《氟喹诺酮类药物在水产中的应用》几种氟喹诺酮类药物对嗜水气单胞菌体外药效学研究

维普资讯htp/www.cqvip.com 第34巷第4期 34():431~435 2003年12月 Journal of Northeast Agricultural University December 2003 文章编号1005-9369(2003)04-0431-05 几种氟喹诺酮类药物对嗜水气单胞菌体外药效学研究 杨丽辉1,佟恒敏2,卢彤岩',赵吉伟1,刘红柏1,马力2 (1.中国水产科学研完院黑龙江省水产研究所150062.东北农业大学黑龙江哈尔滨150030) 摘要:釆用议誉两部稀释法测定丁盐酸环丙沙星、乳酸环丙沙星、恩诺沙星、单诺沙星、二氟沙星对嗜水气单胞菌 的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),MC分别是:0.00625,0.00625,0.0125,0.05,0.20岖·mL MBC分别是0.025,0.025,0.05,010,0.80岖·mL-',阿时研究丁不同药物浓度(2MIC,5MIC,8MIC)对嘴水 气单胞箇杀箇的经时变化规律。结果表明,这凡种药物从2MIC到5MC浓度在3h内菌数减少的lg值之问差异 显蓍(P<0.05),从5MlC浓度到8MIC浓度在3h内菌数减少的1g值之问差异不显著(P>0,05)。 关键词:氟喹诺酮;嗜水气单胞菌;药效学 中图分类号:S859.7;S855.1 文献标识码A 喹诺酮类药物应用于水产业始于20世纪70年 代(1),由于喹诺酮类药物具有抗菌谱广口服给药生 材料和方法 物利用度高,不易产生耐药性,残留低排泄快毒副1.1材料 作用小,尤其是对革兰氏阴性细菌抗菌作用强等特1.1.1酋种嗜水气单胞菌(A. hydrophila)由 点,因此被广泛应用于水生动物细菌性疾病的治黑龙江水产研究所提供 疗2°。在我国虽然该类药物已被广泛应用于水生1.12格养基液体培养基为蛋白胨水,固体培养 动物的疾病治疗,但关于该类药物对水生动物病原基为普通琼脂培养基是由北京奥博星生物技术责任 的药效研究并不多°,在水产业方面应用该类药物有限公司生产,批号为2002011 治疗水生动物的细菌性疾病时,大多是借鉴兽医对 1.1.3药品盐酸环丙沙星,批号010912,含量 9930%。乳酸环丙沙星,批号010914,含量 哺乳动物的研究成果,因此,造成该类药物在水产业98.50%。盐酸恩诺沙星,批号010912,含量 疾病防治用药的盲目性。了解该类药物对水产养殖99.30%。含量9.30%均为浙江新昌县康乐兽药 业常见的病原菌的最小抑菌浓度(MIC)最小杀茵有限公司制造的原粉。二氟沙星为广东省广州惠华 浓度(MBC)和不同浓度药物的杀菌曲线对评价该动物保健品有限公司提供,批号010801,含量 类药物在水产方面的应用具有重要的理论意义和临98.25%。单诺沙星为河南郑州兽药厂提供,批号 床参考价值。可更好的了解该类药物对水产业常见990415,含量为99.50%。 病原菌的抗菌效果,防止本类药物在水产养殖疾病1.2方法 防治的滥用。本研究选用5种氟喹诺酮类药物,研究1.2.1MIC,MBC的测定参考戴自英等(试管 了这5种药物对水产养殖上常见的病原菌——嗜水两倍稀释法略作改进,先将药物配置成1280 气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度μ·mL-,用前稀释10倍后,再加入第一管,其他操 (MBC)和不同药物浓度对该菌的杀菌曲线,目的是作程序不变,所用的嗜水气单胞菌悬液为10CFU 了解它们对该菌的体外药效,为更合理的应用该类( colony forming unit·mL-1)培养24h后,以能抑 药防治嗜水气单胞菌引起的水生动物疾病提供理论制细菌生长的最小药物浓度为最小抑菌浓度 依据。 (MC),以培养48h,观察药物最低抑菌浓度以上未 见细菌生长的各试管培养物,分别吸取0.10mL,移 收稿日期:2002-10-17 种到不含药的平皿琼脂培养基上,置30℃培养箱中

第 34卷 第 4期 2003年 12月 东 北 农 业 大 学 学 报 JournalofNortheastA griculturalUniversity 34( J：431～ 435 Decem ber2003 文章 编 号 1OO5～9369(2003)04-0431～05 几种氟喹诺 酮类药物对 嗜水 气单胞菌体外 药效学研 究 杨 丽辉 ，佟 恒敏 ，卢彤岩 ，赵 吉伟 ，刘红柏 ，马力 (1．中国水 产科 学研 究院 黑龙江 省 水产研 究所 150076 2．东北 农业 大学 黑 龙江 哈尔 滨 150030) 摘 要 ：采用试 管两部稀释法测定 了盐酸环丙沙星、乳酸环丙沙星 、恩诺沙星、单诺沙星、二氟沙星对嗜水气单胞 菌 的 最 ·J、抑 菌浓 度 (M IC)和 最 小 杀 菌 浓 度 (M BC)，M IC 分 别 是 ：0．00625，0．00625，0．0125，0．05，0．20lag ·mL一 ． MBC 分 别 是 0．025，0．025，0．05，0．