SDS是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞 裂解，又能使一些蛋白质变性，所以SDS处理细菌 细胞后，会导致细菌细胞壁的破裂，从而使质粒 DNA以及基因组DNA从细胞中同时释放出来。释放 出来的DNA遇到强碱性（NaOH）环境，就会变性。 然后，用酸性乙酸钾来中和溶液，使溶液处于中 性，质粒DNA将迅速复性，而基因组DNA，由于分 子巨大，难以复性。离心后，质粒DNA将在上清中， 而基因组DNA则与细胞碎片一起沉淀到离心管的底 部。通过这种方法即可将质粒DNA从细菌中提取出 来
SDS是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞 裂解，又能使一些蛋白质变性，所以SDS处理细菌 细胞后，会导致细菌细胞壁的破裂，从而使质粒 DNA以及基因组DNA从细胞中同时释放出来。释放 出来的DNA遇到强碱性（NaOH）环境，就会变性。 然后，用酸性乙酸钾来中和溶液，使溶液处于中 性，质粒DNA将迅速复性，而基因组DNA，由于分 子巨大，难以复性。离心后，质粒DNA将在上清中， 而基因组DNA则与细胞碎片一起沉淀到离心管的底 部。通过这种方法即可将质粒DNA从细菌中提取出 来
细菌裂解的方法： • 碱裂解法：0.2molNaOH+1%SDS • 煮沸裂解法:沸水煮沸40秒 • SDS裂解法：10%SDS,一般用于 质粒大量提取
细菌裂解的方法： • 碱裂解法：0.2molNaOH+1%SDS • 煮沸裂解法:沸水煮沸40秒 • SDS裂解法：10%SDS,一般用于 质粒大量提取
提纯的思路 • 质粒的特性：共价、闭合、环状的小分子量DNA • 要去除的物质： 蛋白 基因组DNA 脂类及小分子杂质 RNA
提纯的思路 • 质粒的特性：共价、闭合、环状的小分子量DNA • 要去除的物质： 蛋白 基因组DNA 脂类及小分子杂质 RNA
测定DNA浓度的方法主要有两种，即利用分 光光度计法测定DNA的紫外光吸收值；第二 种方法是测定样品中溴化乙锭发射的荧光的 强度来计算核酸的含量。另外还有一种用于 粗略检测DNA浓度的方法是通过凝胶电泳， 与标准分子量相比较。 DNA浓度的测定：
测定DNA浓度的方法主要有两种，即利用分 光光度计法测定DNA的紫外光吸收值；第二 种方法是测定样品中溴化乙锭发射的荧光的 强度来计算核酸的含量。另外还有一种用于 粗略检测DNA浓度的方法是通过凝胶电泳， 与标准分子量相比较。 DNA浓度的测定：
紫外光吸收法： 因为组成核酸的碱基(G,A,T,C）在260nm处 具有强吸收峰，所以通过测定260nm的吸收 峰即可对DNA进行定量。但有时也会因为所 处溶液的pH值不同而导致吸光系数的不同。 因此，一般在中性pH值左右的环境中进行 测定。这种方法常用于测定比较纯的样品
紫外光吸收法： 因为组成核酸的碱基(G,A,T,C）在260nm处 具有强吸收峰，所以通过测定260nm的吸收 峰即可对DNA进行定量。但有时也会因为所 处溶液的pH值不同而导致吸光系数的不同。 因此，一般在中性pH值左右的环境中进行 测定。这种方法常用于测定比较纯的样品