1、基因突变的诊断 (1)点突变的诊断 ①诊断已知的点突变：对于突变位点已被阐明的一些 遗传病，可以采用PCR/ASO(allele specific oligonucleotide,.ASO,等位基因特异性寡核苷酸)探 针法进行检测。在扩增DNA片段后直接与相应寡核苷酸探 针杂交，即可明确诊断是否有突变以及突变是纯合子还是 杂合子
①诊断已知的点突变：对于突变位点已被阐明的一些 遗传病 ， 可 以 采 用 PCR ／ ASO(allele specific oligonucleotide，ASO，等位基因特异性寡核苷酸)探 针法进行检测。在扩增DNA片段后直接与相应寡核苷酸探 针杂交，即可明确诊断是否有突变以及突变是纯合子还是 杂合子。 1、基因突变的诊断 （1）点突变的诊断
例如，已知某位点正常碱基为C,突变为T(即C→T): 引物1 C→T 3 突变位点 引物2 在该位点两端设计引物1、2进行PCR扩增，得到产 物后进行斑点杂交或狭缝杂交。 针对该突变分别合成一对寡核苷酸片段作为探针； 其中一个为正常探针，与正常序列互补（中央碱基为G); 另一个是突变探针，与突变序列互补（中央碱基为A)
在该位点两端设计引物1、2进行PCR扩增，得到产 物后进行斑点杂交或狭缝杂交。 针对该突变分别合成一对寡核苷酸片段作为探针； 其中一个为正常探针，与正常序列互补(中央碱基为G)； 另一个是突变探针，与突变序列互补(中央碱基为A)。 3′ 突变位点 5′ 引物2 引物1 例如，已知某位点正常碱基为C，突变为T(即C→T)： C→T
突变碱基及对应的正常碱基均位于寡核苷酸片段的中央， 因为只有在这个位置时，该碱基与被探测的DNA上相应碱基 或匹配或错配，对二者结合力影响最大。严格控制杂交 及洗脱条件，使只有与靶序列完全互补的探针才能结合在 等位基因片段上，而中央碱基与靶序列不匹配的探针则不 能结合在等位基因片段上
突变碱基及对应的正常碱基均位于寡核苷酸片段的中央， 因为只有在这个位置时，该碱基与被探测的DNA上相应碱基 或匹配或错配，对二者结合力影响最大。严格控制杂交 及洗脱条件，使只有与靶序列完全互补的探针才能结合在 等位基因片段上，而中央碱基与靶序列不匹配的探针则不 能结合在等位基因片段上
结果分析：a.如果从受检者DNA扩增的PCR产物与正常 探针杂交，而不和突变探针杂交，表示受检者不存在这种 突变基因；b.如果只有突变探针可以杂交，则说明突变基 因是纯合子；c.若正常探针与突变探针都可杂交，说明突 变基因是杂合子(2倍体，等位基因)；d.如果患者的 DNA与正常探针以及所有已知突变基因的寡核苷酸探针均不 能杂交，则提示患者的缺陷基因不属于先前己发现的突变 类型，而很可能是一种新的突变类型
结果分析：a. 如果从受检者DNA扩增的PCR产物与正常 探针杂交，而不和突变探针杂交，表示受检者不存在这种 突变基因；b. 如果只有突变探针可以杂交，则说明突变基 因是纯合子；c. 若正常探针与突变探针都可杂交，说明突 变基因是杂合子（2倍体,等位基因）；d. 如果患者的 DNA与正常探针以及所有已知突变基因的寡核苷酸探针均不 能杂交，则提示患者的缺陷基因不属于先前已发现的突变 类型，而很可能是一种新的突变类型
进而利用DNA芯片技术，除了上述两个探针外，再 设计两个探针，其中央碱基分别为C和T。这4个探针可原 位合成或预合成后显微打印在支持物上。杂交分析同上。 如果扩增产物与中央碱基为C或T的探针杂交，则可清楚地 表明该缺陷基因的新的突变类型为C→G或C→A。 A G 芯片设计 正常 CT CT C→G C→A 探针定位 (纯合子)（杂合子) 新突变 新突变 点突变检测荧光亮点模式
进而利用DNA芯片技术，除了上述两个探针外，再 设计两个探针，其中央碱基分别为C和T。这4个探针可原 位合成或预合成后显微打印在支持物上。杂交分析同上。 如果扩增产物与中央碱基为C或T的探针杂交，则可清楚地 表明该缺陷基因的新的突变类型为C→G或C→A。 A T C G 芯片设计 探针定位 （纯合子）（杂合子） 新突变 新突变 正常 C →T C →T C →G C →A 点突变检测荧光亮点模式