10，0．8O岖 ·mL一 。同 时 研 究 了不 同 药物 浓 度 (2M IC，5M IC，8M IC)对 嗜 水 气单 胞 菌杀 菌的经 时变化 规 律 。结果 表 明 ，这 几 种 药物从 2MIC到 5MIC浓 度 在 3h内 菌数 减 少的 1g值之 间 差异 显著 (P <0．05)，从 5MIc 浓度 到 8MIc浓 度在 3h内 菌数 减 少 的 1g值之 间差异 不 显 著 (P >0．05)。 关 键 词 ：氟喹诺酮 ；嗜水气单胞 菌 ；药效学 中图分 类号 ：$859．7；$855．1 文献标识码 A 喹 诺 酮 类 药 物 应 用 于 水 产 业 始 于 2O世 纪 70年 代 n，由于 喹诺酮 类药 物具 有抗 菌谱广 口服 给 药生 物 利用度 高 ，不 易产 生耐药性 ，残 留低 排 泄快 ，毒副 作 用小 ，尤其 是对 革兰 氏阴性 细 菌抗 菌作 用强 等特 点 ，因此 被 广 泛 应 用 于 水 生 动 物 细 菌 性 疾 病 的 治 疗 。叫 。在我 国虽 然该类药物 已被 广泛应用 于水生 动物 的疾病 治疗 ，但关 于该类 药物 对水 生动物病 原 的药 效研究并不 多 ，在水产业方面应用该 类药物 治疗 水 生动物 的细 菌性疾 病时 ，大 多是借 鉴兽 医对 哺 乳 动 物 的 研 究 成 果 ，因此 ，造 成 该 类 药 物 在 水 产 业 疾病 防治用药的盲 目性 。了解该类药物对 水产养殖 业 常 见的病 原 菌的 最小抑 菌浓 度 (MIC)、最小 杀菌 浓度 (MBC)和不 同浓度药物 的杀 菌 曲线 ，对评 价该 类 药 物 在 水 产 方 面 的 应 用 具 有 重 要 的理 论 意 义 和 临 床参考 价值 。可更好 的了解该类药物对水 产业常见 病 原菌 的抗菌效 果 ，防止 本类 药物在 水产 养殖疾 病 防治 的滥 用 。本研 究选 用 5种 氟喹诺酮类药物 ，研究 了这 5种药物对水产 养殖上常见的病原 菌—— 嗜水 气单 胞 菌 的 最 小 抑 菌浓 度 (MIC)、最 小 杀 菌 浓 度 (MBC)和 不同药物 浓度对 该菌的杀 菌 曲线 ，目的是 了解 它 们对该菌 的体 外药 效 ，为更 合理 的应用该 类 药 防治嗜水气单胞 菌引起的水生动物疾病提 供理论 依 据 。 收 稿 日期 ：2002—1o一17 1 材 料 和 方 法 1．1 材料 1．1．1 菌种 嗜 水 气单 胞 菌 (A．hydrophila)由 黑 龙 江 水 产 研 究 所 提 供 。 1．1．2 培 养基 液体 培养基为蛋 白胨 水 ，固体培养 基 为普 通琼脂 培养基是 由北 京奥博星生物 技术责任 有 限公 司 生 产 ，批 号 为 20020111。 1．1．3 药 品 盐 酸 环 丙 沙 星 ，批 号 010912，含 量 99．30 。 乳 酸 环 丙 沙 星 ，批 号 010914，含 量 98．50 。 盐 酸 恩 诺 沙 星 ，批 号 010912，含 量 99．3O 。含 量 99．3O 。均 为 浙 江 新 昌县 康 乐 兽 药 有 限公 司制 造的原粉 。二 氟沙星为广东 省广州惠华 动 物 保 健 品 有 限 公 司 提 供 ，批 号 010801，含 量 98．25 。单 诺沙 星 为 河南 郑 州兽 药 厂提 供 ，批 号 990415，含 量 为 99．5O 。 1．2 方 法 1．2．1 MIC，MBC 的测 定 参考 戴 自英等 “试 管 两 倍 稀 释 法 略 作 改 进 ，先 将 药 物 配 置 成 1 280 u·mL_。，用 前 稀 释 1O倍 后 ，再 加 入 第 一 管 ，其 他 操 作 程 序 不 变 ，所 用 的 嗜 水 气 单 胞 菌 悬 液 为 10CFU (colonyformingunit·mL )。培 养 24h后 ，以 能 抑 制 细 菌 生 长 的 最 小 药 物 浓 度 为 最 小 抑 菌 浓 度 (MIC)，以培养 48h，观察药 物最低抑菌 浓度以上未 见细 菌 生 长 的 各 试 管 培 养 物 ，分 别 吸 取 0．10mL，移 种 到 不 含 药 的 平 皿 琼 脂 培 养 基 上 ，置 30~C培 养 箱 中 维普资讯 http://www.cqvip.com

维普资讯htp/www.cqvip.com 432· 东北农业大学学报 第34卷 过夜,计数应少于5个菌落者,作为该药物的最低杀培养12h后,取50μ菌液接种于10mL的蛋白胨 菌浓度(MBC)。相同过程重复5次 水中,培养10h,使细菌在10-CFU·mL-1,即为 1.2.2MBC/MIC的值分别用各药对嗜水气单对数生长期菌悬液 胞菌的MBC值除以相应的MIC值,其商即为二者1.2.5抗菌药的杀菌动力学曲线取0.10mL 的比率。将其作为评价这几种药物抗菌效力的参数200×MIC或(500XMIC、800×MC)抗菌药液加 入8.90mL30℃预温的蛋白胨水中,将对数生长期 1.23细菌计数以0.85%无菌生理盐水作为细细菌原液用生理盐水稀释10-后取1mL加入到已 菌计数的稀释液,对菌液进行10~10倍系列稀释加抗菌药的蛋白胨水中。