条件,需要一定的设备、器材和用具,同时还需要人工控制温度、光照、湿度 等培养条件。 节实验室 一个标准的组织培养实验室应当包括:洗涤室、配置室、无菌室、培养室、观察室等。在实际中可 结合可行条件,合并一部分 、洗涤室( cleaning room) 洗涤室用于完成玻璃器皿等仪器的清洗、干燥和贮存。室内应配备大型水槽,最好是白瓷水槽。为 防止碰坏玻璃器皿,可铺垫橡胶。上下水道要畅通。备有塑料筐,用于运输培养器皿。备有干燥架, 用于放置干燥涮净的培养器皿。 、淮备室( epairing room) 准备室要求明亮、通风。在准备室内要完成培养基制备以及试管苗出瓶、清洗与整理工作。如果房 间较多,可将准备室分为洗涤室和配置室两部分。洗涤室专门负责试管苗出瓶与培养器皿的清洗工 作:配置室则负责培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌等工作。 为完成培养基的制备工作,淮备室还应配备以下仪器设备: (1)大型工作台其高度应方便配制工作。 (2)药品柜用于放置常用药品。 (3)普通冰箱主要用于贮存母液、各种易变质、易分解的化学药品以及植物材料等 (4)电子分析天平和托盘天平电子分析天平,用于称取大量元素、微量元素、维生素、激素等微量药 品精确度为0.0001g;托盘天平用于称取用量较大的糖和琼脂等,其精确度为0.1g。天平应放置 在干燥、不受震动的天平操作台上 (5)电蒸馏水器电蒸馏水器,采用硬质玻璃或金属制成。蒸馏水用于配制母液或培养基,配制培养基 可用自来水来代替,若实验要求严格的话,则须用蒸馏水 (6磁力搅拌器磁力搅拌器用于加速搅拌难溶的物质,如各种化学物质、琼脂粉等。磁力搅拌器还可 加热,使之更利于溶解。 η)恒温水浴锅恒温水浴锅用于难溶药品的溶解、琼脂的溶化等 (8)电炉或电饭锅电炉的功率为1500或2000W,并配有铝锅。电饭锅的功率1000W,用于琼脂的溶 (9)酸度计组织培养中培养基pH值的准确度是十分重要的,应当使用酸度计,若无酸度计,也可使 用pH试纸进行粗测。 首次使用酸度计前,应用标准液调节定位,然后固定。测量pH值时,待测液必须充分搅拌均匀 如果培养基温度过高,测量时要调整pH值计上的温度扭使之和培养基温度相当。注意保护好玻璃 电极,用后电极应用蒸馏水冲洗净,盖上电极帽
行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度 等培养条件。 第一节 实验室 一个标准的组织培养实验室应当包括：洗涤室、配置室、无菌室、培养室、观察室等。在实际中可 结合可行条件，合并一部分。 一、洗涤室(cleaning room) 洗涤室用于完成玻璃器皿等仪器的清洗、干燥和贮存。室内应配备大型水槽，最好是白瓷水槽。为 防止碰坏玻璃器皿，可铺垫橡胶。上下水道要畅通。备有塑料筐，用于运输培养器皿。备有干燥架， 用于放置干燥涮净的培养器皿。 二、准备室(repairing room) 准备室要求明亮、通风。在准备室内要完成培养基制备以及试管苗出瓶、清洗与整理工作。如果房 间较多，可将准备室分为洗涤室和配置室两部分。洗涤室专门负责试管苗出瓶与培养器皿的清洗工 作；配置室则负责培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌等工作。 为完成培养基的制备工作，准备室还应配备以下仪器设备： (1)大型工作台 其高度应方便配制工作。 (2)药品柜 用于放置常用药品。 (3)普通冰箱 主要用于贮存母液、各种易变质、易分解的化学药品以及植物材料等。 (4)电子分析天平和托盘天平 电子分析天平，用于称取大量元素、微量元素、维生素、激素等微量药 品精确度为 0．0001g；托盘天平用于称取用量较大的糖和琼脂等，其精确度为 0．1g。天平应放置 在干燥、不受震动的天平操作台上。 (5)电蒸馏水器 电蒸馏水器，采用硬质玻璃或金属制成。蒸馏水用于配制母液或培养基，配制培养基 可用自来水来代替，若实验要求严格的话，则须用蒸馏水。 (6)磁力搅拌器 磁力搅拌器用于加速搅拌难溶的物质，如各种化学物质、琼脂粉等。磁力搅拌器还可 加热，使之更利于溶解。 (7)恒温水浴锅 恒温水浴锅用于难溶药品的溶解、琼脂的溶化等。 (8)电炉或电饭锅 电炉的功率为 1500 或 2000W，并配有铝锅。电饭锅的功率 1000W，用于琼脂的溶 化。 (9)酸度计 组织培养中培养基 pH 值的准确度是十分重要的，应当使用酸度计，若无酸度计，也可使 用 pH 试纸进行粗测。 首次使用酸度计前，应用标准液调节定位，然后固定。测量 pH 值时，待测液必须充分搅拌均匀。 如果培养基温度过高，测量时要调整 pH 值计上的温度扭使之和培养基温度相当。注意保护好玻璃 电极，用后电极应用蒸馏水冲洗净，盖上电极帽
