第三章核酸 核酸核酸是生物遗传信息的载体,分脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类,所有的细胞 都同时含有这两类核酸。DNA主要集中在细胞核内,占细胞干重的5-~15%,但线粒体、叶绿体中也有 少量DNA。RNA主要分布于细胞质中。但是,对于病毒来说,要么只含DNA,要么只含RNA。所以 可按照所含核酸的类型,将病毒分为DNA病毒与RNA病毒两大类 核酸的生物功能核酸的生物功能主要是遗传的物质基础,某些小分子核酸具有酶的功能。 第一节核苷酸 核酸是一种多聚核苷酸,它的基本结构单位是核苷酸。核苷酸又由碱基(嘌呤碱与嘧啶碱)、戊糖和 磷酸组成。 核酸中的戊糖有两类:D-核糖和D-2-脱氧核糖。根据核酸中所含戊糖的种类不同,可将核酸分为两 大类:核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)。两类核酸的基本化学组成见表3-1 表3-1两类核酸的基本化学组成 基本化学组成 DNA RNA 腺嘌呤 腺嘌呤 嘌呤碱 嘧啶碱 胸腺嘧啶 尿嘧啶 戊糖 D-2-脱氧核糖 D-核糖 酸 磷酸 磷酸 核苷酸的结构 (一)碱基 核酸中的碱基分两类:嘧啶碱和嘌呤碱 Ⅰ、嘧啶碱嘧啶碱是母体化合物嘧啶的衍生物。核酸中常见的嘧啶碱有三类:胞嘧啶、尿嘧啶及 胸腺嘧啶。其中DNA与RNA两类核酸都含有胞嘧啶,胸腺嘧啶则只含于DNA中,但某些tRNA中也 发现有极少量的胸腺嘧啶核糖核苷酸,尿嘧啶则只含于RNA中。植物组织的DNA中还有相当数量的 5-甲基胞嘧啶。一些大肠杆菌噬菌体核酸中,不含胞嘧啶,而由5-羟甲基胞嘧啶所代替
59 第三章 核 酸 核酸 核酸是生物遗传信息的载体，分脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类，所有的细胞 都同时含有这两类核酸。DNA 主要集中在细胞核内，占细胞干重的 5~15%，但线粒体、叶绿体中也有 少量 DNA。RNA 主要分布于细胞质中。但是，对于病毒来说，要么只含 DNA，要么只含 RNA。所以 可按照所含核酸的类型，将病毒分为 DNA 病毒与 RNA 病毒两大类。 核酸的生物功能 核酸的生物功能主要是遗传的物质基础，某些小分子核酸具有酶的功能。 第一节 核 苷 酸 核酸是一种多聚核苷酸，它的基本结构单位是核苷酸。核苷酸又由碱基(嘌呤碱与嘧啶碱)、戊糖和 磷酸组成。 核酸中的戊糖有两类：D-核糖和 D-2-脱氧核糖。根据核酸中所含戊糖的种类不同，可将核酸分为两 大类：核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)。两类核酸的基本化学组成见表 3-1。 表 3-1 两类核酸的基本化学组成 基本化学组成 DNA RNA 嘌呤碱 腺嘌呤 鸟嘌呤 腺嘌呤 鸟嘌呤 嘧啶碱 胞嘧啶 胸腺嘧啶 胞嘧啶 尿嘧啶 戊 糖 D-2-脱氧核糖 D-核糖 酸 磷 酸 磷 酸 一、核苷酸的结构 （一）碱基 核酸中的碱基分两类：嘧啶碱和嘌呤碱。 1、嘧啶碱 嘧啶碱是母体化合物嘧啶的衍生物。核酸中常见的嘧啶碱有三类：胞嘧啶、尿嘧啶及 胸腺嘧啶。其中 DNA 与 RNA 两类核酸都含有胞嘧啶，胸腺嘧啶则只含于 DNA 中，但某些 tRNA 中也 发现有极少量的胸腺嘧啶核糖核苷酸，尿嘧啶则只含于 RNA 中。植物组织的 DNA 中还有相当数量的 5-甲基胞嘧啶。一些大肠杆菌噬菌体核酸中，不含胞嘧啶，而由 5-羟甲基胞嘧啶所代替