立即置于30℃恒温培养箱 后,取010mL置于普通琼脂平板上,每个稀释度3中培养,然后分别于0,0.5,1,1.5,2,3,4,5,6, 只平板,30℃过夜培养后,对菌数在30~300之间的8,12h取0.10mL菌液进行细菌计数。重复3次 平板进行菌落计数,取其平均值,单位为CFU 取其平均值。每次实验做一个不加任何抗菌药的对 照并于0,0.5,1,1.5,2,3,4h取0.10mL菌液 1.2.4嗜水气单胞菌生长曲线及对数期茵悬液的进行细菌计数。 制作于生长有嗜水气单细胞的琼脂平板上挑取1 个菌落,接种于10m30预温的蛋白胨水中,置2结果 30℃恒温培养箱中培养12h后,取50μ菌液接种2.1盐酸环丙沙星、乳酸环丙沙星、恩诺沙星、单诺 于10mL预温的蛋白胨水中培养,然后分别于0,沙星、二氟沙星对嗜水气单胞菌的体外抑、杀菌作 5,0.5,1,2,3,4,6,8,10h取0.1mL菌液用。 进行细菌计数,重复3次,取其平均值。将细菌计数 结果见表1。这几种氟喹诺酮类药物对嗜水气 所得各时间点CPU·mL值取常用对数,以其为单胞菌均有较好的抑菌杀菌活性,但在这几种药物 纵轴,以孵育时间(h)为横轴,建立细菌生长曲线。当中,盐酸环丙沙星和乳酸环丙沙星的药效表现尤 根据细菌生长曲线的结果,制作对数生长期细菌。由为突出,他们对嗜水气单胞菌的MIC都为0.006 平板挑取单个菌落接种于10mL蛋白胨水中,30℃wg·mg1,MBC都为0.025wg·mL 表1几种氟喳诺酮类药物对嗜水气单胞菌的MIC、MBC(g·mL-") Table 1 The MIC and MBC of different fluoquinolone on A hydrophila 盐酸环丙沙星 乳酸环丙沙星 恩诺沙星 单诺沙星 氟沙星 药物名称 Criprofloxoan Enrofloxacin Difloxacin hydrochlorid MIC MBC MBC MIC MBC MIC MIC MIC 嘈水气单胞菌 0.006250.0250.006250.025 0.0125 0.050.1 MBC/MIC的值 2 2.2嘻水气单胞菌的生长曲线 2.3盐酸环丙沙星、乳酸环丙沙星、恩诺沙星、单诺 嗜水气单胞菌经过预培养接种至新鲜的培养基沙星、二氟沙星对嗜水气单胞菌的杀菌曲线 中的生长情况见图1,由图1可见嗜水气单胞菌经 盐酸环丙沙星、乳酸环丙沙星、恩诺沙星、单诺 过预培养接种至新鲜的培养基中一般经过2h后进沙星、二氟沙星分别以2,5,8MIC浓度对浊度为 入对数生长期,对数生长期一般持续6h,即该菌在105-CFU·mL-的嗜水气单胞菌的杀菌曲线(见 蛋白陈水中生长8h以后进入对数生长末期,培养图2~5)。所有药的2MIC浓度对浊度为10-1 10h后的细菌的浊度达到10CFU·m后,生cFU·mL-的嗜水气单胞菌的7h以内是随时间 长速度减慢并逐渐趋于恒定在对数生长期中,嗜水的增加菌数减少,7h以后活菌数开始增加。恩诺沙 气单胞菌在蛋白胨水中进入对数生长期后,增加 星和单诺沙星的5MIC和8MIC在12h时在培养 个1gCFU·mL1)单位需时间是1.829±0.0557基中巳无活菌存在。二氟沙星的5MIC和8MIC在 9h时在培养基中已无活菌存在。嗜水气单胞菌暴

东 北 农 业 大 学 学 报 第 34卷 过 夜 ，计 数 应 少 于 5个 菌 落 者 ，作 为 该 药物 的 最 低 杀 菌 浓 度 (MBC)。 相 同过 程 重 复 5次 。 1．2．2 MBC／MIC 的值 分 别 用各 药 对 嗜水气 单 胞 菌 的 MBC值 除 以 相 应 的 MIC值 ，其 商 即 为 二 者 的 比 率 。将 其 作 为评 价 这 几 种 药 物 抗 菌 效 力 的 参 数 之 一 。 1．2．3 细 菌计 数 以 0．85 无 菌 生 理 盐 水 作 为 细 菌 计 数 的 稀 释 液 ，对 菌 液 进 行 10～ 10 倍 系 列 稀 释 后 ，取 0．10mL置 于 普 通 琼 脂 平 板 上 ，每 个 稀 释 度 3 只平板 ，30℃过夜培 养后 ，对菌 数在 30~300之 间的 平 板 进 行 菌 落 计 数 ，取 其 平 均 值 ，单 位 为 CFU · mL_。。 1．2．4 嗜 水 气 单 胞 菌生 长 曲 线 及 对 数 期 菌悬 液 的 制作 于 生 长 有 嗜 水 气 单 细 胞 的琼 脂 平 板 上 挑 取 1 个 菌 落 ，接 种 于 10mL30℃预 温 的 蛋 白 胨 水 中 ，置 30~C恒 温 培 养 箱 中培 养 12h后 ，取 50 菌 液 接 种 于 10mL 预 温 的 蛋 白胨 水 中 培 养 ，然 后 分 别 于 0， 0．25，0．5，1，2，3，4，6，8，10h取 0．1mL 菌 液 进行 细菌计数 ，重复 3次 ，取其平均值 。将细菌计数 所 得 各 时 间点 CPU ·mL-1值 取常 用 对数 ，以 其为 纵 轴 ，以孵育 时 间 (h)为 横 轴 ，建立 细 菌 生长 曲线。 根 据 细 菌 生 长 曲线 的 结 果 ，制 作 对 数 生 长 期 细 菌 。