(10培养基分装设备小型操作时可采用烧杯直接分装。大型实验室可采用医用”下口杯"作为分装工 具,在”下口杯"的下口管上套一段软胶管,加一弹簧止水夹,使用时非常合适。更大规模或要求更 高效率时,可考虑采用液体自动定量灌注设备 (11)高压灭菌锅用于进行培养基和器械用具的灭菌。小规模实验室可选用小型手提式高压灭菌锅。 如果是连续的大规模生产,应选用大型立式的或卧式的高压灭菌锅。通常以电作能源。 (12)恒温培养箱用于植物材料的培养,其内有温度感受器,控制箱内温度到所调指标。生化培养箱 还配有光照装置。 (13)烘箱用于干燥洗净的玻璃器皿,也可用于干热灭菌和 测定干物重。用于干燥需保持80-100℃:进行干热灭菌需保持 150℃,达1-3h:若测定干物重,则温度应控制在80℃烘干至完全干燥为止。 三、接种室( transfering room) 接种室是进行植物材料的分离接种及培养物转移的一个重要操作室。其无菌条件的好坏对组织培养 成功与否起重要作用 在工作方便的前提下,接种室宜小不宜大,一般7-8m2,要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑, 易于清洁和消毒。配置拉动门,以减少开关门时的空气扰动 接种室要求干爽安静,清洁明亮。在适当位置吊装1-2盏紫外线灭菌灯,用以照射灭菌。最好安装 小型空调,使室温可控,这样可使门窗紧闭,减少与外界空气对流 接种室应设有缓冲间,面积2m2为宜。进入无菌操作室前在此更衣换鞋,以减少进出时带人接种室 杂菌。缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯,用以照射灭菌, 接种室的主要设备及用具有 (1)接种箱在投资少的情况下,可以用接种箱来代替超净台。接种箱依靠密闭、药剂熏蒸和紫外灯照 射来保证内部空间无菌。但操作活动受限制,淮备时间长,工作效率低。 (2)超净台 cleaning ta ble优点是操作方便自如,比较舒适,工作效率高,准备时间短。开机10分钟 即可操作,可进行长时间使用。在工厂化生产中,接种工作量很大,需要经常长久地工作时,超净 台是很理想的设备。超净台功率在145-260W左右,它装有小型鼓风机,使空气穿过一个前置过滤 器,在这里把大部分空气尘埃先过滤掉,然后再使空气穿过一个细致的高效过滤器,它除去了大于 0.3um的尘埃、细菌和真菌孢子等,最后以较洁净的气流吹到工作台面。超净空气的流速为每分钟 24-30m,这已足够防止附近空气袭扰而引起的污染,这样的流速也不会妨碍采用酒精灯对器械等的 灼烧消毒。在这样的无菌条件下操作,就可以保证无菌材料在转移接种过程中不受污染。超净台分 水平式和垂直式二种型号 (3)解剖镜种类较多,用于分离微茎尖可采用双筒实体解剖镜。双筒解剖镜在分离茎尖等较小组织时, 便于观察、操作,通常放大5-80倍。放大40倍以上操作需要有相当熟练的技术和较好的工具。为 进行操作,要有照明装置。解剖镜上带有照相装置,根据需要随时对所需材料进行摄影记录
(10)培养基分装设备 小型操作时可采用烧杯直接分装。大型实验室可采用医用"下口杯"作为分装工 具，在"下口杯"的下口管上套一段软胶管，加一弹簧止水夹，使用时非常合适。更大规模或要求更 高效率时，可考虑采用液体自动定量灌注设备。 (11)高压灭菌锅 用于进行培养基和器械用具的灭菌。小规模实验室可选用小型手提式高压灭菌锅。 如果是连续的大规模生产，应选用大型立式的或卧式的高压灭菌锅。通常以电作能源。 (12)恒温培养箱 用于植物材料的培养，其内有温度感受器，控制箱内温度到所调指标。生化培养箱 还配有光照装置。 (13)烘箱 用于干燥洗净的玻璃器皿，也可用于干热灭菌和 测定干物重。用于干燥需保持 80-100℃；进行干热灭菌需保持 150℃，达 1-3h；若测定干物重，则温度应控制在 80℃烘干至完全干燥为止。 三、接种室(transfering room) 接种室是进行植物材料的分离接种及培养物转移的一个重要操作室。其无菌条件的好坏对组织培养 成功与否起重要作用。 在工作方便的前提下，接种室宜小不宜大，一般 7-8m2，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑， 易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。 