ELISA @ELISA的基本原理和方法 @ELISA的种类和变化 @ELISA的特点 @ELISA的应用实例
ELISA的基本原理和方法 ELISA的种类和变化 ELISA的特点 ELISA的应用实例 ELISA
4.2.1基本原理 它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接， 然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。 测定的对象可以是抗体也可以是抗原。 在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物） ③酶作用的底物（显色剂）
4.2.1 基本原理 它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接， 然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。 测定的对象可以是抗体也可以是抗原。 在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物） ③酶作用的底物（显色剂）
测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上， 但仍保留其免疫活性， 然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物 (标记物)，此偶联物仍保留其原免疫活性与 酶活性， 当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应 结合后，再加上 ELISA REAGENTS 酶的相应底物， Substrate (color reaction) 即起催化水解或 Enzyme-conjugated anti-FeLV antibody 2 氧化还原反应而 呈颜色。 FeLV in serum Anti-FeLV antibody 1 (capture antibody)
• 测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上， 但仍保留其免疫活性， • 然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物 （标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与 酶活性， • 当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应 结合后，再加上 酶的相应底物， 即起催化水解或 氧化还原反应而 呈颜色
颜色反应的深浅与相应的抗体或抗原量成正 比，因此可借助于颜色反应的深浅来定量抗 体或抗原。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子 显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪） 加以测定。 其方法简单，方便迅速，特异性强
➢ 颜色反应的深浅与相应的抗体或抗原量成正 比，因此可借助于颜色反应的深浅来定量抗 体或抗原。 ➢ 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子 显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪） 加以测定。 ➢ 其方法简单，方便迅速，特异性强
4.2.2酶及其底物 酶结合物是酶与抗体或抗原，半抗原在交联剂作 用下联结的产物。是ELISA成败的关键试剂，它 不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还具有酶促 反应，显示出生物放大作用，但不同的酶选用不 同的底物，将得到不同的颜色反应
4.2.2 酶及其底物 酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原在交联剂作 用下联结的产物。是ELISA成败的关键试剂，它 不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还具有酶促 反应，显示出生物放大作用，但不同的酶选用不 同的底物 ，将得到不同的颜色反应