病理生理学:HbA(第6位谷氨酸) HbS(第6位缬氨酸),b溶解 度下降,HbS凝聚成管状 治疗:临床常规贫血治疗(输血、 骨髓移植、基因治疗) Hpa|β珠蛋白基因片段(kb) Hb基因型 总计130kb片段的频率 76/7.67.6/707.0/13.0 76/13.013.013.0 白人AS 0.31 0 11 0.87 AA 0
病理生理学：HbA(第 6 位谷氨酸) →HbS(第 6 位缬氨酸)，Hb 溶解 度下降，HbS 凝聚成管状 治疗：临床常规贫血治疗（输血、 骨髓移植、基因治疗） —————————————— —————————————— —————————————— ————————————— Hpa Iβ珠蛋白基因片段（kb） Hb基因型 —————————————— ————————————— 总 计 13.0kb片段的频率 7.6/7.6 7.6/7.0 7.0/13.0 7.6/13.0 13.0/13.0 —————————————— —————————————— —————————————— ————————————— 白人AS 5 1 1 9 0 16 0.31 SS 0 0 0 4 11 15 0.87 AA 12 0 0 0 0 12
黑人AA 8 6 0 0.03 亚洲AA RFLP 13 kb 常 父母儿儿胎 镰状细胞贫 血 第1个基因诊断、产前基因诊断 成功病例
0 黑人 AA 8 6 0 1 0 15 0.03 亚洲 AA 15 0 0 0 0 15 0 —————————————— —————————————— —————————————— ————————————— R F L P + S o u t h e r n 镰 状 细 胞 贫 血 第 1 个基因诊断、产前基因诊断 成功病例
RFLP连锁 家系 右图:RFLP连锁分析进行产前 基因诊断 HpaI切割人类DNA所形 成不同长度的DNA片段,用 RFLP连锁分析法可进行镰状细 胞贫血症的产前诊断,在此例 中,患儿仅出现13 kbDNA片段, 父母均出现13 kbDNA片段,则 表明有纯合的β,为镰状细胞 贫血症患者,如出现76kb 54kb、则为正常个体 RFLP Southern MstI位点: CCT NAG C BS: CCT GTG GAG Pro- Val- Glu MsⅡ片段 镰状细胞贫血RFLP AS AS AA SS 1.3≤Hh 1.15k
Hpa I RFLP 连锁 家系 右图：RFLP 连锁分析进行产前 基因诊断。 Hpa I 切割人类 DNA 所形 成不同长度的 DNA 片段，用 RFLP连锁分析法可进行镰状细 胞贫血症的产前诊断，在此例 中，患儿仅出现 13kbDNA 片段， 父母均出现 13kbDNA 片段，则 表明有纯合的βs，为镰状细胞 贫血症患者，如出现 7.6kb、 5.4kb、则为正常个体。 RFLP + Southern 镰 状 细 胞 贫 血 R F L P + S o u t
he Mst ll 失去酶切位点:CCI囚G CCTO N:1.15kb+0.2kb;M:1.35kb 右图:用Msl酶切,β珠蛋 白基因做探针的HbS基因诊断 正常β珠蛋白基因产生1.15kb 和0.2kb两个片段,而HbS的β 珠蛋白基因失去了这个MSIl 识别顺序,只产生1.35kb的片 段 ASO DNA codon 5 6 CCT GAG GAG CCT GAG 镰状细胞贫血As B,( 0探针 Ⅱ 正常探针○●●● 异常探针 ●●●○
hern Mst II 失去酶切位点：CCTGAGG→ CCTGTGG N：1.15kb + 0.2kb；M：1.35kb 右图：用 Mst II 酶切，β珠蛋 白基因做探针的HbS基因诊断。 正常β珠蛋白基因产生 1.15kb 和 0.2kb 两个片段，而 HbS 的β 珠蛋白基因失去了这个 Mst II 识别顺序，只产生 1.35kb 的片 段。 ASO 镰 状 细 胞 贫 血 A S O 探 针 β
A探针 CTCI囚 GAGGAGTCTG βS探针 -CTCCTGIGGAGGAGTCTGC 右图:上:等位基因特异性寡核 苷酸探针(ASO Allele-specific-oligonucleotide 诊断镰形细胞贫血 下:某家系的ASO探针诊断结 果 1.1.1.3a地中海贫血 一般特点:多见于地中海和华南 地区 临床特征:贫血,轻重不等,严 重者致死,轻微者仅轻度贫血 发病率:有地区差异,在地中海 和华南地区常见,其他地区少见 遗传学:常染色体遗传(显性), 基因定位16q13 基本缺陷:患者表现为1-4个(4 个即全部)a基因的缺失
A 探针 5ˊ -CTCCTGAGGAGGAGTCTG C -3ˊ βS探针 5ˊ -CTCCTGTGGAGGAGTCTGC -3ˊ 右图：上：等位基因特异性寡核 苷酸探针（ASO Allele-specific-oligonucleotide ） 诊断镰形细胞贫血 下：某家系的 ASO 探针诊断结 果 1.1.1.3 α地中海贫血 一般特点：多见于地中海和华南 地区 临床特征：贫血，轻重不等，严 重者致死，轻微者仅轻度贫血 发病率：有地区差异，在地中海 和华南地区常见，其他地区少见 遗传学：常染色体遗传（显性）， 基因定位 16q13 基本缺陷：患者表现为 1-4 个（4 个即全部）α基因的缺失