接种室要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装 1-2 盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装 一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。 接种室应设有缓冲间，面积 2m2 为宜。进入无菌操作室前在此更衣换鞋，以减少进出时带人接种室 杂菌。缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。 接种室的主要设备及用具有： (1)接种箱 在投资少的情况下，可以用接种箱来代替超净台。接种箱依靠密闭、药剂熏蒸和紫外灯照 射来保证内部空间无菌。但操作活动受限制，准备时间长，工作效率低。 (2)超净台 cleaning table 优点是操作方便自如，比较舒适，工作效率高，准备时间短。开机 10 分钟 即可操作，可进行长时间使用。在工厂化生产中，接种工作量很大，需要经常长久地工作时，超净 台是很理想的设备。超净台功率在 145-260W 左右，它装有小型鼓风机，使空气穿过一个前置过滤 器，在这里把大部分空气尘埃先过滤掉，然后再使空气穿过一个细致的高效过滤器，它除去了大于 0．3um 的尘埃、细菌和真菌孢子等，最后以较洁净的气流吹到工作台面。超净空气的流速为每分钟 24-30m，这已足够防止附近空气袭扰而引起的污染，这样的流速也不会妨碍采用酒精灯对器械等的 灼烧消毒。在这样的无菌条件下操作，就可以保证无菌材料在转移接种过程中不受污染。超净台分 水平式和垂直式二种型号。 (3)解剖镜 种类较多，用于分离微茎尖可采用双筒实体解剖镜。双筒解剖镜在分离茎尖等较小组织时， 便于观察、操作，通常放大 5-80 倍。放大 40 倍以上操作需要有相当熟练的技术和较好的工具。为 进行操作，要有照明装置。解剖镜上带有照相装置，根据需要随时对所需材料进行摄影记录
(4)无菌操作用的器具按单人超净台上用量有:酒精灯1个:20-25cm长的医用镊子1把:4号解剖 刀1把,解剖刀片若干:15cm医用剪1把:250mI广口瓶1只,内放酒精,用于浸泡镊子、 刀、剪等:用于架放灼烧过的刀、镊子的小架。 四、培养室( culturing room) 培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其 他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。高度比培养架略高为宜,周围墙壁要 求有绝热防火的性能 培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成,一般设5层,最低一层离地高约cm,其 他每层间隔30cm左右,培养架即高1.7m左右。培养架长度都是根据日光灯的长度而设计 如采用40W日光灯,则长1.3m,30W的长lm,宽度一般为60cm 培养室最重要的因子是温度,一般保持在20-27℃左右,具备产热装置,并安装窗式或立式空调机。 由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度,最好不同种类有不同的培养室 室内湿度也要求恒定,相对湿度以保持在70%-80%为好,可安装加湿 控制日光照时间可安装定时开关钟,一般需要每天光照10-16h也有的需要连续照明。短日照植物需 要短日照条件,长日照植物需要长日照条件。现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主 要能源,这样不但可以节省能源,而且组培苗接受太阳光生长良好,驯化易成活。在阴雨天可用灯 光作补充 第二节设备和器材 、玻璃器皿 在组织培养中配制培养基和进行培养需大量的玻璃器皿。要求由碱性溶解度小的硬质玻璃制成,以 保证长期贮存药品及培养的效果:培养用的还要求透光度好,能耐高压高温,能方便放人培养基和 培养材料的器皿,根据培养的目的和要求,可以采用不同种类、规格的玻璃器皿。其中以试管、 角瓶、培养皿等使用较多。 最常使用的是三角瓶,规格有 lOOmI,250ml,500ml等,一般使用 lOomI三角瓶,无论静止或振荡 培养皆适用。其培养面积大,利于组织生长,受光也比试管好。由于瓶口较小,亦不易污染。 培养皿常用9、12cm直径等规格,要求上、下能密切吻合。这在游离细胞、原生质体、花粉等的静 置培养、看护培养、无菌种子的发芽、植物材料的分离等都需采用。 试管常用18mmⅪ8omm或20mmⅹ20omm规格。可用于培养较高的试管苗,另外也不易污染。 培养器皿还可就地取材,采用一些代用品。工厂化生产可采用广口的200ml罐头瓶,加盖半透明的 塑料盖,由于瓶口大,所以大量繁殖时操作方便、工作效率高,也减少了培养材料的损伤。但缺点 是易引起污染 目前,培养容器和制备培养基所需的玻璃器皿逐渐被塑料器皿所代替。塑料容器具有质轻、透明