嘧啶 胞嘧啶 尿嘧啶 NH2 NH? CH,OH 胸腺嘧啶 甲基胞嘧啶 5-羟甲基胞嘧啶 2、嘌呤碱核酸中常见的嘌呤碱有两类:腺嘌呤及鸟嘌呤。嘌呤碱是由母体化合物嘌呤衍生而来 NE HN 嘌呤 腺嘌呤 鸟嘌呤 天然存在的重要嘌呤碱还有次黄嘌呤、黄嘌呤、尿酸、荼叶碱、可可碱、咖啡碱。次黄嘌呤、尿酸 是嘌呤核苷酸代谢的产物。茶叶碱、可可碱及咖啡碱分别含于荼叶、可可及咖啡中,它们都是黄嘌呤的 甲基化衍生物,都有增强心脏活动的功能,其生物活性依甲基化程度而提高。 这些嘌呤类物质的结构如下 次黄嘌呤 黄嘌呤 CH3 H3C CH 茶叶碱 可可碱 咖啡碱 此外,一些植物激素,如玉米素(N-异戊烯腺嘌呤)、激动素(N-呋喃甲基腺嘌呤)等也是嘌呤类的衍 生物。 3、稀有碱基除了表3-1中所列五类基本的碱基外,核酸中还有一些含量甚少的碱基,统称为稀 有碱基。稀有碱基的种类极多,大多数都是甲基化碱基。大分子核酸中的碱基甲基化的过程发生于核酸 大分子生物合成以后,是生物细胞识别自体核酸与外源核酸的一种标识,具有抗内源核酸酶水解的作用, 它对核酸的生物学功能具有极其重要的意义。核酸中甲基化碱基的含量一般不超过碱基总量的5%。但
N N N N H NH2 O HN N H O O HN N H O O CH3 N N H O CH3 NH2 N N H O CH2OH NH2 6 1 2 3 4 5 5-羟甲基胞嘧啶 嘧啶 胞嘧啶 尿嘧啶 胸腺嘧啶 5-甲基胞嘧啶 2、嘌呤碱 核酸中常见的嘌呤碱有两类：腺嘌呤及鸟嘌呤。嘌呤碱是由母体化合物嘌呤衍生而来 的。 N N N H N NH2 H2N HN N N H N N N N H N 8 1 2 3 4 5 6 7 9 嘌呤 腺嘌呤 鸟嘌呤 O 天然存在的重要嘌呤碱还有次黄嘌呤、黄嘌呤、尿酸、茶叶碱、可可碱、咖啡碱。次黄嘌呤、尿酸 是嘌呤核苷酸代谢的产物。茶叶碱、可可碱及咖啡碱分别含于茶叶、可可及咖啡中，它们都是黄嘌呤的 甲基化衍生物，都有增强心脏活动的功能，其生物活性依甲基化程度而提高。 这些嘌呤类物质的结构如下： HN N N H N 次黄嘌呤 O HN N H N H N 黄嘌呤 O O HN N H N H NH 尿 酸 O O O N N N H N 茶叶碱 O O CH3 H3C HN N N N 可可碱 O O CH3 CH3 N N N N 咖啡碱 O CH3 H3C CH3 O 此外，一些植物激素，如玉米素(N-异戊烯腺嘌呤)、激动素(N-呋喃甲基腺嘌呤)等也是嘌呤类的衍 生物。 3、稀有碱基 除了表 3-1 中所列五类基本的碱基外，核酸中还有一些含量甚少的碱基，统称为稀 有碱基。稀有碱基的种类极多，大多数都是甲基化碱基。大分子核酸中的碱基甲基化的过程发生于核酸 大分子生物合成以后，是生物细胞识别自体核酸与外源核酸的一种标识，具有抗内源核酸酶水解的作用， 它对核酸的生物学功能具有极其重要的意义。核酸中甲基化碱基的含量一般不超过碱基总量的 5%。但 60
tRNA中甲基化碱基可高达10%。 (二)核苷 核苷是一种糖苷,由戊糖和碱基缩合而成。糖与碱基之间以糖苷键相连接。 核苷中的D-核糖及D-2-脱氧核糖均为呋喃型环状结构。糖环中的C1是不对称原子,所以有α-及β-两 种构型。但核酸分子中的糖苷键均为β-糖苷键 RNA中含有少量假尿嘧啶核苷(用符号ν表示),它的结构很特殊,它的核糖不是与尿嘧啶的N相 连接,而是与嘧啶环的Cs相连接 (三)核苷酸 核苷中的戊糖羟基被磷酸酯化形成核苷酸。 NH, H? O—P-0—cH2O HOCH2 OHOH O-PEO 5'-腺嘌呤核苷酸 3'-胞嘧啶脱氧核苷酸 AMP -d CMP) 核糖核苷的糖环上有三个自由羟基,能形成三种不同的核苷酸:2′-核糖核苷酸,3′-核糖核苷酸及 5′-核糖核苷酸*。