二、基因诊断的常用技术 反向斑点杂交（reverse dot blot,RDB) 将各种突变类型的等位基因的特异性寡核苷酸探针 固定在硝酸纤维素膜或尼龙膜上，每个探针一个点 并标上号。与受标记的患者DNA样本（一般是PCR 扩增产物，5端进行标记)杂交。 V针对一种疾病有多种突变类型，即某基因座可能含有十几 或者几十个等位基因。 V高灵敏度、高特异性、准确性好；无法检出未知DNA序列 和突变类型。 V用于病原体、肿瘤基因检测、病毒基因分型、基因突变及 多态性等。 6
二、基因诊断的常用技术 反向斑点杂交（reverse dot blot, RDB） 将各种突变类型的等位基因的特异性寡核苷酸探针 固定在硝酸纤维素膜或尼龙膜上，每个探针一个点 并标上号。与受标记的患者DNA样本（一般是PCR 扩增产物，5端进行标记）杂交。 v 针对一种疾病有多种突变类型，即某基因座可能含有十几 或者几十个等位基因。 v 高灵敏度、高特异性、准确性好；无法检出未知DNA序列 和突变类型。 v 用于病原体、肿瘤基因检测、病毒基因分型、基因突变及 多态性等。 16
二、基因诊断的常用技术 夹心杂交 V需要两个靠近而不相互重叠的探针，一个做固相 吸附探针，另一个做标记检测探针。样品基因组 内核酸只有使这两个探针紧密相连才能形成夹心 结构。 检测探针 u样品不需要固定 样本 U比滤膜杂交特异性更强 吸附探针 微孔板（滤膜）
二、基因诊断的常用技术 夹心杂交 v 需要两个靠近而不相互重叠的探针，一个做固相 吸附探针，另一个做标记检测探针。样品基因组 内核酸只有使这两个探针紧密相连才能形成夹心 结构。 17 微孔板（滤膜） 吸附探针 检测探针 样本 u 样品不需要固定 u 比滤膜杂交特异性更强
二、基因诊断的常用技术 荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridazation,FISH) 将荧光素或生物素等标记的寡核苷酸探针与固定在玻片上 的细胞或组织中变性的DNA杂交。 可进行定性、定量、定位分析。 ☑探针的高度特异性 0组织学定位 ol arobe with esecent molecule
荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridazation, FISH) 将荧光素或生物素等标记的寡核苷酸探针与固定在玻片上 的细胞或组织中变性的DNA杂交。 可进行定性、定量、定位分析。 Ø 探针的高度特异性 Ø 组织学定位 18 二、基因诊断的常用技术
二、基因诊断的常用技术 2.PCR U常规PCR U多重PCR U逆转录PCR U定量PCR U原位PCR U全基因组扩增技术 u Alu PCR UAS-PCR(等位基因特异性PCR)
2.PCR u 常规PCR u 多重PCR u 逆转录PCR u 定量PCR u 原位PCR u 全基因组扩增技术 u Alu PCR u AS-PCR(等位基因特异性PCR) 19 二、基因诊断的常用技术
二、基因诊断的常用技术 2.PCR U定量PCR: p最常用的基因诊断技术之一； p核酸扩增和检测在用一个封闭体系中通过荧光信号 检测； p可对低拷贝模板进行检测。 20
2.PCR u 定量PCR: p 最常用的基因诊断技术之一； p 核酸扩增和检测在用一个封闭体系中通过荧光信号 检测； p 可对低拷贝模板进行检测。 20 二、基因诊断的常用技术