由 培 养 12h后 ，取 50uL菌 液 接 种 于 10mL的 蛋 白胨 水 中 ，培 养 10h，使 细 菌 在 10卜 CFU ·mL_。，即 为 对 数 生 长 期 菌 悬 液 。 1．2．5 抗 菌 药 的 杀 菌 动 力 学 曲 线 取 0．10mL 200×MIC 或 (500× MIC、800× MIC)抗 菌 药 液 加 入 8．90mL 30~C预 温 的 蛋 白胨 水 中 ，将 对 数 生 长 期 细 菌 原 液 用 生 理 盐 水 稀 释 10-1后 取 1mL 加 入到 已 加抗菌药 的蛋白胨水 中。立 即置于 30℃恒温培 养箱 中 培 养 ，然 后 分 别 于 0，0．5，1，1．5，2，3，4，5，6， 8，12h取 0．10mL菌 液 进 行 细 菌 计 数 。重 复 3次 ， 取 其 平 均 值 。 每 次 实 验 做 一 个 不 加 任 何 抗 菌 药 的 对 照 并 于 0，0．5，1，1．5，2，3，4h取 0．10mL 菌 液 进 行 细 菌计 数 。 2 结 果 2．I 盐酸环丙 沙星、乳酸环 丙沙星 、恩诺沙星 、单诺 沙 星 、二 氟沙 星对 嗜水 气单 胞 菌 的体 外 抑 、杀菌 作 用 。 结 果见表 1。这几种 氟喹诺 酮类药物 对 嗜水气 单胞 菌均 有较好 的抑 菌杀 菌活性 ，但在这 几种 药物 当中 ，盐 酸环 丙沙 星和乳酸 环丙 沙 星的药 效表 现 尤 为 突 出 ，他 们 对 嗜 水 气 单 胞 菌 的 MIC 都 为 0．00625 平板挑取 单个菌落 接种于 10mL蛋白胨水 中 ，30~C ug·mg_。，MBC都为 0．025lag‘mL_。。 表 1 几 种 氟喳 诺酮 类药 物对 嗜水 气单 胞 菌 的 MIC、MBC(~ ·mL-1) Table 1 The M IC and M BC ofdifferentflupquinoloneonA ．hydrophila 2．2 嗜 水 气 单 胞 菌 的生 长 曲 线 嗜 水 气 单 胞 菌 经 过 预 培 养 接 种 至 新 鲜 的 培 养 基 中的 生 长情 况见 图 1，由图 1可 见嗜 水气单 胞 菌经 过 预培养接 种至新 鲜的培 养基 中一般 经过 2h后进 入 对 数 生 长 期 ，对 数 生 长 期 一 般 持 续 6h，即 该 菌 在 蛋 白 胨 水 中 生 长 8h以 后 进 入 对 数 生 长 末 期 ，培 养 10h后 的 细 菌 的 浊 度 达 到 10 CFU ·mL 后 ，生 长速度减慢 并逐渐趋于恒 定 。在对 数生长期 中，嗜水 气 单 胞 菌 在 蛋 白 胨 水 中 进 入 对 数 生 长 期 后 ，增 加 一 个 1g(CFU ·mL )单 位 需 时 间是 1．829± 0．0557 h。 2．3 盐酸环丙 沙星、乳酸环 丙沙星 、恩诺沙 星 、单诺 沙星 、二氟沙星 对嗜水气单胞 菌的杀菌 曲线 盐 酸 环丙 沙星、乳酸 环丙 沙星 、恩 诺沙 星 、单 诺 沙 星 、二 氟 沙 星 分 别 以 2，5，8M IC浓 度 对 浊 度 为 10 CFU ·mL-1的 嗜 水 气 单 胞 菌 的 杀 菌 曲 线 (见 图 2～ 5)。所 有 药 的 2MIC 浓 度 对 浊 度 为 10 CFU ·mL-1的嗜水 气 单胞 菌 的 7h以 内是 随时 间 的增加菌数 减少 ，7h以后活菌数开始增 加 。恩诺沙 星 和 单 诺 沙 星 的 5MIC和 8MIC在 12h时 在 培 养 基 中 已无 活 菌 存 在 。二 氟 沙 星 的 5MIC 和 8MIC 在 9h时 在 培 养 基 中 已无 活 菌 存 在 。 嗜 水气 单 胞 菌 暴 维普资讯 http://www.cqvip.com

维普资讯htp/www.cqvip.com 4期 杨雨辉等:几种氟硅诺酮类药物对喧水气单胞菌体外药效学研究 露于不同药物的不同浓度中3h内菌数减少情况见数减少的1g值之间差异显著(P<0.05)但从5 表2,药物的杀菌速率并非单纯的随药物的浓度增MC浓度到8MIC逍芳在3h内菌数减少的1g值 大,这几种药物从2MIC到5MIC浓度在3h内菌之间差异不显著(P>0.05)。 表2嘯水气单胞菌暴露于不同浓度药物中3h内活曹数减少的值(1gCFU·mL1,x士S.E.,n=3) Table 2 The decreasing logarithmic value of the amount of A. hydro phila exposed to diffenent concentration of different fluoquinolone in three hours(lg CFV. ml-I X+ SE,n= 3) 水气单胞菌.hydr 2 MIC 5 MIC 8 MIC 盐酸环丙沙星 Ciprofloxacin hydrochloride 0.9047士0.1341 2.2143±0.0463 乳酸环丙沙星 Ciprofloxacin lactate 1.0120士0.2148 2.2707±0.1III 2.3387士0.0738 恩诺沙星 Encrofloxocin 