脱氧核苷的糖环上有二个自由羟基,所以只能形成两种核苷酸。生物体内游离存在的 多是5′-核苷酸。用碱水解RNA时可得到2′-及3′-核糖核苷酸的混合物。 常见的核苷酸及其缩写符号如表3-2 表3-2常见的核苷酸 核糖核苷酸 脱氧核糖核苷酸 腺嘌呤 腺嘌呤核苷酸(AMP) 腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP) 鸟嘌呤 鸟嘌呤核苷酸(GMP) 鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP) 胞嘧呤 胞嘧啶核苷酸(CMP) 胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP) 尿嘧啶 尿嘧啶核苷酸(UMP) 胸腺嘧啶 胸腺嘧啶脱氧苷酸(dIMP) (四)多磷酸核苷酸 细胞内还有一些游离存在的多磷酸核苷酸,它们都具有重要的生理功能。 5′二磷酸核苷酸(5-NDP及5′-三磷酸核苷酸(5′NTP)**。细胞内的5′-NP是核苷的焦磷酸酯 5′-NTP是核苷的三磷酸酯。最常见的是腺二磷(5-ADP),腺三磷(5′-ATP)。腺三磷的结构如下左图 ·在命名上,将糖环碳原子的标号加“”、碱基的原子的标号不加“·”以示区别。 *5NDP、5NTP中的字母N代表四种碱基中的任何一种
tRNA 中甲基化碱基可高达 10%。 （二）核苷 核苷是一种糖苷，由戊糖和碱基缩合而成。糖与碱基之间以糖苷键相连接。 核苷中的D-核糖及D-2-脱氧核糖均为呋喃型环状结构。糖环中的C 1是不对称原子，所以有α-及β-两 种构型。但核酸分子中的糖苷键均为β-糖苷键。 tRNA中含有少量假尿嘧啶核苷(用符号ψ表示)，它的结构很特殊，它的核糖不是与尿嘧啶的N 1相 连接，而是与嘧啶环的C 5相连接。 （三）核苷酸 核苷中的戊糖羟基被磷酸酯化形成核苷酸。 N N N N NH2 O OH OH H H H H HOCH2 O H H H H H N N NH2 O O P O－ 9 5'-腺嘌呤核苷酸 (AMP) 3'-胞嘧啶脱氧核苷酸 (3'-dCMP) O P C O H2 O O－ O O 1 核糖核苷的糖环上有三个自由羟基，能形成三种不同的核苷酸：2′-核糖核苷酸，3′-核糖核苷酸及 5′-核糖核苷酸*。脱氧核苷的糖环上有二个自由羟基，所以只能形成两种核苷酸。生物体内游离存在的 多是 5′-核苷酸。用碱水解 RNA 时可得到 2′-及 3′-核糖核苷酸的混合物。 常见的核苷酸及其缩写符号如表 3-2。 表 3-2 常见的核苷酸 碱 基 核糖核苷酸 脱氧核糖核苷酸 腺嘌呤 鸟嘌呤 胞嘧呤 尿嘧啶 胸腺嘧啶 腺嘌呤核苷酸(AMP) 鸟嘌呤核苷酸(GMP) 胞嘧啶核苷酸(CMP) 尿嘧啶核苷酸(UMP) 腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP) 鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP) 胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP) —— 胸腺嘧啶脱氧苷酸(dTMP) (四)多磷酸核苷酸 细胞内还有一些游离存在的多磷酸核苷酸，它们都具有重要的生理功能。 5′-二磷酸核苷酸(5′-NDP)及 5′-三磷酸核苷酸(5′-NTP)**。细胞内的 5′-NDP 是核苷的焦磷酸酯， 5′-NTP 是核苷的三磷酸酯。最常见的是腺二磷(5′-ADP)，腺三磷(5′-ATP)。腺三磷的结构如下左图。 * 在命名上，将糖环碳原子的标号加“′”、碱基的原子的标号不加“′”以示区别。 **5′-NDP、5′-NTP 中的字母 N 代表四种碱基中的任何一种。 61
