限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶的类型 主要特性 1型 Ⅱ塑 Ⅲ型 限制修饰 多功能 单功 双功能 蛋白结构异源三聚体 同源二聚体 源二聚体 辅助因子 ATP Mg2SAM Maz+ ATP Mg2* SAM 识别序列 TGAN.TGCT旋转对称序列 GAGCC AACNGTGC CAGCAG 切割位点距识别序列1kb处识别序列内或附近距识别序列下游 随机性切割 异性切割 24-26bp处
限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶的类型 主要特性 I 型 II 型 III 型 限制修饰 多功能 单功能 双功能 蛋白结构 异源三聚体 同源二聚体 异源二聚体 辅助因子 ATP Mg2+ SAM ATP Mg Mg2+ 2+ SAM 识别序列 TGAN8TGCT 旋转对称序列 GAGCC AACN6GTGC CAGCAG 切割位点 距识别序列1kb处 识别序列内或附近 距识别序列下游 随机性切割 特异性切割 24-26bp处
限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶的命名 属名 种名株名 Haemophilus influenzae d嗜血流感杆菌d株 Hindle hinoⅢ 同一菌株中所含的多个不同的限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶的命名 属名 种名 株名 H i n d III H i n d III Haemophilus influenzae d 嗜血流感杆菌d株 同一菌株中所含的多个不同的限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶 Ⅱ型限制性核酸内切酶的基本特性 识别双链DNA分子中4-8对碱基的特定序列 大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧 识别切割序列呈典型的旋转对称型回文结构 ECOR I的切割位点 EcoR|的识别序列 5 GCTGAATTCGAG 3,‘ C GACTTAAGCTC 5
限制性核酸内切酶 II 型限制性核酸内切酶的基本特性 识别双链DNA分子中4 - 8对碱基的特定序列 大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧 识别切割序列呈典型的旋转对称型回文结构 5‘ … G C T G A A T T C G A G … 3’ 3‘ … C G A C T T A A G C T C … 5’ EcoR I的切割位点 EcoR I的识别序列
EcoR等产生的5‘粘性末 端 5 G-C-T-G-A-A--T-C-G-A-G 3..C-GAC-TTA-A-G-C-T-C 5 EcoR|37℃ 5 G-C-T-G-OH P-A-A-T-T-C-G-A-G 3….cGAC-T-TA=A=P OH-G-CTC∴.5 退火4-7℃ OH P 5∴ G-C-T-GA-A-CGAG 3.C-GAC-T-T-A-AG-C-T-C.5 P OH
EcoRI等产生的5‘粘性末 端 5‘ … G-C-T-G-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-G-C-T-C … 5’ EcoRI 37 ℃ 5‘ … G-C-T-G-OH P-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-P OH-G-C-T-C … 5’ 退火 4-7 ℃ 5‘ … G-C-T-G A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-C-T-T-A-AG-C-T-C … 5’ OH P P OH
Pst等产生的3“粘性末端 5 G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G C-G-A-G-A-C-GP-C-C-T-C 5 Pstl 37C 5‘∴GCTC-TG-C-A-0H P-G-G-A-G 3….cGA-G OH-A-C-G-T-C-C-T-C 5 退火4-7℃ OH P 5"∴ GC-T-C-T-G-O- AG-G-A-G 3.C-GA-GA-C-G-T-C-C-T-C 5
PstI等产生的3‘粘性末端 5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’ PstI 37 ℃ 5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A-OH P-G-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-G-P OH-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’ 退火 4-7 ℃ 5‘ … G-C-T-C-T-G-C-AG-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-G A-C-G-T-C-C-T-C … 5’ OH P P OH