0.8343±0.0529 2.5560士0.1128 单诺沙星 Danofloxacin 1.8883士0.17 1.9757士0.1160 氟沙星 Difloxacin 1.4887士0.1533 3.5053±0.2423 3.6130士0.2427 a sMIC 时问(h) 时间(h) 图1嗜水气单胞曹的生长曲线 图2盐酸环丙沙星不同药物 图3乳酸环丙沙星不同药物 Fig. 1 The growth curve of 浓度杀曹曲线 浓度的杀菌曲线 A. hydro phila Fig. 2 The killing A hydrophila kinetic Fig 3 The killing A hydro phila curve of Ciprofloxacin hydrochloride kinetics curve of Ciprofloxacin lactate 01214·0MC2 +8MIC 101214+oMC1 时间(h) 图4恩诺沙星不同药物浓度 图5单诺沙星不同药物浓度 图6二氟沙星不同药物浓度 杀菌曲线 杀菌曲线 的杀曹曲线 Fig4 The killing A hydrophile Fig. 5 The killing A hydrophila Fig. 6 The killing A hydro phila kinetics curve of enrofloxacin kinetics curve of danofloxacin kinetics curve of difloxacin

第 4期 杨雨 辉等 ：几种 氟硅 诺酮类 药 物对 嗜水气 单胞 菌体外 药效 学研 究 ·433· 露于不 同药物的不 同浓度 中 3h内菌数减少情 况见 表 2，药物 的 杀菌 速率 并 非单 纯 的随药 物 的浓度 增 大 ，这 几 种 药 物 从 2M IC 到 5M IC 浓 度 在 3h内菌 数 减 少的 1g值 之 间差异 显著 (P < 0．05)但 从 5 M IC 浓 度 到 8MIC逍 芳 在 3h内菌 数 减 少 的 1g值 之 间 差 异 不 显 著 (P > 0．05)。 表 2 嗜水 气单 胞菌 暴 露于 不 同浓 度药 物 中 3h内活 菌数 减 少 的值 (1gCFU ·mL_。， 士 ．E．，，l一3) Table 2 The decreasing logarithm icvalue oftheam ountofA．hydrophilaexposed to diffenentcorcentration ofdifferent fluoquinoloneinthreehours(1gCFV ·ml一 士 ．E ，，l一 3) 时 问(h) ￡ ● 时问(h) 图 1 嗜水 气 单胞 菌 的生 长 曲线 图 2 盐酸 环 丙沙 星不 同药 物 Fig．1 Thegrowthcurveof ． 浓 度杀 菌 曲线 A．hydrophila Fig．2 The killing A．hydrophilakinetics curv eofCiprofloxacin hydrochloride I ， E ● 一 0 时问 (h) 图 4 恩诺 沙星 不 同药 物浓 度 杀菌 曲 线 Fig．4 ThekillingA ．hydrophila ki neticscurv e ofencrofloxacin I． ￡ ● 0 2MIC · 5M IC + 8MIC ·0MIC 时间 (h) 4 图 3 Fig．3 ki netics 时间 (h) 乳酸 环 丙 沙星 不 同药 物 浓度 的 杀菌 曲线 Theki llingA．hydrophila carv eofCiprofloxacin lactate 图 5 单 诺沙 星不 同药 物 浓度 杀 菌 曲线 Fig．5 The killingA ．hydrophila ki netics curveofdanofloxacin 时 问(h) 十 2M IC ‘．5MIC + 8M IC ·0M IC 图 6 二氟 沙星 不 同药 物 浓度 的杀 菌 曲线 Fig．6 Th eki llingA．hydrophila ki neticscurveofdifloxacin 维普资讯 http://www.cqvip.com

维普资讯htp/www.cqvip.com 434· 东北农业大学学报 第34卷 3讨论 根据雷军等报道,氟喹诺酮类药物对敏感菌 杀菌作用的量效关系呈双相变化,这种变化主要是 本研究所选用药物均为第三代喹诺酮类药物。由于氟喹诺酮类药物的杀菌作用与其抑制细菌的 这几种药物中,盐酸环丙沙星和乳酸环丙沙星对嗜水DNA合成有关,且须与RNA和蛋白质的不断合成 气单胞菌的最小抑菌浓度都为0.00625·mL 为前提条件:其在较高浓度时杀菌作用逐渐减弱,与 本实验测得的环丙沙星对嗜水气单胞菌最小抑菌浓该类药物能进行性抑制细菌的RNA合成,继之蛋 度的结果与蒋志伟等报道的盐酸环丙沙星对从惠白质合成受阻有关,即药物浓度在1/4MIC-MBC 病河蟹和患病鲫鱼分离的嗜水气单胞菌的MIC范范围内时杀菌作用随浓度的增加而增强,以后趋于 围(0.0049~0.0098讴g·mL-1)相符。