O-P0-P-0-P-O--CH2 OH OH HO- P=O AMP ADP HO--P=O ATP含有两个高能磷酸酯键(~P),在细胞能量代谢中起能量载体的作用。细胞内的多磷酸核苷酸常 与镁离子形成复合物而存在。ATP中的β,γ磷酸残基,在1mol/LHCl中,100℃,水解7min,即可脱 落下来,而α-磷酸残基则要稳定得多,利用这一特性可以分别测定AP和ADP中不稳定磷之含量。GIP, CTP及UTP在某些生化反应中也具有传递能量的作用,但远没有ATP来得普遍。UDP在多糖合成中可 作为携带葡萄糖的载体。CD在磷脂的合成中作为载体起携带胆碱的作用。此外,各种三磷酸核糖核苷 及三磷酸脱氧核糖核苷是合成RNA与DNA的前体。 鸟嘌呤核苷四磷酸酯(pipp)(右上图)及五磷酸酯( ppp Gpp)则在代谢的调节控制中具有重要作用 在大肠杆菌中,它们参与rRNA合成的控制。 (五)环化核苷酸 重要的有3’,5′-环化腺苷酸(cAMP)及3’,5-环化鸟苷酸(cGMP)。它们普遍存在于动、植物及微生物 细胞中,含量极微,但具有极重要的生理功能。细胞内环化AMP的合成按下列途径进行: 腺苷酸环化酶 ATP CAMP、CAMP磷酸二酯酶 5-AMP 所以细胞内cAMP的浓度取决于这两种酶活力的高低,cAMP及cGMP分别具有放大激素作用信号 及缩小激素作用信号的功能,称为细胞内二级信使。cAMP也参与大肠杆菌中DNA转录的调控。此外 2',3′-环化核糖核苷酸cNMP是RNA酶解或碱解的中间产物,其结构式如下 3. 5-CAMP 3. 5-CGMP 2. 3-CNMP 核苷酸的性质 1、一般性状核苷酸为无色粉末或结晶。易溶于水,不溶于有机溶剂。核苷酸溶液具有旋光性, 因为戊糖含有不对称碳原子 2、紫外吸收由于嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键,所以碱基、核苷及核苷酸在240~290nm波段 有一强烈的吸收峰,其最大吸收值在260nm附近,不同的核苷酸有不同的吸收光谱特性。因此,可以 用紫外分光光度计定性地鉴定核苷酸及定量地测定核苷酸
N N N N NH2 O OH OH H H H H ppGpp O O P CH2 O O O P ~ O O O P~ O O γ β α AMP ADP ATP _ _ _ _ O OH H H H H O O P CH2 O OH HO P O OH G O O HO P O OH HO P O 5' 3' 2' ATP 含有两个高能磷酸酯键(~P)，在细胞能量代谢中起能量载体的作用。细胞内的多磷酸核苷酸常 与镁离子形成复合物而存在。ATP 中的β，γ磷酸残基，在 1 mol/L HCl 中，100℃，水解 7min，即可脱 落下来，而α-磷酸残基则要稳定得多，利用这一特性可以分别测定 ATP 和 ADP 中不稳定磷之含量。GTP， CTP 及 UTP 在某些生化反应中也具有传递能量的作用，但远没有 ATP 来得普遍。UDP 在多糖合成中可 作为携带葡萄糖的载体。CDP 在磷脂的合成中作为载体起携带胆碱的作用。此外，各种三磷酸核糖核苷 及三磷酸脱氧核糖核苷是合成 RNA 与 DNA 的前体。 