2.1.1 DNA提取的基本步骤I.样品预处理II.破碎细胞或包膜一内容物释放III.核酸分离、纯化IV.沉淀或吸附核酸,并去除杂质儿V.核酸溶解在适量缓冲液或水中23
2.1.1 DNA提取的基本步骤 I.样品预处理 II.破碎细胞或包膜-内容物释放 III.核酸分离、纯化 IV.沉淀或吸附核酸,并去除杂质 V.核酸溶解在适量缓冲液或水中 23
基因组DNA提取流程图抽提环境样品离心洗涤干燥溶解预处理上层溶液DNA溶液沉淀DNA细胞裂解24
环境样品 细胞裂解 预处理 上层溶液 抽提 干燥溶解 离心洗涤 沉淀DNA DNA溶液 基因组DNA提取流程图 24
重要性: 高质量DNA的提取是进行后续实验的基础高质量DNA的提取是保证所进行的研究能更全面真实反映所研究的环境的微生物区系组成结构的前提
重要性: • 高质量DNA的提取是进行后续实验的基础 • 高质量DNA的提取是保证所进行的研究能 更全面真实反映所研究的环境的微生物区 系组成结构的前提。 25
环境样品:种类繁多、组成复杂、物理化学性质多变·纯培养的细胞(inoculated bacteria)通常比环境中的原有的细胞(autochthonous bacteria)更容易裂解(Tsai andOlson 1991a; Tsai, Marie J. Park et al. 1991b; Jacobsen 1995)没有一种方法能适用于所有的环境样品,每一种样品根据其特有的理化和生物学特性,都需要优化出一种特有的提取DNA的方法(Zhou, Bruns et al. 1996)。26
环境样品: • 种类繁多、组成复杂、物理化学性质多变 • 纯培养的细胞(inoculated bacteria)通常比环境中的原有 的细胞(autochthonous bacteria)更容易裂解(Tsai and Olson 1991a; Tsai, Marie J. Park et al. 1991b; Jacobsen 1995) • 没有一种方法能适用于所有的环境样品,每一种样品根据 其特有的理化和生物学特性,都需要优化出一种特有的提 取DNA的方法(Zhou, Bruns et al. 1996)。 26
DNA提取(一)样品准备:腐殖酸等破壁去除环境样品预处理
腐殖酸等 去除 破 壁 环境样品预处理 DNA提取 (一)样品准备: 27