葡萄糖20克水1000毫升 洗净黄豆芽，加水煮沸30分钟。用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解 后放入糖，搅拌使它溶解，补足水分到1000毫升，分装，灭菌，备用。 把这培养基的pH值调到7.2~7.4，可用来培养细菌和放线菌。 配方四豌豆琼脂培养基 豌豆80粒琼脂5克 水200毫升 取80粒干豌豆加水，煮沸1小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮 沸到溶解，分装，灭菌，备用
葡萄糖 20 克 水 1000 毫升 洗净黄豆芽，加水煮沸 30 分钟。用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解 后放入糖，搅拌使它溶解，补足水分到 1000 毫升，分装，灭菌，备用。 把这培养基的 pH 值调到 7.2～7.4，可用来培养细菌和放线菌。 配方四 豌豆琼脂培养基 豌豆 80 粒 琼脂 5 克 水 200 毫升 取 80 粒干豌豆加水，煮沸 1 小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮 沸到溶解，分装，灭菌，备用。 11
实验二普通光学显微镜的使用 一、实验目的 1.学习并掌握光学显微镜镜的原理和使用方法。 2.复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法， 二、显徽镜的基本结构及油镜的工作原理 显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定， 缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比 较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。所以利用减 小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的 理想措施。要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率 为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率(1.52)相近，这样光 线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。显 微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高， 分辨率越高。现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像 故又常被称为复式显微镜。 (一)显微镜的主要构造 普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。 1.机械部分 1)镜座：是显微镜的底座，用以支持整个镜体。 2)镜柱：是镜座上面直立的部分，用以连接镜座和镜臂。 3)镜臂：一端连于镜柱，一端连于镜筒，是取放显微镜时手握部位。 4)镜筒：连在镜臂的前上方，镜筒上端装有目镜，下端装有物镜转换器。 5)物镜转换器（旋转器）：接于棱镜壳的下方，可自由转动，盘上有3一4个圆孔， 是安装物镜部位，转动转换器，可以调换不同倍数的物镜，当听到碰叩声时，方 可进行观察，此时物镜光轴恰好对准通光孔中心，光路接通。 6)镜台（载物台）：在镜筒下方，形状有方、圆两种，用以放置玻片标本，中央 有一通光孔，我们所用的显微镜其镜台上装有玻片标本推进器（推片器），推进器 左侧有弹簧夹，用以夹持玻片标本，镜台下有推进器调节轮，可使玻片标本作左
实验二 普通光学显微镜的使用 一、实验目的 1.学习并掌握光学显微镜镜的原理和使用方法。 2.复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。 二、显微镜的基本结构及油镜的工作原理 显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定， 缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比 较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。所以利用减 小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的 理想措施。