鸟嘌呤核苷四磷酸酯(ppGpp)(右上图)及五磷酸酯(pppGpp)则在代谢的调节控制中具有重要作用。 在大肠杆菌中，它们参与 rRNA 合成的控制。 (五)环化核苷酸 重要的有 3′,5′-环化腺苷酸(cAMP)及 3′,5′-环化鸟苷酸(cGMP)。它们普遍存在于动、植物及微生物 细胞中，含量极微，但具有极重要的生理功能。细胞内环化 AMP 的合成按下列途径进行： ATP 5'-AMP －PPi cAMP磷酸二酯酶 cAMP 腺苷酸环化酶 所以细胞内 cAMP 的浓度取决于这两种酶活力的高低，cAMP 及 cGMP 分别具有放大激素作用信号 及缩小激素作用信号的功能，称为细胞内二级信使。cAMP 也参与大肠杆菌中 DNA 转录的调控。此外， 2′,3′-环化核糖核苷酸 cNMP 是 RNA 酶解或碱解的中间产物，其结构式如下: 3',5'-cAMP 3',5'-cGMP 2',3'-cNMP O P O O A OH H O OH 5' H O P O O G OH H O OH 5' H HO O O N O H 5' H P 2' O OH H 二、核苷酸的性质 1、一般性状 核苷酸为无色粉末或结晶。易溶于水，不溶于有机溶剂。核苷酸溶液具有旋光性， 因为戊糖含有不对称碳原子。 62 2、紫外吸收 由于嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，所以碱基、核苷及核苷酸在 240~290nm 波段 有一强烈的吸收峰，其最大吸收值在 260 nm 附近，不同的核苷酸有不同的吸收光谱特性。因此，可以 用紫外分光光度计定性地鉴定核苷酸及定量地测定核苷酸
3、核苷酸的互变异构作用碱基上带有酮基的核苷酸能发生烯醇式转化。在溶液中,酮式与烯醇 式两种互变异构体常同时存在,并处于一定的平衡状态,在体内核酸结构中核苷酸以酮式结构为主要存 在形式。 H2 NH, (烯醇式) (烯醇式) 尿嘧啶 胞嘧啶 HN HO H H H2NN N (酮式 (烯醇式) (烯醇式 胸腺嘧啶 鸟嘌呤 碱基之间可形成氢键的能力,对核酸的生物学功能具有决定性意义。碱基上的重要官能团都能参与 氢键的形成,这些官能团有:腺嘌呤、鸟嘌呤及胞嘧啶上的一NH2;腺嘌呤、鸟嘌呤环1位上的亚氨基 ≡NH;嘧啶碱3位上的亚氨基:胞嘧啶2位上、胸腺嘧啶及尿嘧啶4位上及鸟嘌呤6位上电负性很强 的氧原子。由于酮式与烯醇式碱基在形成氢键的能力上有一定的差异,所以当DNA复制时碱基发生互变 异构作用,就可能引起突变。 碱基、核苷及核苷酸的解离由于嘧啶和嘌呤化合物杂环中的氮以及各种取代基具有结合和释 放质子的能力,所以这些物质既有碱性解离又有酸性解离的性质。戊糖的存在,使碱基的酸性解离特性 增强,磷酸的存在,则使核苷酸具有较强的酸性。应用离子交换柱层析和电泳等方法分级分离核苷酸及 其衍生物,主要是利用它们在一定条件下具有不同的解离特性这一事实。核苷酸为兼性离子,所以,核 苷酸等电点(p)可以按下式计算 三、核苷酸类物质的制备及应用 1、核苷酸类物质的制备以核酸为原料,以酸、碱或特异的酶降解可以得到各种碱基、核苷或核 苷酸。 用酸水解核酸,可以直接得到碱基,这是因为核酸中的糖苷键对酸不稳定。一般说来,脱氧核糖的 N-糖苷键较核糖的N-糖苷键易被酸水解;而嘌呤碱的糖苷键又较嘧啶碱的糖苷键易被酸水解。因此 在常温下用稀盐酸处理DNA,即可释放出腺嘌呤和鸟嘌呤,而要从RNA中水解下胞嘧啶和尿嘧啶,则 必须在较高温度下用浓酸作用。但是在此条件下胞嘧啶脱去氨基。 用碱降解RNA可产生2′-,3′-核糖核苷酸的混合物。如果进一步水解则产生核苷。