二、基因诊断的常用技术 1.分子杂交与印迹技术 Southern印迹 Northernl印迹 斑点杂交 反向斑点杂交 夹心杂交 原位杂交
二、基因诊断的常用技术 11 1. 分子杂交与印迹技术 Southern 印迹 Northern印迹 斑点杂交 反向斑点杂交 夹心杂交 原位杂交
基因诊断的常用技术 镰刀型红细胞贫血症 I Southern!印迹！ 0.2 kb 1.2k A:正常基因 a:突变基因 5 B-珠蛋白基因 HbA(正常) CTGAGGA CTGTGGA 1.35kb HbS(异常) ▣3 1.15kb 1.4kb 恭因型：BABA BABS B5Bs p血红蛋白有两条α和两条B链组成的四聚体。其中B链基因 上GAG突变为GTG,导致谷氨酸变成缬氨酸。 p正常基因有三个Mst川酶切位点，而突变位点正好在一个 Mst川酶切位点内部，导致突变基因少了一个酶切位点。 p酶切-southern blot。结果分析：短带1.15kb为正常基因； 长带1.35kb为突变基因。 12
12 镰刀型红细胞贫血症 p 血红蛋白有两条α和两条β链组成的四聚体。其中β链基因 上GAG突变为GTG，导致谷氨酸变成缬氨酸。 p 正常基因有三个MstⅡ酶切位点，而突变位点正好在一个 MstⅡ酶切位点内部，导致突变基因少了一个酶切位点。 p 酶切-southern blot。结果分析：短带1.15kb为正常基因； 长带1.35kb为突变基因。 二、基因诊断的常用技术 Southern印迹 A：正常基因 a：突变基因
基因诊断的常用技术 镰刀型红细胞贫血症 fPCR-RFLP 02k幼 亲代 -12kb- A:正常基因 M MsⅡMs过Ⅱ a:突变基因 T☑ 子代 5■ 3 -珠蛋白基因 HbA(正常) CTGAGGA AA aa Aa Aa Aa aa Aa AA CTGTGGA HbS(异常) ☐3 Mst II MsⅡ -1.4kb pPCR-酶切-电泳。结果分析：两条带为正常基因；一条带为 突变基因
13 镰刀型红细胞贫血症 A：正常基因 a：突变基因 p PCR-酶切-电泳。结果分析：两条带为正常基因；一条带为 突变基因。 PCR-RFLP 二、基因诊断的常用技术
二、基因诊断的常用技术 上游引物 Mst ll 下游引物 HbBA:5' -ATGGTGCATCTGACTCCTGAGGAGAAGTCTGCCC- -3 HbBs:5' ATGGTGCATCTGACTCCTGTGGAGAAGTCTGCCC- PCR 产物长度 500bp MsⅡ酶切 PCR-RFLP: BA BS ① PCR 300bp 200bp 500bp 琼脂糖凝胶 ② 酶切 电泳 ③ 电泳 500bp 300bp 200bp BABS
二、基因诊断的常用技术 14 PCR-RFLP： ① PCR ② 酶切 ③ 电泳
二、基因诊断的常用技术 PCR-ASO-斑点杂交 vASO:allele-specific-oligonucleotide等位基因特 异性寡核苷酸 V检测基因多态性或点突变 上游引物 Mst ll 下游引物 HbBA:5 -ATGGTGCATCTGACTCCTGAGGAGAAGTCTGCCC- 3 HbB*:5'- -ATGGTGCATCTGACTOCTGIGGAGAAGTCTGCCC- .3 OPCR扩增目的DNA; 产物长度 O根据正常/突变位点， 500bp 设计探针：正常探针 点杂交 和突变探针； (ASO) 0斑点杂交 0结果分析 突变探针(M) 正常探针(A)
PCR-ASO-斑点杂交 v ASO: allele-specific-oligonucleotide等位基因特 异性寡核苷酸 v 检测基因多态性或点突变 15 二、基因诊断的常用技术 ØPCR扩增目的DNA； Ø根据正常/突变位点， 设计探针：正常探针 和突变探针； Ø斑点杂交 Ø结果分析