这说明从不坪值。本研究这几种药物的从2MIC到5MIC浓度 同地区和感染不同动物分离的嗜水气单胞菌对环丙杀菌活性显著增加,但5MIC浓度和8MIC浓度在 沙星的敏感性基本上相同。陈昌福等(报道了24种3h内的杀菌活性虽有所增加但这种增加之间的差 嗜水气单胞菌对各类抗生素敏感性,其中先锋莓素异不显著(P>0.05)。该实验结果与文献报道结果 I和先锋霉素Ⅳ、诺卡霉素、洁霉素、林可霉素、杆菌相符。 肽、四环素、氯霉素、土莓素、链霉素、卡那霉素、庆大 参考文献 霉素、红霉素、交沙霉素对这24种嗜水气单胞菌的 最小MIC值分别为盐酸环丙沙星和乳酸环丙沙星1) Endo t, Ogishima k, Hayasaka H,eal. Application of oxolin 对嗜水气单胞菌的MIC值的16,8,62.4,4,4,8 acid a chemotherapeutic agent against infectious diseases 4,8,4,4,4,16,8倍。由此可见盐酸环丙少星和 fishes 1. Explanation of chemotherapeutic effects by whole body autobacteriography CJ). bulletin of the Japanese Socie 乳酸环丙沙星和其他药品相比对嗜水气单胞菌具有 of Scientific Fisheries, 1973, 39(2):173-17 较高的抗菌活性。本试验中其他几种喹诺酮类药物(2)汪开.硅诺酮类抗菌鱼药的开发利用CJ.淡水渔业,197 对嗜水气单胞菌的抗菌活性虽不如盐酸环丙沙星和 27(2):22-25. 乳酸环丙沙星,但和其他各类抗生素对该菌的抗菌3)李键,王群孙修海等恶酸对水生生物细菌荆防治效果及 活性相比,也表现了强大的抗菌活性 留的研究[〕.中国水产科技,2001,9,8(3),45-49 [4) Heo G,-J, Seo, J,-J. Efficacy of ciprofloxacin against 不同抗生素对不同的细菌MBC/MIC的比值 lected fish pathogenes in cultured fish OJ). B European associa 不同),本试验使用的几种氟喹诺酮类抗菌药物的 ion of fish pathologists. 1997, 17(1):8-12. ABC/MIC的比值范围为2~4,这一结果符合该类5)蒋志伟王宝安,王水坤等·环丙沙星对水产动物气单胞菌的 药物的作用特点9),也进一步证明氟喹诺酮类药物 药效研究可〕.兽药与饲料添加剂.1999,4(3) 对嗜水气单胞菌良好的抗菌效果。 〔6)李军,黎志强,樊品科,氟喳诺酮类药物对草鱼常见病原菌体 外抑菌试验〕中国善药杂志,1999,33(4):25-27 细菌接种量对药物MIC和MBC的测定有 〔7〕戴自英,刘裕昆,汪复,等、临床抗菌药物学[M)北京:人民 定的影响,由于我们在测各种药物的MIC和MBC 卫生出版社,1985.6—8 时选用的细菌浊度为105CFU·mL,而在研究杀8陈昌福,王敏、嘈水气单胞菌对各类抗生素的敏感性测定[J 菌动力学曲线时选用的细菌浊度为10-CFU 淡水渔业,199626(6),3-6 mL-,所有在研究这5种氟喹酮类药物不同浓度的9) ugeon H,thomas v, Gunlardeau,ana. ntibacterial ac 杀菌活性时,2MIC浓度对浊度为106CFU Vet Pharmacol therap. 1997. 20, 21-86. mL的嗜水气单胞菌的杀菌抑菌活性一般都仅维(10雷军,王生,黎世能,氟喷诺酮类药物抗菌作用的量效关系 持7个月。各种药物之间杀菌活性的不同主要是由 研究[.中国抗生素杂志,199318(3):229-233 不同药物的不同结构和不同性质造成的

东 北 农 业 大 学 学 报 第 34卷 3 讨 论 本 研究所 选用 药物均 为第 三代 喹诺 酮类药 物 。 这 几 种药 物 中 ，盐 酸 环丙 沙星 和 乳 酸 环 丙 沙 星对 嗜水 气单胞菌的最小抑 菌浓度 都为 0．00625ug·mL一。 本实验测得 的环丙沙星对 嗜水气单胞菌最小抑 菌浓 度的结果 与蒋志伟等 报道 的盐酸环丙 沙星对从 患 病河蟹 和 患病 鲫鱼分 离 的嗜水 气单 胞菌 的 MIC范 围 (0．0049--0．0098峪 ·mL-1)相符 。这说 明从不 同地 区和感染 不同动物分离 的嗜水气单胞 菌对 环丙 沙星 的敏感性 基本上相 同。陈 昌福等“报道 了 24种 嗜水气 单胞 菌对各 类抗 生素 敏感性 ，其 中先 锋霉 素 I和 先 锋 霉 素 IV、诺 卡 霉 素 、洁 霉 素 、林 可 霉 素 、杆菌 肽 、四 环 素 、氯 霉 素 、土 霉 素 、链 霉 素 、卡 那 霉 素 、庆 大 霉 素、红 霉素 、交 沙霉 素对这 24种 嗜水 气单 胞菌 的 最 小 MIC值 分别 为盐 酸环 丙沙星 和乳 酸环 丙沙星 对 嗜水气 单胞菌 的 MIC值的 l6，8，62．