要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率 为 1，而香柏油的折射率为 1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光 线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。显 微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高， 分辨率越高。现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像， 故又常被称为复式显微镜。 （一）显微镜的主要构造 普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。 1.机械部分 1）镜座：是显微镜的底座，用以支持整个镜体。 2）镜柱：是镜座上面直立的部分，用以连接镜座和镜臂。 3）镜臂：一端连于镜柱，一端连于镜筒，是取放显微镜时手握部位。 4）镜筒：连在镜臂的前上方，镜筒上端装有目镜，下端装有物镜转换器。 5）物镜转换器(旋转器)：接于棱镜壳的下方，可自由转动，盘上有 3－4 个圆孔， 是安装物镜部位，转动转换器，可以调换不同倍数的物镜，当听到碰叩声时，方 可进行观察，此时物镜光轴恰好对准通光孔中心，光路接通。 6）镜台(载物台)：在镜筒下方，形状有方、圆两种，用以放置玻片标本，中央 有一通光孔，我们所用的显微镜其镜台上装有玻片标本推进器(推片器)，推进器 左侧有弹簧夹，用以夹持玻片标本，镜台下有推进器调节轮，可使玻片标本作左 12
右、前后方向的移动。 7)调节器：是装在镜柱上的大小两种螺旋，调节时使镜台作上下方向的移动。 (1)粗调节器（粗螺旋）：大螺旋称粗调节器，移动时可使镜台作快速和较大辐 度的升降，所以能迅速调节物镜和标本之间的距离使物象呈现于视野中，通常在 使用低倍镜时，先用粗调节器迅速找到物象。 (2)细调节器（细螺旋）：小螺旋称细调节器，移动时可使镜台缓慢地升降，多 在运用高倍镜时使用，从而得到更清晰的物象，并借以观察标本的不同层次和不 同深度的结构。 2.照明部分 装在镜台下方，包括反光镜，集光器。 1)反光镜：装在镜座上面，可向任意方向转动，它有平、凹两面，其作用是将 光源光线反射到聚光器上，再经通光孔照明标本，凹面镜聚光作用强，适于光线 较弱的时候使用，平面镜聚光作用弱，适于光线较强时使用。 2)集光器（聚光器）位于镜台下方的集光器架上，由聚光镜和光圈组成，其作用 是把光线集中到所要观察的标本上。 (1)聚光镜：由一片或数片透镜组成，起汇聚光线的作用，加强对标本的照明， 并使光线射入物镜内，镜柱旁有一调节螺旋，转动它可升降聚光器，以调节视野 中光亮度的强弱。 (2)光圈（虹彩光圈）：在聚光镜下方，由十几张金属薄片组成，其外侧伸出 柄，推动它可调节其开孔的大小，以调节光量。 3.光学部分 1)目镜：装在镜简的上端，通常备有2一3个，上面刻有5×、10×或15×符号以 表示其放大倍数，一般装的是10×的目镜。 2)物镜：装在镜筒下端的旋转器上，一般有3一4个物镜，其中最短的刻有“10×” 符号的为低倍镜，较长的刻有“40×”符号的为高倍镜，最长的刻有“100×”符号的 为油镜，此外，在高倍镜和油镜上还常加有一圈不同颜色的线，以示区别。 在物镜上，还有镜口率NA)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大， 表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：
右、前后方向的移动。 7）调节器：是装在镜柱上的大小两种螺旋，调节时使镜台作上下方向的移动。 （1）粗调节器(粗螺旋)：大螺旋称粗调节器，移动时可使镜台作快速和较大辐 度的升降，所以能迅速调节物镜和标本之间的距离使物象呈现于视野中，通常在 使用低倍镜时，先用粗调节器迅速找到物象。 （2）细调节器(细螺旋)：小螺旋称细调节器，移动时可使镜台缓慢地升降，多 在运用高倍镜时使用，从而得到更清晰的物象，并借以观察标本的不同层次和不 同深度的结构。 2．照明部分 装在镜台下方，包括反光镜，集光器。 1）反光镜：装在镜座上面，可向任意方向转动，它有平、凹两面，其作用是将 光源光线反射到聚光器上，再经通光孔照明标本，凹面镜聚光作用强，适于光线 较弱的时候使用，平面镜聚光作用弱，适于光线较强时使用。 2）集光器(聚光器)位于镜台下方的集光器架上，由聚光镜和光圈组成，其作用 是把光线集中到所要观察的标本上。 （1）聚光镜：由一片或数片透镜组成，起汇聚光线的作用，加强对标本的照明， 并使光线射入物镜内，镜柱旁有一调节螺旋，转动它可升降聚光器，以调节视野 中光亮度的强弱。 （2）光圈(虹彩光圈)：在聚光镜下方，由十几张金属薄片组成，其外侧伸出一 柄，推动它可调节其开孔的大小，以调节光量。 