>体外诱变(in vitro mutagenesis):对克隆化的DNA进行诱变 处理，改变其核苷酸序列，从而获得突变基因，用于基因工 程、蛋白质工程等研究。 >与经典的诱变相比，体外诱变有无可比拟的优点 目的性强 可得到所有种类的突变：替换突变、插入突变、缺失突变 可是DNA全部或局部、可定向、可随机
➢体外诱变（in vitro mutagenesis）：对克隆化的DNA进行诱变 处理，改变其核苷酸序列，从而获得突变基因，用于基因工 程、蛋白质工程等研究。 ➢与经典的诱变相比，体外诱变有无可比拟的优点 目的性强 可得到所有种类的突变：替换突变、插入突变、缺失突变 可是DNA全部或局部、可定向、可随机
海 Mutagenesis Selected genes Library of mutant genes Sequencing or further rounds of Protein Mutagenesis expression and selection Screen or selection Proteins with desired Library of mutant property proteins Current Opinion in Chemical Biology 定向进化的原理
定向进化的原理
第一节随机突变 第二节DNA体外重组 第三节寡核苷酸介导的定点诱变 第四节嵌套缺失突变 圈
第一节 随机突变 第二节 DNA体外重组 第三节 寡核苷酸介导的定点诱变 第四节 嵌套缺失突变
第一节随机诱变 >随机诱变：随机的在已克隆的DNA中引入碱基置换突变， 改变其编码区编码的氨基酸序列，从而改造蛋白质的性质 和活性，以获得符合需要的蛋白质。 >特点：不需要有序列针对性的合理设计，引入突变的位置 及其性质是随机的。 >方法包括：错误掺入诱变、增变菌株诱变、盒式诱变和化 学诱变等
➢随机诱变：随机的在已克隆的DNA中引入碱基置换突变， 改变其编码区编码的氨基酸序列，从而改造蛋白质的性质 和活性，以获得符合需要的蛋白质。 ➢特点：不需要有序列针对性的合理设计，引入突变的位置 及其性质是随机的。 ➢方法包括：错误掺入诱变、增变菌株诱变、盒式诱变和化 学诱变等。 第一节 随机诱变
随机诱变成功的关键： >控制合适的突变频率：大多数突变都是有害的，编码的氨 基酸失去活性，只有少量的符合需要，因此突变频率太高 或太低都会淹没有益突变。理想情况是在目的基因当中有 1.5一5个碱基发生突变。 >定向筛选：采用灵敏有效的方法检测出有益突变
随机诱变成功的关键： ➢控制合适的突变频率：大多数突变都是有害的，编码的氨 基酸失去活性，只有少量的符合需要，因此突变频率太高 或太低都会淹没有益突变。理想情况是在目的基因当中有 1.5－5个碱基发生突变。 ➢定向筛选：采用灵敏有效的方法检测出有益突变