4，4，4，8， 4，8，4，4，4，16，8倍 。由 此 可 见 盐 酸 环 丙 少 星和 乳酸环丙 沙星和其他药 品相 比对嗜水气单胞 菌具有 较高 的抗 菌活性 。本试验 中其 他几种喹诺酮类 药物 对嗜水气单 胞菌的抗菌活性 虽不如盐酸环丙 沙星和 乳酸 环丙沙 星 ，但和其 他各 类抗 生素对 该 菌的抗 菌 活 性 相 比 ，也 表 现 了 强 大 的 抗 菌 活性 。 不 同抗 生 素对 不 同的 细 菌 MBC／MIC的 比值 不 同CSJ，本试 验使用 的几 种氟 喹诺 酮类 抗菌 药物 的 MBC／MIC 的 比值 范 围 为 2～ 4，这 一 结 果 符 合 该 类 药物 的作 用特 点。，也进 一步证 明氟喹 诺酮 类药物 对 嗜水气 单胞菌 良好 的抗 菌效果 。 细 菌 接 种 量 对 药 物 MIC 和 MBC 的 测 定 有 一 定 的 影 响 ，由 于 我 们 在 测 各 种 药 物 的 MIC 和 MBC 时 选 用 的 细 菌 浊 度 为 10CFU -mL_。，而 在 研 究 杀 菌 动 力 学 曲线 时 选 用 的 细 菌 浊 度 为 10 CFU · mL_。。所有 在研究这 5种氟喹酮类药物 不同浓度的 杀 菌 活 性 时 ，2MIC浓 度 对 浊 度 为 10 CFU · mL 的 嗜水气单 胞 菌 的杀 菌抑 菌活性 一般 都 仅维 持 7个 月。各种 药物 之间杀菌 活性 的不同主要是 由 不同药物的不 同结 构和不同性质造成 的 。 根 据 雷 军 等 n∞报 道 ，氟 喹 诺 酮 类 药 物 对 敏 感 菌 杀菌作 用的量 效关 系呈双 相变 化 ，这种 变化 主要 是 由于氟 喹诺 酮类 药 物 的杀 菌作 用 与 其 抑制 细 菌 的 DNA 合 成 有 关 ，且 须 与 RNA 和 蛋 白 质 的 不 断 合成 为前提条件 ：其在较高浓度 时杀菌作用逐渐减 弱 ，与 该类 药物 能进 行性 抑制 细 菌 的 RNA 合成 ，继 之 蛋 白质 合成 受阻 有关 ，即药 物浓 度在 l／4MIC—MBC 范 围 内 时 杀 菌 作 用 随 浓 度 的 增 加 而 增 强 ，以 后 趋 于 坪值 。本研 究这 几种药物 的从 2MIC到 5MIC浓 度 杀菌活性 显著增 加 ，但 5MIC浓 度和 8MIC浓度 在 3h内的杀菌活性 虽有所 增 加但这种 增加 之间的 差 异 不 显 著 (P> 0．05)。该 实 验 结 果 与文 献 报 道 结 果 相 符 。 参 考 文 献 [1) Endo T 。O gishim ak，Hayasaka H ，eta1．A pplication ofoxolin— ic acid a chemotherapeutic agentagainstinfectious diseases in fishes I ．Explanation of chem otherapeutic effects by w hole body autobacteriography[J)．bulletin ofthe Japanese Society ofScientificFisheries。1973，39(2)ll73— 177． (2) 汪开抗 ．硅诺 酮类 抗 菌鱼药 的 开发 利 用 [J)．淡 水 渔业 ，1997， 27(2)t22— 25． [3) 李缝 ，王群 ，孙修 涛 ，等 ．恶 喹酸对 水 生生物 细 菌病 防治效 果及 残 留的研 究[J)．中国水产 科技 ，2001，9，8(3)，45—49． [43 HeoG ，一 J．，Seo，J，一 J．Efficacyofciprofloxacin againstse— lected fish pathogenesincultured fish[J]．B European associa— tion offish pathologists．1997，17(1)l8一 l2． [5) 蒋志 伟 ，王宝安 ，王永 坤 ，等 ．环 丙沙 星对水 产 动物 气单胞 菌 的 药效 研究 (J)．兽药 与饲 料添 加剂 ．1999，4(3)：3—5． [6) 李 军 ，黎志强 ，樊 品 科 ．氟 喹诺 酮 类药 物 对 草鱼 常 见病 原 菌体 外 抑菌试 验 [J) 中国兽 药杂 志 ．1999，33(4)：25—27． [7) 簸 自英 ，刘 裕 昆 ，汪 复 ，等 临 床抗 菌 药 物学 [M)．北 京 ：人 民 卫 生出版社 ，1985．6-8． [8) 陈 昌福 ，王敏 嗜水 气单胞 菌对 各类 抗生 索的 敏感性 测 定 [J)． 淡水 渔业 ．1996，26(6)。3—6． [9) Drugeon H，ThomasV，Guillardeau L，eta1．Antibacterialac— tivityofmarbofloxacinagainsebovinerespiratory isolates(J)． V etPharm acoltherap 1997，20：2l一 86． CIO)雷 军 ，王浴 生 ，黎 世 能 ．氟喹 诺酮 类 药物 抗 菌作 用 的量 效 关 系 研 究 [J)．中 国抗 生索 杂 志 ．1993，18(3)t229—233． 维普资讯 http://www.cqvip.com

