(1)加四环素； (2)Tetr Kans Tetr Kanr; (3)重新点种在含Tet、Kan和只加Tet的 平板上，选择只在Tet平板上生长的菌落， 即为所需的重组体
• （1）加四环素； • （2）Tetr Kans和 Tetr Kanr； • （3）重新点种在含Tet、Kan和只加Tet的 平板上，选择只在Tet平板上生长的菌落， 即为所需的重组体
● 当利用质粒载体从基因组中克隆得到含有目标基因的 DNA片段后，通过限制性内切酶切割该重组DNA可制作 该目标DNA片段的物理图谱。例如，选用3种内切酶切割 重组pBlue-A,通过agarose电泳分析，得到如下大小的 DNA片段。请标出酶切位点A的相对位置。 EcoRI:10kb 。 HindIII:10kb A酶：4kb,3.5kb,2.5kb HindIII:和EcoRI:4kb,6kb A酶和EcoR:3.5kb,2.5kb,2.5kb,1.5kb A酶和HindⅢ：4kb,2.5kb,1.0kb,2.5kb
• 当利用质粒载体从基因组中克隆得到含有目标基因的 DNA片段后，通过限制性内切酶切割该重组DNA可制作 该目标DNA片段的物理图谱。例如，选用3种内切酶切割 重组pBlue-A，通过agarose电泳分析，得到如下大小的 DNA片段。请标出酶切位点A的相对位置。 • EcoRI：10kb • HindIII：10kb • A酶：4kb, 3.5kb, 2.5kb • HindIII和EcoRI ：4kb, 6kb • A酶和EcoRI：3.5kb, 2.5kb, 2.5kb, 1.5kb • A酶和HindIII：4kb, 2.5kb, 1.0kb, 2.5kb
EcoRI 10000/0 9000 1000 8000 2000 pBlue-A 10000bps 3000 7000 600 4000 Hind]Ⅲ 500 A(8.5kb) A(5.0kb) A(2.5kb】
A(8.5kb) A(5.0kb) A(2.5kb)
第二节甲基化酶Methylase methyltransferase Methylation
第二节 甲基化酶 Methylase Methylation methyltransferase
、甲基化酶的种类 在真核和原核生物中存在大量的甲基化酶，保护 宿主DNA Dam甲基化酶：识别序列，GATC;甲基化位置： 腺嘌呤N6位置引入甲基。 Dcm甲基化酶：识别序列，CCAGG或CCTGG; 甲基化：在第二个C上C5位置上引入甲基
一、甲基化酶的种类 在真核和原核生物中存在大量的甲基化酶，保护 宿主DNA Dam甲基化酶：识别序列，GATC；甲基化位置： 腺嘌呤N6位置引入甲基。 Dcm甲基化酶：识别序列，CCAGG或CCTGG； 甲基化：在第二个C上C5位置上引入甲基