RNA降解成核苷 的方法是用氢氧化镧,在碱性pH下加热,可以得到腺苷、鸟苷、胞苷及尿苷 在温和的条件下(如常温下0.3~-1mol/L氢氧化钠)用碱降解RNA时,要经过一个2,3′-环式核苷酸 的中间阶段,而后生成2′-及3′-核苷酸。DNA无2′-羟基,不能形成环式中间物,所以DNA抗碱。常用 的碱解条件如表3-3。 如果要制备5′-核苷酸,最常用的办法是酶解,如桔青霉的磷酸二酯酶可使核酸降解成5-核苷酸。 脾磷酸二酯酶可使核酸降解成3-核苷酸 2、核苷酸类物质的分离核酸经降解后所得的产物必须经过分离才能得到纯的制品,分离方法中最
3、核苷酸的互变异构作用 碱基上带有酮基的核苷酸能发生烯醇式转化。在溶液中，酮式与烯醇 式两种互变异构体常同时存在，并处于一定的平衡状态，在体内核酸结构中核苷酸以酮式结构为主要存 在形式。 N N H NH2 O HN N H O O HN N H O O CH3 (酮式) (酮式) (酮式) N N OH HO (烯醇式) 尿嘧啶 N N NH2 HO (烯醇式) 胞嘧啶 胸腺嘧啶 N N OH HO (烯醇式) CH3 H2N HN N N H N 鸟嘌呤 O H2N N N N H N OH (酮式) (烯醇式) 碱基之间可形成氢键的能力，对核酸的生物学功能具有决定性意义。碱基上的重要官能团都能参与 氢键的形成，这些官能团有：腺嘌呤、鸟嘌呤及胞嘧啶上的—NH2；腺嘌呤、鸟嘌呤环 1 位上的亚氨基 ＝NH；嘧啶碱 3 位上的亚氨基；胞嘧啶 2 位上、胸腺嘧啶及尿嘧啶 4 位上及鸟嘌呤 6 位上电负性很强 的氧原子。由于酮式与烯醇式碱基在形成氢键的能力上有一定的差异，所以当DNA复制时碱基发生互变 异构作用，就可能引起突变。 4、碱基、核苷及核苷酸的解离 由于嘧啶和嘌呤化合物杂环中的氮以及各种取代基具有结合和释 放质子的能力，所以这些物质既有碱性解离又有酸性解离的性质。戊糖的存在，使碱基的酸性解离特性 增强，磷酸的存在，则使核苷酸具有较强的酸性。应用离子交换柱层析和电泳等方法分级分离核苷酸及 其衍生物，主要是利用它们在一定条件下具有不同的解离特性这一事实。核苷酸为兼性离子，所以，核 苷酸等电点(pI)可以按下式计算； 2 ' 2 ' 1 pk pk pI ＋ ＝ 三、核苷酸类物质的制备及应用 1、核苷酸类物质的制备 以核酸为原料，以酸、碱或特异的酶降解可以得到各种碱基、核苷或核 苷酸。 用酸水解核酸，可以直接得到碱基，这是因为核酸中的糖苷键对酸不稳定。一般说来，脱氧核糖的 N-糖苷键较核糖的 N-糖苷键易被酸水解；而嘌呤碱的糖苷键又较嘧啶碱的糖苷键易被酸水解。因此， 在常温下用稀盐酸处理 DNA，即可释放出腺嘌呤和鸟嘌呤，而要从 RNA 中水解下胞嘧啶和尿嘧啶，则 必须在较高温度下用浓酸作用。但是在此条件下胞嘧啶脱去氨基。 用碱降解RNA可产生 2′-，3′-核糖核苷酸的混合物。如果进一步水解则产生核苷。RNA降解成核苷 的方法是用氢氧化镧，在碱性pH下加热，可以得到腺苷、鸟苷、胞苷及尿苷。 在温和的条件下(如常温下 0.3~1 mol/L 氢氧化钠)用碱降解 RNA 时，要经过一个 2′,3′-环式核苷酸 的中间阶段，而后生成 2′-及 3′-核苷酸。DNA 无 2′-羟基，不能形成环式中间物，所以 DNA 抗碱。常用 的碱解条件如表 3-3。 如果要制备 5′-核苷酸，最常用的办法是酶解，如桔青霉的磷酸二酯酶可使核酸降解成 5′-核苷酸。 牛脾磷酸二酯酶可使核酸降解成 3′-核苷酸。 63 2、核苷酸类物质的分离 核酸经降解后所得的产物必须经过分离才能得到纯的制品，分离方法中最