维普资讯htp:/www.cqvip.com 第4期 杨雨辉等;几种氟硅诺酮类药物对嘈水气单胞菌体外药效学研究 435 Pharmacodynamics of several fluoroquinolones against A. hydrophila in vitro YANG Li-hui, TONG Heng-min, LU Tong-yan, ZHAO Ji-wei, LIU Hong-bai, MA L (1. Heilongjiang River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Harbin Heilongjiang 150070, PRC 2. Northeast Agricultural University Harbin Heilongjiang 150030 PRC) Abstract: The MIC and MBC of Ciprofloxacin hydrochloride, ciprofioxacin lactate, Enrofloxacin Danofloxacin and Difloxacin were estimated in the paper. Their MIC is 0. 00626,0.00625,0.0125,0 05 0.2 ug. mL-I, respectively. Their MBC is 0. 025,0.025,0 05,0.1,0.8 Hg.-,respectively. The law of the Fluoroquinolones against A hydrophila i o shows that the difference is significant between 2 MIC and 5 MIC, isn't significant between 5 MIC and 8 MIC. There are different character of killing A hydro phila in the different Fluoroquinolones Key words: fluoroquinolones; A hydrophila; pharmacodynamics 作者简介:杨雨辉(1971一),男,黑龙江人,现为中国水产科学研究院黑龙江省水产研究所助理研究员 东北农业大学动医学院在读博士生

第 4期 杨雨辉 等 ；几种 氟硅诺 酮类 药物对 嗜水 气单 胞菌体 外 药效 学研 究 ·435· Pharm acodynam ics of severalflu0r0quin0l0nes againstA．hydrophila in vit YANG Li—hui，TONG Heng—rain，LU Tong—yan，ZHAO ji—wei LIU Hong—bai．M A Li (1．HeilongiiangRiverFisheriesResearch Institute，ChineseAcademyofFisherySciences，HarbinHeilongiiang150070，PRC 2．NortheastAgriculturalUniversityHarbinHeilongjiang150030PRC) Abstract：The M IC and M BC of Ciprofloxacin hydrochloride，ciprofioxacin lactate，Enrofloxacin， Danofloxacin and Difloxacin were estim ated in the paper．TheirM IC iS 0。00626，0。00625，0．0125，0．05， 0．2 lag ·m L一1，respectively。Their M BC is 0。025，0．025，0．05，0．1，0．8 lag ·mL一 ，respectively．The law ofthe Flu0r0auin0l0nes againstA ．hydrophila in vitroshows thatthe difference is significant between 2 M IC and 5 M IC ．isn’tsignificant between 5 M IC and 8 M IC．There are differentcharacter of killing A 。 hydrophilain the differentFlu0r0quin0l0nes． Key words：flu0r0quin0l0nes；A。hydrophila；pharm acodynam ics 作 者简介 ：杨 雨辉 (1971一)，男 ，黑龙 江人 ，现 为中 国水 产科学研 究院 黑龙 江 省水产 研究 所助理 研究 员 ， 东北农业大学动 医学院 在读博士生 。 维普资讯 http://www.cqvip.com