(4)无菌操作用的器具 按单人超净台上用量有：酒精灯 1 个；20-25cm 长的医用镊子 1 把；4 号解剖 刀 1 把，解剖刀片若干；15cm 医用剪 1 把；250ml 广口瓶 1 只，内放酒精，用于浸泡镊子、 刀、剪等；用于架放灼烧过的刀、镊子的小架。 四、培养室(culturing room) 培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其 他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。高度比培养架略高为宜，周围墙壁要 求有绝热防火的性能。 培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成，一般 设 5 层，最低一层离地高约 lOcm，其 他每层间隔 30cm 左右，培养架即高 1．7m 左右。培养架长度都是根据日光灯的长度而设计， 如采用 40W 日光灯，则长 1．3m，30W 的长 lm，宽度一般为 60cm。 培养室最重要的因子是温度，一般保持在 20-27℃左右，具备产热装置，并安装窗式或立式空调机。 由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有不同的培养室。 室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在 70％-80％为好，可安装加湿器。 控制日光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天光照 10-16h 也有的需要连续照明。短日照植物需 要短日照条件，长日照 植物需要长日照条件。现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主 要能源，这样不但可以节省能源，而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。在阴雨天可用灯 光作补充。 第二节 设备和器材 一、 玻璃器皿 在组织培养中配制培养基和进行培养需大量的玻璃器皿。要求由碱性溶解度小的硬质玻璃制成，以 保证长期贮存药品及培养的效果；培养用的还要求透光度好，能耐高压高温，能方便放人培养基和 培养材料的器皿，根据培养的目的和要求，可以采用不同种类、规格的玻璃器皿。其中以试管、三 角瓶、培养皿等使用较多。 最常使用的是三角瓶，规格有 lOOm l，250ml，500ml 等，一般使用 lOOm l 三角瓶，无论静止或振荡 培养皆适用。其培养面积大，利于组织生长，受光也比试管好。由于瓶口较小，亦不易污染。 培养皿常用 9、12cm 直径等规格，要求上、下能密切吻合。这在游离细胞、原生质体、花粉等的静 置培养、看护培养、无菌种子的发芽、植物材料的分离等都需采用。 试管常用 18mmXl80mm 或 20mmX200mm 规格。可用于培养较高的试管苗，另外也不易污染。 培养器皿还可就地取材，采用一些代用品。工厂化生产可采用广口的 200ml 罐头瓶，加盖半透明的 塑料盖，由于瓶口大，所以大量繁殖时操作方便、工作效率高，也减少了培养材料的损伤。但缺点 是易引起污染。 目前，培养容器和制备培养基所需的玻璃器皿逐渐被塑料器皿所代替。塑料容器具有质轻、透明
