Insert EcoRI Xho I 1.9kb
Insert EcoRI Xho I 1.9kb
1.抗性基因（Antibiotic resistance gene,such as Ampicillin resistance gene, Kanamycine resistance gene) 2.启始复制子（ori, Origin of replication)； 3.多克隆位点(MSC, Multiple cloning site or polylinker)； 4.标记基因(Marker gene, such as LacZ gene)。 载体的结构：
1.抗性基因（Antibiotic resistance gene,such as Ampicillin resistance gene, Kanamycine resistance gene) 2.启始复制子（ori, Origin of replication)； 3.多克隆位点(MSC, Multiple cloning site or polylinker)； 4.标记基因(Marker gene, such as LacZ gene)。 载体的结构：
Ampr抗性基因 Ampr抗性基因编码一种周质酶（β-内酰胺酶）可特异地 切割Amp的β-内酰胺环，从而使其失去杀菌能力 pUC19 2686 bp APr P(BLA) ALPHA P(LAC) ORI AvaI (413) BamHI (418) EcoRI (397) HindIII (448) PstI (440) SmaI (415) XmaI (413) ApaLI (178) ApaLI (1121) ApaLI (2367)
Ampr抗性基因 Ampr抗性基因编码一种周质酶（β-内酰胺酶）可特异地 切割Amp的β-内酰胺环，从而使其失去杀菌能力 pUC19 2686 bp APr P(BLA) ALPHA P(LAC) ORI AvaI (413) BamHI (418) EcoRI (397) HindIII (448) PstI (440) SmaI (415) XmaI (413) ApaLI (178) ApaLI (1121) ApaLI (2367)
二、实验原理 • 碱法提取主要是利用共价闭合环状质粒与线性染色质在 拓扑学上的差异来分离它们，在碱性PH，DNA变性， 恢复中性时，线性染色体DNA不能准确复性，与其它大 分子共沉淀，而质粒DNA却可以准确复性，留在上清中。 • 碱性下，变性蛋白是可溶的，酸性、中性下变性蛋白不 溶而沉淀。几乎所有纯化质粒的方法都用到质粒DNA分 子相对较小和共价闭合环状这两个特性。由于操作原因 提取的质粒可有三种结构：线形、开环、闭环超螺旋
二、实验原理 • 碱法提取主要是利用共价闭合环状质粒与线性染色质在 拓扑学上的差异来分离它们，在碱性PH，DNA变性， 恢复中性时，线性染色体DNA不能准确复性，与其它大 分子共沉淀，而质粒DNA却可以准确复性，留在上清中。 • 碱性下，变性蛋白是可溶的，酸性、中性下变性蛋白不 溶而沉淀。几乎所有纯化质粒的方法都用到质粒DNA分 子相对较小和共价闭合环状这两个特性。由于操作原因 提取的质粒可有三种结构：线形、开环、闭环超螺旋
DNA 是具有一定结构的物质，一些特殊的环 境会导致DNA的变性，如加热、极端pH值、 有机溶剂、尿素、酰胺试剂等，而适宜的环 境又可以使DNA复性
DNA 是具有一定结构的物质，一些特殊的环 境会导致DNA的变性，如加热、极端pH值、 有机溶剂、尿素、酰胺试剂等，而适宜的环 境又可以使DNA复性