3.光学部分 1）目镜：装在镜筒的上端，通常备有 2－3 个，上面刻有 5×、10×或 15×符号以 表示其放大倍数，一般装的是 10×的目镜。 2）物镜：装在镜筒下端的旋转器上，一般有 3－4 个物镜，其中最短的刻有“10×” 符号的为低倍镜，较长的刻有“40×”符号的为高倍镜，最长的刻有“100×”符号的 为油镜，此外，在高倍镜和油镜上还常加有一圈不同颜色的线，以示区别。 在物镜上，还有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大， 表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表： 13
物镜镜口率N.A)工作距离(mm) 10×0.25 5.40 40×0.65 0.39 100×1.30 0.11 表中的工作距离是指显微镜处于工作状态（物象调节清楚）时物镜的下表面 与盖玻片（盖玻片的厚度一般为0.17mm)上表面之间的距离，物镜的放大倍数愈 大，它的工作距离小。 显微镜的放大倍数是物镜的放大倍数与目镜的放大倍数的乘积，如物镜为 10×,目镜为10×，其放大倍数就为10×10=100。 三、实验器材 1.样品：洋葱表皮标本。 2.仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸、吸水纸、栽玻片、盖玻片。 四、实验步骤 1.观察前的准备 1)显微镜的安置：置显微镜于平整的实验台上，镜座距实验台边缘约3~4m。 镜检时姿势要端正。 取、放显微镜时应一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳。切 忌用单手拎提：且不论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双跟同时睁开观察，以 减少眼睛疲劳，也便于边观察边绘图或记录。 2)光源调节：安装在镜座内的光源灯可通过调节电压以获得适当的照明亮度， 而使用反光镜采集自然光或灯光作为照明光源时，应根据光源的强度及所用物镜 的放大倍数选用凹面或凸面反光镜并调节其角度，使视野内的光线均匀，亮度适 宜。 3)根据使用者的个人情况，调节双筒显微镜的目镜？双筒显微镜的目镜间距可 以适当调节，而左目镜上一般还配有曲光度调节环，可以适应眼距不同或两眼视 力有差异的不同观察者。 4)聚光器数值孔径值的调节：调节聚光器虹彩光圈值与物镜的数值孔径值相符 或略低。有些显微镜的聚光器只标有最大数值孔径值，而没有具体的光圈数刻度
物镜 镜口率(N.A.) 工作距离(mm) 10× 0.25 5.40 40× 0.65 0.39 100× 1.30 0.11 表中的工作距离是指显微镜处于工作状态(物象调节清楚)时物镜的下表面 与盖玻片(盖玻片的厚度一般为 0.17mm)上表面之间的距离，物镜的放大倍数愈 大，它的工作距离小。 显微镜的放大倍数是物镜的放大倍数与目镜的放大倍数的乘积，如物镜为 10×，目镜为 10×，其放大倍数就为 10×10=100。 三、实验器材 1.样品：洋葱表皮标本。 2.仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸、吸水纸、栽玻片、盖玻片。 四、实验步骤 1.观察前的准备 1）显微镜的安置： 置显微镜于平整的实验台上，镜座距实验台边缘约 3~4cm 。 镜检时姿势要端正。 取、放显微镜时应一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳。切 忌用单手拎提；且不论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察，以 减少眼睛疲劳，也便于边观察边绘图或记录。 2）光源调节： 安装在镜座内的光源灯可通过调节电压以获得适当的照明亮度， 而使用反光镜采集自然光或灯光作为照明光源时，应根据光源的强度及所用物镜 的放大倍数选用凹面或凸面反光镜并调节其角度，使视野内的光线均匀，亮度适 宜。 3）根据使用者的个人情况，调节双筒显微镜的目镜? 双筒显微镜的目镜间距可 以适当调节，而左目镜上一般还配有曲光度调节环，可以适应眼距不同或两眼视 力有差异的不同观察者。 4）聚光器数值孔径值的调节： 调节聚光器虹彩光圈值与物镜的数值孔径值相符 或略低。有些显微镜的聚光器只标有最大数值孔径值，而没有具体的光圈数刻度。 14