不易破碎、成本低等优点,如培养容器多为平底方盒形,可提高培养空间利用率的植株数,并能 层层地叠摞起来,从而节约空间。这类塑料制品多是采用聚丙烯材料制成,能耐高温,可进行高压 灭菌。有些产品为一次性消耗品,不但可节省洗涤人工,还可节省时间,提高效率。一次性塑料容 器或带螺丝帽的玻璃瓶,无须另外配盖,使用时比较方便。 瓶口封塞可用多种方法,要具有一定的通气性和密闭性,以防止培养基干燥和杂菌污染。以前封口 常用棉塞。但这种封口办法夏季极易污染,且不易保持培养基的湿度。现在多采用聚丙烯塑料薄膜 作为封口,以线绳结扎或橡皮圈箍扎。为了增加通气性,可在里面衬一层硫酸纸或牛皮纸。这样经 济方便,且通气好。也可采用专用的封口膜。 在组织培养中配制培养基,贮藏母液,材料的消毒等需要各种化学实验用的玻璃器皿,包括100m 250ml、500mi、1000ml烧杯:Ioml、loOm、1000ml量筒: lOOmI、1000ml试剂瓶(棕色)等等。 二、器械用具 1.镊子类( (forceps 常应用医疗上的镊子。根据操作需要有各种类型,若用 lOOm I的三角瓶作为培养瓶,可用20em长 的镊子。镊子过短.容易使手接触瓶口,造成污染。镊子太长,使用起来不灵活。如在分离茎尖幼 叶时,则用钟表镊子。 2.剪刀类( scIssors) 可采用医疗五官科用的中型剪刀。主要用于切断茎段、叶片等。也可以用弯形剪刀,由于其头部弯 曲,可以深入到瓶口中进行剪切。 3.解剖刀 切割较小材料和分离茎尖分生组织时,可用解剖刀。刀片要经常调换,使之保持锋利状态,否则切 割时会造成挤压,引起周围细胞组织大量死亡,影响培养效果。 4.解剖针 解剖针可深入到培养瓶中,转移细胞或愈伤组织。也可用于分离微茎尖的幼叶,可以自制。 第三节培养条件 在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件,培养基组成、pH值、渗透压等各种化学环境 条件都会影响组织培养育苗的生长和发育。 、温度( temperature) 因为温度是植物组织培养中的重要因素,所以植物组织培养在最适宜的温度下生长分化才能表现良 好,大多数植物组织培养都是在23-27、之间进行,一般采用25土2℃。低于15t时培养,植物组 织会表现生长停止,高于35、时对植物生长不利。但是,不同植物培养的适温不同。百合的最适温 度是20℃、月季是25- 27℃番茄是28℃。温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度,也影响其分化增殖以及器官建成等发
不易破碎、成本低等优点，如培养容器多为平底方盒形，可提高培养空间利用率的植株数，并能一 层层地叠摞起来，从而节约空间。这类塑料制品多是采用聚丙烯材料制成，能耐高温，可进行高压 灭菌。有些产品为一次性消耗品，不但可节省洗涤人工，还可节省时间，提高效率。一次性塑料容 器或带螺丝帽的玻璃瓶，无须另外配盖，使用时比较方便。 瓶口封塞可用多种方法，要具有一定的通气性和密闭性，以防止培养基干燥和杂菌污染。以前封口 常用棉塞。但这种封口办法夏季极易污染，且不易保持培养基的湿度。现在多采用聚丙烯塑料薄膜 作为封口，以线绳结扎或橡皮圈箍扎。为了增加通气性，可在里面衬一层硫酸纸或牛皮纸。这样经 济方便，且通气好。也可采用专用的封口膜。 在组织培养中配制培养基，贮藏母液，材料的消毒等需要各种化学实验用的玻璃器皿，包括 100ml、 250ml、500mi、1000ml 烧杯；lOml、lOOml、1000ml 量筒；lOOml、1000ml 试剂瓶(棕色)等等。 二、器械用具 1．镊子类(forceps) 常应用医疗上的镊子。根据操作需要有各种类型，若用 lOOm l 的三角瓶作为培养瓶，可用 20em 长 的镊子。镊子过短．容易使手接触瓶口，造成污染。镊子太长，使用起来不灵活。如在分离茎尖幼 叶时，则用钟表镊子。 2．剪刀类(scissors) 可采用医疗五官科用的中型剪刀。主要用于切断茎段、叶片等。也可以用弯形剪刀，由于其头部弯 曲，可以深入到瓶口中进行剪切。 3．解剖刀 切割较小材料和分离茎尖分生组织时，可用解剖刀。刀片要经常调换，使之保持锋利状态，否则切 割时会造成挤压，引起周围细胞组织大量死亡，影响培养效果。 4．解剖针 解剖针可深入到培养瓶中，转移细胞或愈伤组织。也可用于分离微茎尖的幼叶，可以自制。 第三节 培养条件 在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件，培养基组成、pH 值、渗透压等各种化学环境 条件都会影响组织培养育苗的生长和发育。 ． 一、温度(temperature) 因为温度是植物组织培养中的重要因素，所以植物组织培养在最适宜的温度下生长分化才能表现良 好，大多数植物组织培养 都是在 23-27、之间进行，一般采用 25 土 2℃。低于 15t 时培养，植物组 织会表现生长停止，高于 35、时对植物生长不利。但是，不同植物培养的适温不同。百合的最适温 度是 20℃、月季是 25- 27℃番茄是 28℃。温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度,也影响其分化增殖以及器官建成等发