为什么CT值α[DNA]oN = Nox (1+e)rN:产物分子数:No:起始分子数e:扩增效率:n:循环次数PCR理论方程只在指数期成立线性期Ig [DNA]指数期y=x(1+e)循环数
PCR理论方程只在指数期成立 线性期 lg [DNA] y = x(1+e)n 指数期 为什么C T值 [DNA]0 ? N = N0x (1+e)n N:产物分子数;N0:起始分子数 e:扩增效率; n:循环次数 循 环 数
为什么C-值α[DNAl。?R,= Rβ+ X,(1+ e)"R,第n次PCR循环时的荧光信号强度(R)等于背景信号强度(R)加上每个分子的荧光强度(即单位荧光强度,Rs)与分子数目的乘积。设n=CT,则:Rcr= Rg+ Xo(1+ e)CT R,Ig (RcT -Rp) = Ig X, + C- lg (1+ e) + Ig R,C Ig (1+ e) = - Ig Xo + Ig (RcT -Rp) -IgR,loglog(RRβ)-log Rslog(1+Ex)log(1 + Ex)即 CT= - k Ig Xo+ b(线性方程)
为什么CT值 [DNA]0 ? Rn= RB+ X0 (1+ e)n Rs 第n次PCR循环时的荧光信号强度(Rn )等于背景信号强度(RB)加上每个 分子的荧光强度(即单位荧光强度,RS )与分子数目的乘积。 RCT= RB+ X0 (1+ e)CT Rs lg (RCT -RB ) = lg X0 + CT lg (1+ e) + lg Rs CT lg (1+ e) = - lg X0 + lg (RCT -RB ) –lgRs 设n=CT,则: log log( ) log X R R - R O T B S C T = - + log( 1 + E ) log( 1 + E ) X X 即 CT = - k lg X0+ b(线性方程)
基线→阈值→Ct值→[DNA]标准曲线:C-值对[DNA]o作图26.0C.值C_= - k lgX,+ b24.023.01000.0Ig[起始DNA]
CT值 CT = - k lgX0+ b lg [起始DNA] 标准曲线:CT值对[DNA]0作图 基线 阈值 Ct值 [DNA]0
Real Time PCR的检测方法SYBRGreenl荧光染料嵌合法荧光探针法CyclingTaqManMolecularetc.ProbeProbeBeacon16
TaqMan Probe Cycling Probe Molecular Beacon etc. SYBR Green I 荧光染料嵌合法 荧光探针法 Real Time PCR的检测方法 16
荧光染料嵌合法(SYBRGreenI)SYBRGreenI:是一种能结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。SYBRGreenI
荧光染料嵌合法(SYBR Green I) SYBR Green I:是一种能结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的 具有绿色激发波长的染料。 SYBR Green I 17