使用这种显微镜时可在样品聚焦后取下一目镜，从镜筒中一边看着视野，一边缩 放光圈，调整光圈的边缘与物镜边缘黑圈相切或略小于其边缘。因为各物镜的数 值孔径值不同，所以每转换一次物镜都应进行这种调节。 在聚光器的数值孔径值确定后，若需改变光照强度，可通过升降聚光器或改 变光源的亮度来实现，原则上不应再通过虹彩光圈的调节。当然，有关虹彩光圈、 聚光器高度及照明光源强度的使用原则也不是固定不变的，只要能获得良好的观 察效果，有时也可根据不同的具体情况灵活运用，不一定拘泥不变。 2.显微观察 在目镜保持不变的情况下，使用不同放大倍数的物镜所能达到的分辨率及放 大率都是不同的。一般情况下，特别是初学者，进行显微观察时应遵守从低倍镜 到高倍镜再到油镜的观察程序，因为低倍数物镜视野相对大，易发现目标及确定 检查的位置。 1)低倍镜观察：将金黄色葡萄球菌染色标本玻片置于载物台上，用标本夹夹住， 移动推进器使观察对象处在物镜的正下方。下降10X物镜，使其接近标本，用 粗调节器慢慢升起镜筒，使标本在视野中初步聚焦，再使用细调节器调节图象清 晰。通过玻片夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各部位，找到合适的目的物， 仔细观察并记录所观察到的结果。 在任何时候使用粗调节器聚焦物像时，必需养成先从侧面注视小心调节物镜靠近 标本，然后用目镜观察，慢慢调节物镜离开标本进行准焦的习惯，以免因一时的 误操作而损坏镜头及玻片。 2)高倍镜观察：在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心后，轻轻 转动物镜转换器将高倍镜移至工作位置。对聚光器光圈及视野亮度进行适当调节 后微调细调节器使物像清晰，利用推进器移动标本仔细观察并记录所观察到的结 果。 在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他 物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜 的同焦用。这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作 距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器 时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。 15
使用这种显微镜时可在样品聚焦后取下一目镜，从镜筒中一边看着视野，一边缩 放光圈，调整光圈的边缘与物镜边缘黑圈相切或略小于其边缘。因为各物镜的数 值孔径值不同，所以每转换一次物镜都应进行这种调节。 在聚光器的数值孔径值确定后，若需改变光照强度，可通过升降聚光器或改 变光源的亮度来实现，原则上不应再通过虹彩光圈的调节。当然，有关虹彩光圈、 聚光器高度及照明光源强度的使用原则也不是固定不变的，只要能获得良好的观 察效果，有时也可根据不同的具体情况灵活运用，不一定拘泥不变。 2.显微观察 在目镜保持不变的情况下，使用不同放大倍数的物镜所能达到的分辨率及放 大率都是不同的。一般情况下，特别是初学者，进行显微观察时应遵守从低倍镜 到高倍镜再到油镜的观察程序，因为低倍数物镜视野相对大，易发现目标及确定 检查的位置。 1）低倍镜观察： 将金黄色葡萄球菌染色标本玻片置于载物台上，用标本夹夹住， 移动推进器使观察对象处在物镜的正下方。下降 10Χ物镜，使其接近标本，用 粗调节器慢慢升起镜筒，使标本在视野中初步聚焦，再使用细调节器调节图象清 晰。通过玻片夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各部位，找到合适的目的物， 仔细观察并记录所观察到的结果。 在任何时候使用粗调节器聚焦物像时，必需养成先从侧面注视小心调节物镜靠近 标本，然后用目镜观察，慢慢调节物镜离开标本进行准焦的习惯，以免因一时的 误操作而损坏镜头及玻片。 2）高倍镜观察： 在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心后，轻轻 转动物镜转换器将高倍镜移至工作位置。对聚光器光圈及视野亮度进行适当调节 后微调细调节器使物像清晰，利用推进器移动标本仔细观察并记录所观察到的结 果。 在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他 物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜 的同焦用 。这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作 距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器 时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。 15