■常用的增变菌株为XL1-Red(mutDmutSmutT) ·构建目的基因重组质粒 ■将重组质粒导入增变菌株 对增变菌株进行多代扩增 ·提取增变菌株的重组质粒导入正常的大肠杆菌进行筛选 圈
▪ 常用的增变菌株为XL1-Red(mutDmutSmutT). ▪ 构建目的基因重组质粒 ▪ 将重组质粒导入增变菌株 ▪ 对增变菌株进行多代扩增 ▪ 提取增变菌株的重组质粒导入正常的大肠杆菌进行筛选
四、化学诱变 利用化学诱变剂处理双链DNA片断，将发生随机突变的片断 群体克隆到合适的宿主当中，构建成一个重组的突变体库， 并进行功能分析和鉴别。 常用的化学诱变剂有：亚硝酸、羟胺、亚硫酸氢盐或肼等。 应用大肠杆菌ug(缺少尿嘧啶糖基化酶)可以增加突变等频率。 ·通常使用单链为底物进行诱变，突变谱很窄，不能满足分析 蛋白质特定片断功能的需要。 目前已经很少应用
四、化学诱变 ▪ 利用化学诱变剂处理双链DNA片断，将发生随机突变的片断 群体克隆到合适的宿主当中，构建成一个重组的突变体库， 并进行功能分析和鉴别。 ▪ 常用的化学诱变剂有：亚硝酸、羟胺、亚硫酸氢盐或肼等。 ▪ 应用大肠杆菌ung- (缺少尿嘧啶糖基化酶)可以增加突变等频率。 ▪ 通常使用单链为底物进行诱变，突变谱很窄，不能满足分析 蛋白质特定片断功能的需要。 ▪ 目前已经很少应用
大 腺原吟(A) 次黄零（刊 胞密定(C) 脑密定(C) 乐吃定(U) 腺绿吟A)
羟胺类物质 作用专化：只与胞嘧啶起作用，使胞嘧啶C6位置上的氨基 羟化→变成象T的结合特性，DNA复制时与A配对→形成GC 与AT的转换 N-H NHCH 冠 Cylasine Hydraxyamnocyonne Aderine G=C A=T
羟胺类物质 作用专化：只与胞嘧啶起作用，使胞嘧啶C6位置上的氨基 羟化→变成象T的结合特性，DNA复制时与A配对→形成GC 与AT的转换
大 第二节、DNA体外重组 ■主要是指依赖序列同源性的DNA体外重组 ■从一组具有一定同源性的DNA出发，使DNA群体通过 同源序列介导进行体外合成，产生出各种突变的不同组 合，从而加速产生基因的多样性。 具体方法： DNA洗牌法 (DNA shuffling) 交替延伸法(staggered extension process) 随机引发重组(random-priming recombination)
第二节、DNA体外重组 ▪ 主要是指依赖序列同源性的DNA体外重组 ▪ 从一组具有一定同源性的DNA出发，使DNA群体通过 同源序列介导进行体外合成，产生出各种突变的不同组 合，从而加速产生基因的多样性。 ▪ 具体方法： ▪ DNA洗牌法（DNA shuffling） ▪ 交替延伸法（staggered extension process） ▪ 随机引发重组（random-priming recombination）