四膜虫rRNA前体自我剪接机制一L19RNA的形成 Intron Primary franscript 5'Exon UpA GpU- 3'Exon 3 5'-GMP(或G)的3'-OH充当亲 pG一OH 核基团攻击5断裂点 PGPA Itermediate U一OH GpU. =8" 5外显子的3'-0H成为亲核 基团，完成剪接反应 5'pGpA G—O五3 Spliced RNA UpU 3
四膜虫rRNA前体自我剪接机制－L19RNA的形成 5΄-GMP(或G)的3΄-OH充当亲 核基团攻击5΄断裂点 5΄外显子的3΄-OH成为亲核 基团，完成剪接反应
L19RNA的形成 5GAAAUAGCAAUAUUUACCUUUGGAGGGA ◆0t10 AHABEnn1st10◆ -19nt lced rRNA intron G-0H(3') 19 Nucleotides from 5'end L19IVS (5)UUGGAGGGA G-0H(3') (a)
L19 RNA 的形成 －19nt
L19 RNA: •具有高度的专一性 ·服从Michaelis-Menten动力学规律 ·Km=42×10-6M(以C为底物，催化其水解) kcat=33X10-3s-1 kcat/Km=10-3M1·L·s-1与RNase A极其相似 ·脱氧Cs是其竞争性抑制剂 Ki=260×10-6M 这些都是经典酶催化作用特征
L19 RNA： •具有高度的专一性 •服从Michaelis-Menten动力学规律 • Km＝42×10－6 M (以C5为底物，催化其水解) kcat＝33×10－3 s -1 kcat/Km= 10－3 M-1 · L · s-1与RNase A 极其相似 •脱氧C5是其竞争性抑制剂 Ki=260×10-6 M 这些都是经典酶催化作用特征
L-19RNA具有多种酶的功能 核苷转移酶 磷酸二酯酶 L-19 RNA 磷酸基转移酶 磷酸酯酶 冬转核苷酸作用 2CpCpCpCpC CpCpCpCpCpC+CpCpCpC (C5) (C6) (C4) 冬水解作用 CpCpCpCpC -CpCpCpC+pC (C5) (C4)
L-19 RNA 核苷转移酶 磷酸二酯酶 磷酸基转移酶 磷酸酯酶 L-19 RNA 具有多种酶的功能 ❖转核苷酸作用 2CpCpCpCpC CpCpCpCpCpC＋CpCpCpC （C5） （C6） （C4） ❖水解作用 CpCpCpCpC CpCpCpC＋pC （C5） （C4）
冬转磷酸作用 CpCpCpCpCp+UpCpU-CpCpCpCpC+UpCpUp (C5) (Cs) 冬去磷酸作用 CpCpCpCpCp CpCpCpCpC+Pi (Cs) 与DNA限制性内切酶相似 RNA限制性内切酶作用 5'CpUpCpUpN3'+G (与DNA限制性内切酶相似)
❖转磷酸作用 CpCpCpCpCp＋ UpCpU CpCpCpCpC＋ UpCpUp （C5） （C5） ❖去磷酸作用 CpCpCpCpCp CpCpCpCpC＋ Pi （C5） ❖RNA限制性内切酶作用 5 ' ~~~~~~~CpUpCpUpN~~~~~~~3 ' + G 5 ' ~~~~~~~CpUpCpU ＋ GpN~~~~3 ‘ (与DNA限制性内切酶相似) 与DNA限制性内切酶相似